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联合使用干细胞因子、FLT3配基与白介素2,7,15体外扩增人脐血来源CIK/NK细胞 被引量：17
1
作者 黎阳 黄绍良 +3 位作者 吴燕峰 魏菁 包蓉 周敦华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期350-354,共5页
通过干细胞因子 (SCF)、FLT3配基 (FL)联合白介素 (IL) 2 ,7,15等的不同组合体系体外扩增人脐血来源的CIK NK细胞 (CB CIK NK) ,探讨不同培养方式对CB CIK NK细胞诱导、扩增产率的影响。按诱导扩增体系的不同分 3组 :A组 (SCF +IL2 +IL7... 通过干细胞因子 (SCF)、FLT3配基 (FL)联合白介素 (IL) 2 ,7,15等的不同组合体系体外扩增人脐血来源的CIK NK细胞 (CB CIK NK) ,探讨不同培养方式对CB CIK NK细胞诱导、扩增产率的影响。按诱导扩增体系的不同分 3组 :A组 (SCF +IL2 +IL7+IL15 ) ,B组 (SCF +FL +IL2 +IL7+IL15 )和C组 (IL2 +IL7+IL15 ,对照组 ) ,培养 2 1天 ,检测CD3+ CD5 6 + CIK细胞、CD3- CD5 6 + NK细胞比例和扩增倍数。结果表明 :经 2 1天培养 ,A ,B及C组CIK细胞比例分别为 (19.84± 2 .93) %、(2 6 .2 0± 4 .0 5 ) %及 (2 4 .0 3± 4 .99) % ;而NK细胞的比例A、B及C组比例分别为 (4 9.6 0± 1.4 0 ) %、(5 1.16± 6 .4 5 ) %及 (30 .85± 8.12 ) %。含SCF +FL的B组扩增效率最高 ,其中CIK细胞的扩增倍数由对照组 (C组 )的 (5 75 81± 2 2 1.72 )倍增加至 (796 .0 9± 2 78.4 7)倍 (最高为 1313倍 ) ;NK细胞由对照组 (C组 )的 (30 .39± 14 .4 7)倍增加至 (6 5 .85± 30 .83)倍 (最高为 12 1.0 6倍 )。结论 :通过合适的细胞因子组合可以同时扩增CB来源的CIK NK细胞 ;联合诱导、扩增CB CIK NK细胞以采用含SCF +FL +IL2 +IL7+IL15的培养体系为佳。 展开更多
关键词 CIK/NK细胞 脐血 干细胞因子 FLT3配基 白介素2 白介素7 白介素15
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乳汁处理方法对检测HBV DNA结果的影响 被引量：13
2
作者 温旺荣 苏芳 +1 位作者 吴勇 曹燕 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期31-31,共1页
关键词 乳汁 乙肝病毒DNA 荧光定量PCR 血清 母婴传播
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血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化 被引量：13
3
作者 马丽萍 魏菁 +3 位作者 常建星 张呈 裴智信 杨秋红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期1564-1568,共5页
本研究探讨人血小板Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达及其在细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccsharide,LPS)诱导血小板活化中的作用。对15例健康人肘静脉抽血各20ml,制备富含血小板血浆(PRP)和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的... 本研究探讨人血小板Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达及其在细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccsharide,LPS)诱导血小板活化中的作用。对15例健康人肘静脉抽血各20ml,制备富含血小板血浆(PRP)和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS(0.2μ/ml)孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹(Western blot)方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达。结果表明:流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25.44%,凝血酶刺激后明显升高(32.34%,p<0.05),LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高(39.16%,p<0.01);在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果。Western blot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达(流式细胞术)在静止血小板分别为6.39%和2.45%,凝血酶刺激后明显增高,分别为42.68%和14.8%,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63.03%和13.94%,均明显高于仅用凝血酶的刺激组(p<0.001);抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达。结论:人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应。 展开更多
关键词 脂多糖 血小板 TLR4 CD62P CD40L
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阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究 被引量：4
4
作者 陈纯 黄绍良 +3 位作者 段连宁 李浩威 温冠媚 魏菁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期534-537,共4页
目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受... 目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB CH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,设单抗组 (加抗CD4 0L单抗 )和对照组 (不加单抗 ) ,初次混合淋巴细胞培养(MLR) 7天 ,在不同时间点采用3H TdR掺入法检测细胞增殖率 ,以ELISA法测定培养上清液中IFN γ、IL 2、IL 4、IL 10等的水平 ,第 5天采用流式细胞仪检测CD4 + T和CD8+ T细胞上CD2 5、CD6 9、CD4 0L和CD4 5RA的表达。再次MLR 5天 ,第 1、3、5天采用3H TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平。结果 :初次和再次MLR结果均显示 ,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组。初次MLR单抗组中CD4 + T和CD8+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;单抗组中CD4 + CD2 5 + T、CD4 + CD6 9+ T、CD8+ CD2 5 + T、CD4 + CD4 0L+ T和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而CD8+ CD4 0L+ T和CD4 + CD4 5RA +T细胞的比例与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL 4和IL 10几乎无法测出 。 展开更多
关键词 CD40-CD40L T细胞表型 细胞因子 分泌作用 免疫耐受
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糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞水平的影响 被引量：11
5
作者 黄花荣 刘甜甜 +3 位作者 魏菁 檀卫平 吴葆菁 麦贤弟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2204-2207,共4页
目的:探讨糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)水平的影响。方法:采用糖皮质激素吸入治疗70例发作期哮喘患儿,应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数。结果:糖皮质激素规则治疗后患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(7.05%... 目的:探讨糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)水平的影响。方法:采用糖皮质激素吸入治疗70例发作期哮喘患儿,应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数。结果:糖皮质激素规则治疗后患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(7.05%±1.61%)明显高于治疗前(5.62%±1.29%),P<0.01。完全控制组患儿外周血CD4+CD25+Tr水平最高(7.56%±1.88%),部分控制组患儿次之(7.09%±1.23%),控制不佳组患儿最低(6.11%±1.96%),差异均显著,P<0.05。经激素规则治疗的患儿外周血Tr水平(7.05%±1.61%)明显高于不规则治疗组患儿(5.91%±1.76%),P<0.01。结论:规则使用糖皮质激素吸入疗法可明显提高哮喘患儿外周血Tr水平,Tr水平与哮喘的激素治疗效果有关。 展开更多
关键词 CD4+CD25+调节性T细胞 哮喘 糖皮质激素类 吸入疗法 儿童
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血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化 被引量：6
6
作者 杨军 伍卫 +4 位作者 梁蔚文 王景峰 潘秋辉 方昶 黄至斌 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期292-296,共5页
【目的】研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43(Cx43)表达的变化及与细胞周期分布的关系。【方法】分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞... 【目的】研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43(Cx43)表达的变化及与细胞周期分布的关系。【方法】分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。【结果】血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M(二倍体)DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。【结论】血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞肥大 连接蛋白43 缝隙连接 细胞周期
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骨髓间质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究 被引量：8
7
作者 韦育林 伍卫 +3 位作者 王景峰 傅玉如 魏菁 邓义军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1090-1093,共4页
目的:体外培养并诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学和RT-PCR方法对诱导细胞进行鉴定。结果:诱导后细胞体积较... 目的:体外培养并诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学和RT-PCR方法对诱导细胞进行鉴定。结果:诱导后细胞体积较诱导前增大,而且更加细长,呈长梭形。14d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示诱导后部分细胞结蛋白(desmin)、横纹肌肌动蛋白(α-sarcomericactin)和心肌特异性肌钙蛋白(troponinI)呈阳性反应。RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达。结论:5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 阿扎胞苷 心肌细胞
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阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用 被引量：4
8
作者 钟英强 魏菁 +5 位作者 傅玉如 邵静 梁倚文 林燕华 刘娟 朱兆华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1981-1984,共4页
目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与si... 目的探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制。方法应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响。结果Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低。在2ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001)。随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48h后更明显;G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),G2-M期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),晚期凋亡细胞减少(P<0.05)。结论在一定浓度下,Lipo可影响细胞的生长、早期凋亡和细胞周期分布,因此,利用Lipo在不同的细胞系进行基因转染过程中Lipo应进行浓度梯度筛选。 展开更多
关键词 脂质体 LIPOFECTAMINE 胰腺肿瘤 Capan-2细胞 细胞生长 细胞凋亡 细胞周期 流式细胞术
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大鼠骨髓间质干细胞对同种骨髓移植后造血重建和免疫重建的作用 被引量：10
9
作者 雷俊霞 郭振宇 +7 位作者 赵东长 李红霞 余伟华 张秀明 郑芹 魏箐 李树浓 项鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1129-1132,共4页
目的:探讨大鼠骨髓间质干细胞(MSC)对同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建的影响。方法:建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过生存率分析、外周血象检测、免疫细胞计数和受体免疫功能检测,综合评价MSC对骨髓移植(bone marrowtransplantati... 目的:探讨大鼠骨髓间质干细胞(MSC)对同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建的影响。方法:建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过生存率分析、外周血象检测、免疫细胞计数和受体免疫功能检测,综合评价MSC对骨髓移植(bone marrowtransplantation,BMT)后造血重建和免疫重建的作用。结果:(1)MSC可促进BMT后造血重建:移植后30d,共移植组外周血白细胞、淋巴细胞和血小板数均高于单纯骨髓移植组;共移植组骨髓细胞数也高于对照组。(2)MSC可促进BMT后免疫重建:移植后30d,共移植组胸腺细胞数、脾细胞总数均高于骨髓单纯移植组;共移植组对ConA、LPS刺激的淋巴细胞增殖反应以及对第三体来源的同种混合淋巴细胞反应均强于单纯BMT组。结论:大鼠MSC与骨髓共移植对同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建有一定促进作用。 展开更多
关键词 间质干细胞 骨髓移植 造血复建 免疫复建
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广东地区汉族正常人群HLAE基因多态性研究 被引量：10
10
作者 甄子俊 方建培 +3 位作者 邓庆丽 徐宏贵 范丽安 黄绍良 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期783-787,共5页
为了检测广东地区汉族正常人群HLA E基因的多态性 ,并分析HLA E与典型HLA I类 (Ia)位点之间的连锁关系 ,采用PCR SSP方法检测广东地区 15 0个无血缘相关的正常人的HLA E基因型 ,同时用NIH标准微量淋巴细胞毒方法检测其中 10 6人HLA A , ... 为了检测广东地区汉族正常人群HLA E基因的多态性 ,并分析HLA E与典型HLA I类 (Ia)位点之间的连锁关系 ,采用PCR SSP方法检测广东地区 15 0个无血缘相关的正常人的HLA E基因型 ,同时用NIH标准微量淋巴细胞毒方法检测其中 10 6人HLA A , B基因型 ,对HLA E与HLA A , B位点之间作连锁分析。结果发现 ,在广东地区汉族正常人群中共检出 3个HLA E等位基因 :HLA E 0 10 1,HLA E 0 10 3 1,HLA E 0 10 3 2 ,其基因频率分别为 4 5 .3 3 % ,3 2 .3 3 % ,2 2 .3 3 %。未检出E 0 10 2和E 0 10 4。HLA E与HLA A , B位点之间B15 / E0 10 3 2及A2 /E 0 10 3 2存在连锁不平衡 ,除此之外其他任何两位点之间不存在连锁不平衡。结论 :HLA E高度保守的多态性提示其生物学特性可能有别于HLA Ia分子。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 HLA—E基因 基因多态性 连锁不平衡
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慢病毒载体携带的VEGFR_2 shRNA对HL60的体外杀伤作用 被引量：6
11
作者 郭海霞 李文益 +4 位作者 徐令 苏浩彬 黎阳 夏焱 梁立阳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1053-1057,共5页
目的:为寻找高效低毒的选择性抗白血病药物,研究慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(shRNA)对肿瘤细胞株HL60的体外杀伤作用。方法:制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pU6... 目的:为寻找高效低毒的选择性抗白血病药物,研究慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(shRNA)对肿瘤细胞株HL60的体外杀伤作用。方法:制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pU6/shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Western blotting测定VEGFR2表达抑制情况。构建表达克隆,与ViraPowerTMPackaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带Lenti6/shVEGFR2的慢病毒载体。将病毒上清加入HL60细胞中转导,测定HL60细胞抑制率并与pU6/shVEGFR2入门克隆脂质体转染结果比较。结果:VEGFR2siRNAc抑制HL60细胞效率最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达84·9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达。pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48h细胞抑制率相近,48h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降;而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96h达高峰,120h稍降,变化无显著差异。结论:在体外慢病毒载体携带的VEGFR2shRNA可有效阻断HL60细胞VEGF/VEGFR自分泌链,有效抑制白血病生长。 展开更多
关键词 siRNA HL60细胞 受体 血管内皮生长因子
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同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型的建立及其对造血干细胞植入的影响 被引量：8
12
作者 蔡耘 黄绍良 +3 位作者 陈凤英 黄文革 魏菁 车丽洪 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期644-650,共7页
【目的】建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型，研究该技术对造血干细胞(HSC)归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)等方面的影响。【方法】用C57BL／6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)作供体，以单侧胫骨骨髓腔内注射(I... 【目的】建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型，研究该技术对造血干细胞(HSC)归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)等方面的影响。【方法】用C57BL／6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)作供体，以单侧胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(IV)两种途径移植经亚致死量^(60)Coγ射线辐照预处理的BALB／c鼠。200只受鼠随机分为4组：骨髓腔内注射组(IBM组)；尾静脉注射组(IV组)；放疗对照组；正常对照组，每组50只。用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记FNPB在受体内的分布变化，并观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及GVHD情况。【结果】①荧光际记FNPB体内动力学显示直至输注后72h，供体FNPB经IBMI后主要积聚于注射侧骨髓腔内，肺部滞留很少。而IV组及IBM组非注射侧骨髓中的FNPB细胞数显著少于IBM组注射侧，IV组非造血组织器官如肺部有明显供体细胞滞留。②同种异基因小鼠CBT模型中IBM组造血、免疫功能的恢复明显快于IV组，无GVHD，移植后90d存活率达到90％，注射侧胫骨植入水平(29.53±6.64)％，较IV组有显著改善。③IBM输注侧骨髓中供体HSCs植入水平及造血重建速度明显优于非注射侧骨髓。【结论】成功建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型，并证实IBMI途径对促进HSCs植入，造血免疫功能重建，提高UCBT效果方面优于IV途径，多部位IBMI可能更有利于HSC归巢骨髓。 展开更多
关键词 骨髓 脐血移植 动物模型 造血干细胞
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大鼠骨髓间充质干细胞生长特性和表面标志与培养基中胎牛血清浓度的关系 被引量：6
13
作者 韦育林 李楚强 +3 位作者 伍卫 傅玉如 魏菁 梁尉文 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第1期28-30,i0001,共4页
目的:讨两种浓度胎牛血清培养的不同传代次数的骨髓间充质干细胞探在生长特性及表面标志方面的差异性。方法:实验于2004年在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心进行。取健康Wistar大鼠5只,采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干... 目的:讨两种浓度胎牛血清培养的不同传代次数的骨髓间充质干细胞探在生长特性及表面标志方面的差异性。方法:实验于2004年在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心进行。取健康Wistar大鼠5只,采用密度梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞,然后分别以体积分数为0.1和0.15的胎牛血清的L-DMEM培养基进行贴壁培养,观察原代和传代细胞的形态特征、生长曲线及表面标志CD45,CD11b,CD29和CD44的表达(骨髓间充质干细胞表达CD29和CD44,造血前体细胞表达CD45和CD11b)。结果:①两种浓度胎牛血清培养细胞均能获得贴壁梭形骨髓间充质干细胞,但体积分数为0.15的胎牛血清原代培养的细胞分裂增殖较快,集落融合较早,传代时间较短(平均10d)。②体积分数为0.1的胎牛血清传代培养第1,2代细胞均质性相对较差,CD45阳性率分别为23.4%,15.4%,CD11b阳性率分别为16.6%,10.3%,高于体积分数为0.15的胎牛血清培养组(P<0.05),至第3代后两组已无差异,CD45和CD11b阳性率均小于5%,而CD29和CD44阳性率均大于95%。③两组的骨髓间充质干细胞生长曲线相似,但体积分数为0.15的胎牛血清培养的骨髓间充质干细胞对数生长期峰值出现较早,为第6天,而体积分数为0.1的胎牛血清培养组为第7天。结论:体积分数为0.1和0.15的胎牛血清培养的骨髓间充质干细胞在生长特性和表面标志方面存在差异。使用体积分数为0.1的胎牛血清已可满足骨髓间充质干细胞的分离纯化和培养扩增,但要在短期内获得较纯的骨髓间充质干细胞,使用体积分数为0.15胎牛血清优于体积分数为0.1胎牛血清。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓 细胞培养 大鼠 骨髓间充质干细胞 细胞生长特性 表面标志 培养基 胎牛血清浓度
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骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调Osterix的表达 被引量：10
14
作者 潘秋辉 李益广 +4 位作者 杨松海 马纪 谢在春 于永春 孙奋勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期40-45,共6页
Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T... Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用. 展开更多
关键词 OSTERIX 成骨细胞 骨形态发生蛋白2
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13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡 被引量：13
15
作者 蔡清清 林天歆 +4 位作者 范新兰 尹心宝 董文 黄立 林桐榆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期873-876,共4页
目的:探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法:140mg/L13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫... 目的:探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法:140mg/L13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38,Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果:流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论:13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞凋亡 13-甲基十四烷酸
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不同细胞因子培养体系对CIK、NK及NKT细胞等诱导产率的影响 被引量：5
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作者 黎阳 黄绍良 +2 位作者 魏菁 吴燕峰 周敦华 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期363-367,共5页
[目的]探索不同细胞因子(IL-2、IL-7、IL-15)组合的诱导培养体系对人脐血来源细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞、自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤样T(NKT)细胞的扩增效果。[方法]通过IL-2、IL-7、IL-15的不同组合诱导扩增脐血来源的CIK细胞、NK细... [目的]探索不同细胞因子(IL-2、IL-7、IL-15)组合的诱导培养体系对人脐血来源细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞、自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤样T(NKT)细胞的扩增效果。[方法]通过IL-2、IL-7、IL-15的不同组合诱导扩增脐血来源的CIK细胞、NK细胞和NKT细胞,通过流式细胞分析法对不同培养条件下CIK细胞、NK细胞和NKT细胞免疫表型的比例进行了分析。[结果]经过21d的培养,CD3+CD56+CIK细胞以IL-2+IL-7+IL-15组扩增比例最高,为(24.5±5)％;NK细胞以IL-2+IL-15组扩增比例最高,为(59.1±0.5)％;上述细胞因子体系对脐血Vα24+CD161+NKT细胞扩增效果不明显。[结论]脐血中免疫效应细胞CIK、NK细胞等可通过IL-2、IL-7、IL-15的联合培养体系进行扩增。 展开更多
关键词 脐血干细胞 杀伤细胞 自然杀伤细胞 自然杀伤样T细胞 白细胞介素-2 白细胞介素-7 白细胞介素-15
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急性期SARS患者的血液系统损害 被引量：4
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作者 李建国 陈瑞 +8 位作者 尹松梅 魏菁 陈锡龙 严海燕 赖琳 徐安平 李依群 江山平 伍卫 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B07期195-196,共2页
[目的]探讨急性期SARS患者血液系统的损害。[方法]用全自动血细胞分析仪检测44例SARS患者外周血WBC计数及分类、红细胞、血红蛋白和血小板,用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群;并与正常对照组比较。[结果]与对照组比较,SARS... [目的]探讨急性期SARS患者血液系统的损害。[方法]用全自动血细胞分析仪检测44例SARS患者外周血WBC计数及分类、红细胞、血红蛋白和血小板,用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群;并与正常对照组比较。[结果]与对照组比较,SARS组患者WBC总数显著下降,淋巴细胞百分数和绝对数显著下降,中性粒细胞绝对数显著下降,百分数显著增加;血小板显著降低;红细胞和血红蛋白与对照组比较无显著性差异;CD3+、CD4+和CD8+细胞绝对数显著下降,CD3+、CD4+、CD8+细胞百分数和CD4+／CD8+比值与对照组比较无显著性差异。[结论]SARS冠状病毒感染损伤患者的淋巴细胞、中性粒细胞和血小板,使患者细胞免疫功能下降,而红细胞无明显受损。 展开更多
关键词 SARS患者 SAILS 对照组 急性期 血小板 红细胞 CD3^+ 显著性差异 降低 比值
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SARS患者急性期外周血CD3^+、CD4^+及CD8^+细胞数量的变化 被引量：6
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作者 李建国 陈瑞 +7 位作者 魏菁 严海燕 赖琳 徐安平 李依群 江山平 尹松梅 伍卫 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期382-384,共3页
目的　探讨SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法　用全自动血细胞分析仪检测 4 4例SARS患者外周血白细胞计数及分类 ,用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群 ;并与正常对照组比较。结果　与对照组比较 ,SARS组... 目的　探讨SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法　用全自动血细胞分析仪检测 4 4例SARS患者外周血白细胞计数及分类 ,用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群 ;并与正常对照组比较。结果　与对照组比较 ,SARS组患者白细胞总数显著下降 ,淋巴细胞百分数和绝对数显著下降 ,粒细胞绝对数显著下降 ,粒细胞百分数显著增加 ;CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 细胞绝对数显著下降 ,CD3+ 、CD4 + 及CD8+ 细胞百分数和CD4 + CD8+ 比值与对照组比较无显著性差异。结论　SARS冠状病毒感染损伤患者细胞免疫功能。 展开更多
关键词 SARS 细胞免疫 T淋巴细胞亚群 流式细胞术
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siRNA对VEGFR_2的表达抑制及对HL60细胞和人内皮细胞的影响 被引量：4
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作者 郭海霞 薛红漫 +3 位作者 夏焱 徐令 徐宏贵 李文益 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期276-280,共5页
目的为探索治疗白血病的新思路研究了小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞株HL60和人血管内皮细胞(EC)株EA.hy926血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因表达的抑制作用。方法制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建... 目的为探索治疗白血病的新思路研究了小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞株HL60和人血管内皮细胞(EC)株EA.hy926血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因表达的抑制作用。方法制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pENTRTM/U6干扰表达载体。瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Westernblot测定VEGFR2表达抑制情况。结果VEGFR2siRNAa、b、c抑制HL60细胞效率分别为77.5%、45.0%、80.9%,以siRNAc最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达99.1%;此入门克隆对VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达抑制在HL60和EA.hy926细胞均显著。结论在体外shRNA表达载体可有效抑制HL60细胞VEGFR2自分泌和旁分泌,有效抑制白血病细胞生长。 展开更多
关键词 SIRNA VEGFR2 HL60细胞 EC
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口服两种剂量左氧氟沙星后子宫、输卵管及血浆中药物浓度的检测 被引量：5
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作者 谢梅青 杨冬梓 +3 位作者 张清学 余妙真 朱国东 魏 菁 《实用医学杂志》 CAS 2002年第5期533-534,共2页
目的:探讨口服两种剂量左氧氟沙星后人子宫内膜、输卵管组织及血浆中氧氟沙星含量及检测方法。方法:采用高效液相色谱法（HPLC）测定各10例术前口服300mg或500mg左氧氟沙星的妇科手术患者,3h后血浆、子宫内膜和输卵管组织中氧氟沙星的... 目的:探讨口服两种剂量左氧氟沙星后人子宫内膜、输卵管组织及血浆中氧氟沙星含量及检测方法。方法:采用高效液相色谱法（HPLC）测定各10例术前口服300mg或500mg左氧氟沙星的妇科手术患者,3h后血浆、子宫内膜和输卵管组织中氧氟沙星的浓度。结果:口服300mg左氧氟沙星3h后血药浓度为（1.82±0.61）μg/ml,子宫内膜组织的药物浓度为（4.75±1.52）μg/g,输卵管组织药物浓度为（4.56±1.14）μg/g;口服 500mg左氧氟沙星3h后血药浓度为（3.38±1.37）μp/ml,子宫内膜组织的药物浓度为（5.90±2.21）μg/g,输卵管组织药物浓度为（6.60±2.21）μg/g。组织中药物浓度比血浆浓度高,差异有显著意义（P<0.01）,500mg组与300mg组服药3h后输卵管组织中浓度差异有显著意义（P<0.05）。HPLC法用于人体组织药物浓度测定结果满意。结论:口服左氧氟沙星在人体内有良好的组织分布,3h后子宫和输卵管组织有较高的药物浓度。HPLC法适用于测定人体组织中左氧氟沙星浓度的测定。 展开更多
关键词 左氧氟沙星 子宫 输卵管 血浆 药物浓度 检测
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