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桃柁酚对金黄色葡萄球菌生物膜形成及cidA表达的影响 被引量：3
1
作者 王晓红 于录 +3 位作者 周泐 熊凌锌 史祺云 宋晓平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期359-363,共5页
为研究桃柁酚对金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物膜形成的影响及其机制,本研究通过结晶紫半定量法和激光共聚焦显微镜检测桃柁酚对S.aureus生物膜形成的影响,利用实时定量RT-PCR分析桃柁酚对cidA及其调控基因的作用,并测定了桃柁酚对胞外DN... 为研究桃柁酚对金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物膜形成的影响及其机制,本研究通过结晶紫半定量法和激光共聚焦显微镜检测桃柁酚对S.aureus生物膜形成的影响,利用实时定量RT-PCR分析桃柁酚对cidA及其调控基因的作用,并测定了桃柁酚对胞外DNA(eDNA)释放的作用及对HaCaT细胞的细胞毒性。结果表明,桃柁酚可以有效减少eDNA的释放并抑制S.aureus生物膜的形成,并且抑制趋势呈剂量依赖关系。此外,在1/8×MIC药物浓度时,桃柁酚可以诱导eDNA的释放并诱导生物膜形成。桃柁酚可以通过影响agr和sar调控系统,作用于cidA基因进而影响eDNA释放及生物被膜的形成。而且,4×MIC浓度的桃柁酚对人体无毒害作用。本研究为治疗S.aureus感染提供新的方法,并为进一步研究桃柁酚的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 生物膜 桃柁酚 cidA EDNA
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氨基酸分析仪法测定金属硫蛋白 被引量：1
2
作者 朱海超 王洋 +1 位作者 杨丽 朱玉琢 《中国实验诊断学》 2013年第7期1326-1327,共2页
金属硫蛋白（Metallothionein,MT）,的化学名称为金属硫组氨酸三甲基内盐,是一类普遍存在于生物体内的低分子量（6-7kDa）、富含半胱氨酸、热稳定性、可诱导型非酶蛋白它具有重金属解毒、参与必需金属元素的储存、运输和代谢、清除自由... 金属硫蛋白（Metallothionein,MT）,的化学名称为金属硫组氨酸三甲基内盐,是一类普遍存在于生物体内的低分子量（6-7kDa）、富含半胱氨酸、热稳定性、可诱导型非酶蛋白它具有重金属解毒、参与必需金属元素的储存、运输和代谢、清除自由基等多种生物功能。金属硫蛋白含量测定方法文献报道有金属结合法、电化学法、免疫法、蛋白质印迹分析法、巯基显色法等。本文建立了氨基酸分析仪法测定金属硫蛋白含量的方法,此方法结果准确可靠、灵敏度高、重现性好。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 氨基酸分析仪 测定 蛋白质印迹分析 蛋白含量 清除自由基 化学名称 低分子量
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小鼠IL-1Ra蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备
3
作者 战俊澎 邹德颖 +9 位作者 常江 杨馨 郭珣 张凯 刘益辛 胡盼 卢士英 李岩松 柳增善 任洪林 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第9期37-42,共6页
以小鼠脾脏cDNA为模板,用降落PCR扩增IL-1Ra基因片段,IL-1Ra基因片段长约为537 bp。将IL-1Ra扩增片段和原核表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达质粒,在37℃诱导表达,重组表达的小鼠IL-1Ra蛋白的分子质量为19 ku。用纯度较好的小鼠IL-1R... 以小鼠脾脏cDNA为模板,用降落PCR扩增IL-1Ra基因片段,IL-1Ra基因片段长约为537 bp。将IL-1Ra扩增片段和原核表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达质粒,在37℃诱导表达,重组表达的小鼠IL-1Ra蛋白的分子质量为19 ku。用纯度较好的小鼠IL-1Ra重组蛋白免疫兔子,制备特异性多克隆抗体;测定多克隆抗体的效价达到1∶4096000。经Western-Blot鉴定该抗体可与Raw264.7细胞中表达的小鼠IL-1Ra天然蛋白发生特异性结合。利用实时荧光定量PCR和Western-Blot检测表明布鲁氏菌S2弱毒株感染Raw264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)后小鼠IL-1Ra上调表达。本研究成功制备了小鼠IL-1Ra重组蛋白和兔抗多克隆抗体,为深入探讨小鼠IL-1Ra与布鲁氏菌感染之间的关系提供工具。 展开更多
关键词 小鼠 IL-1RA 原核表达 多克隆抗体 IL-1Ra重组蛋白
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苊人工抗原制备及两种间隔臂长对抗原免疫效果的影响
4
作者 胡泽宇 李岩松 +7 位作者 孟星宇 乔斌 孙宇 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期39-42,46,共5页
多环芳烃是一类含有两个以上苯环的碳氢化合物,广泛存在于大气、水体、土壤、食品中,苊是多环芳烃的一种。为了制备免疫效果好的完全抗原从而为免疫学检测方法建立基础,分别以3-苊丁酸和5-苊甲酸与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)进... 多环芳烃是一类含有两个以上苯环的碳氢化合物,广泛存在于大气、水体、土壤、食品中,苊是多环芳烃的一种。为了制备免疫效果好的完全抗原从而为免疫学检测方法建立基础,分别以3-苊丁酸和5-苊甲酸与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)进行偶联,采用活泼酯法成功制备了3-苊丁酸-BSA、5-苊甲酸-BSA两种间隔臂长的免疫用人工抗原及3-苊丁酸-OVA检测用人工抗原,并通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描法对人工抗原进行了鉴定。分别用两种免疫抗原足垫免疫Balb/c小鼠,通过测定免疫小鼠血清抗体的效价和特异性,分析不同间隔臂长免疫抗原的免疫效果。结果表明:4碳臂(3-苊丁酸-BSA)较1碳臂(5-苊甲酸-BSA)产生了更高苊的特异性抗体。 展开更多
关键词 多环芳烃 苊 完全抗原 间隔臂 间接ELISA
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HPLC法测定蛋白质粉中L-半胱氨酸的含量 被引量：6
5
作者 王洋 李兆辉 +1 位作者 朱海超 朱玉琢 《中国药房》 CAS CSCD 2012年第29期2753-2754,共2页
目的:建立测定蛋白质粉中L-半胱氨酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18,流动相为0.1%磷酸(pH=2.05)-乙腈(80∶20),检测波长为210nm,流速为0.6mL·min-1,柱温为室温。结果:L-半胱氨酸检测浓度线性... 目的:建立测定蛋白质粉中L-半胱氨酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18,流动相为0.1%磷酸(pH=2.05)-乙腈(80∶20),检测波长为210nm,流速为0.6mL·min-1,柱温为室温。结果:L-半胱氨酸检测浓度线性范围为0.02～1.0mg·mL-(1r=0.9990),平均回收率为98.76%,RSD=1.82%,检测限为0.01mg·mL-(1S/N≥3)。结论:本方法操作简便、结果准确可靠、重复性好,可用于蛋白质粉中L-半胱氨酸的含量测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 蛋白质粉 L-半胱氨酸 含量测定
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弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法建立 被引量：1
6
作者 李月婷 卢士英 +4 位作者 周玉 饶星 霍方珍 任洪林 柳增善 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期74-81,共8页
采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vm... 采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为FT)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6%。FT的开放阅读框架全长3225bp,编码1074个氨基酸残基,预测分子量为120.4kDa。将FT亚克隆至表达载体pET-22b(+)中,再转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAEG分析,融合蛋白分子量与预测的相符。终浓度为1mmol/L的IPTG,37℃诱导4h,融合毒素蛋白表达量最高,经薄层扫描分析,此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49%。融合毒素蛋白包涵体经纯化,免疫豚鼠制备血清抗体,确定间接ELISA的最佳工作条件,并进行敏感性、特异性、重复性及模拟样品检测试验,建立了食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法。 展开更多
关键词 食物中毒 弧菌 融合毒素 ELISA
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