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干细胞的研究进展 被引量:18
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作者 王琪 方向东 戚正武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期91-94,共4页
关键词 干细胞移植 造血干细胞 胚胎干细胞
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血管性假血友病的研究进展 被引量:1
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作者 方向东 陈淳 《实用医学杂志》 CAS 1995年第6期406-408,共3页
血管性假血友病的研究进展中科院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室(200031)方向东,陈淳综述戚正武审阅血管性假血友病是德国科学家Erikvonwillebrand1926年在芬兰Aland岛上研究当地居民... 血管性假血友病的研究进展中科院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室(200031)方向东,陈淳综述戚正武审阅血管性假血友病是德国科学家Erikvonwillebrand1926年在芬兰Aland岛上研究当地居民的出血性疾病过程中首次报告的(1)... 展开更多
关键词 血管性 假性血友病 遗传性疾病 诊断 治疗
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含有HA或myc基因的融合表达载体构建及应用研究
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作者 王琪 方向东 +2 位作者 陈淳 顾建新 戚正武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期175-178,共4页
目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合... 目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合表达载体。结果将两种候选蛋白的编码序列分别克隆于上述融合载体,转染Cos7细胞后的表达产物,可利用抗HA或myc的mAb进行Westernblot和免疫共沉淀。结论利用上述系统,可验证两种候选蛋白在哺乳动物细胞中是否具有相互作用。 展开更多
关键词 融合表达载体 哺乳动物细胞 免疫共沉淀 MYC基因 HA基因 载体构建
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传染性法氏囊病病毒cDNA文库的构建 被引量:2
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作者 陈士友 张兹钧 +3 位作者 金由辛 陈溥言 蔡宝祥 王德宝 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期159-163,共5页
本试验利用随机引物法反转录鸡传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevi-rus,IBDv)的双链RNA(dsRNA),并构建了cDNA文库。病毒为青岛株,来自感染鸡的法氏羹。用免疫复合物沉... 本试验利用随机引物法反转录鸡传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevi-rus,IBDv)的双链RNA(dsRNA),并构建了cDNA文库。病毒为青岛株,来自感染鸡的法氏羹。用免疫复合物沉淀法提纯病毒,抽提核酸,经琼脂糖凝胶电泳纯化。IBDVdsRNA经反转录、加poly(dc)后,克隆于加有poly(dG)的线性化质粒pT/3α-19上,并转化大肠杆菌DH5αF′,结果筛选出116个含有外源片段(长度为0.3-1kb,平均0.6kb)的克隆,经鉴定外源片段均为IBDVcDNA。 展开更多
关键词 传染性 IBD 病毒 CDNA文库
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Activity identification of anti-caspase-3 mRNA hammerhead ribozyme in both cell-free condition and BRL-3A cells
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作者 徐人欢 刘静 +4 位作者 周霞秋 谢青 金由辛 俞红 廖丹 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第6期46-51,105,共7页
Objective To study the transcription effects and cleavage activities of rat caspase-3 specific hammerhead ribozyme (Rz107) in both cell-free conditions and BRL-3A cells. Methods Rat caspase-3 gene fragment was clone... Objective To study the transcription effects and cleavage activities of rat caspase-3 specific hammerhead ribozyme (Rz107) in both cell-free conditions and BRL-3A cells. Methods Rat caspase-3 gene fragment was cloned into the pGEM-T EASY vector under the T7 promoter control. The 32  P-labeled caspase-3 transcript was the target-RNA. Rz107 genes designed against caspase-3 mRNA were cloned into vector p1.5 between 5'-cis-Rz and 3'-cis-Rz. 32  P-labeled ribozyme transcripts were incubated with target-RNAs at different conditions and autoradiographed after denaturing gel-electrophoresis. Rz107 was electroporated into BRL-3A cells and the Rz107 expression was analyzed by RT-PCR. Results In cell-free conditions, Rz107 was active at 37℃. The optimal temperature was 50℃. The Km and kcat were 14.13?nmol/L and 2.31*min-1 respectively. Intracellular cleavage efficiency of Rz107 was 37%, as analyzed by RT-PCR. This indicated that the design of Rz107 was correct, and Rz107 had the activity of common enzymes.Conclusions Rz107 in cell-free conditions possessed perfect specific catalytic cleavage activity, and it can also cleave the target RNA successfully in cells. The results illustrate the feasibility of ribozyme therapy as a potential alternative approach for treating liver disease caused by apoptosis. 展开更多
关键词 activity identification · ribozyme · BRL-3A · caspase-3 · apoptosis inhibitor
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