局部pUDKH基因治疗对实验性犬缺血肢体的某些生理、生化变化的影响 被引量：2

1

作者 哈小琴 任建平 +3 位作者 吕同德 张庆林 毕建进 吴祖泽 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期132-133,137,共3页

目的探讨携带人肝细胞生长因子基因的真核表达质粒pUDKH在治疗犬肢体缺血时对其生理、生化的影响。方法建立犬左下肢血管完全闭塞性血管病模型,一次性局部肌肉注射不同剂量pUDKH,并在不同时间点检测犬生理、生化指标。结果转染pUDKH组,... 目的探讨携带人肝细胞生长因子基因的真核表达质粒pUDKH在治疗犬肢体缺血时对其生理、生化的影响。方法建立犬左下肢血管完全闭塞性血管病模型,一次性局部肌肉注射不同剂量pUDKH,并在不同时间点检测犬生理、生化指标。结果转染pUDKH组,能使损伤的血管功能恢复,股动脉血流量恢复,脉搏搏动有力,下肢活动正常,肌电图指标无明显改变。血液生化指标在正常值范围内波动。结论局部pUDKH基因治疗犬肢体缺血后对其生理、生化无明显影响。 展开更多

关键词 pUDKH 基因治疗 肢体缺血 生理 生化

下载PDF 职称材料

HLA-DQA1、-DQB1基因多态性与高原红细胞增多症的相关性研究 被引量：15

2

作者 青格乐图 耿排力 +2 位作者 吕同德 哈小琴 吴洪福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期240-242,246,共4页

目的:探讨移居高原汉族男性人群HLA-DQA1、-DQB1基因多态性是否与其发生高原红细胞增多症(HAPC)的易感性相关联。方法:以60例移居高海拔地区男性HAPC患者和60例移居同地区健康男性为研究对象,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)... 目的:探讨移居高原汉族男性人群HLA-DQA1、-DQB1基因多态性是否与其发生高原红细胞增多症(HAPC)的易感性相关联。方法:以60例移居高海拔地区男性HAPC患者和60例移居同地区健康男性为研究对象,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术进行HLA-DQA1、-DQB1基因分型,并使用SPSS软件分析HLA-DQA1、-DQB1多态性的分布频率及其组间差异。结果:移居高海拔地区的HAPC患者组的HLA-DQA1*0401和*0501分布频率分别为0.125 0和0.258 3;而同地区健康对照组HLA-DQA1*0401和*0501分布频率分别为0.041 7和0.158 3。与对照组相比,HAPC组HLA-DQA1*0401相对危险性为3.67,校正P值<0.05;*0501危险性为2.31,校正P值<0.05。而HAPC组和对照组在DQA1*0101/0104、DQA1*0103、DQB1*0201、DQB1*0601等位基因未显示显著性差异。结论:HLA-DQA1*0401、*0501位点可能与HAPC的易感性关联。 展开更多

关键词 移居高原汉族 HLA-DQA1、-DQB1基因 HAPC易感性 多态性

下载PDF 职称材料

PI_3K-Akt信号通路阻抑对结肠癌细胞LS-174T顺铂耐药逆转机制的研究 被引量：6

3

作者 杨玉捷 孟辉 +6 位作者 杨国嵘 薛永杰 郁蓉 贺雪娇 罗菲 惠玲 张方信 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第23期2739-2741,共3页

目的:观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1(Y-Box binding protein-1,YB-1)的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法:采用顺铂(cisplatin,DDP)药物浓... 目的:观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1(Y-Box binding protein-1,YB-1)的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法:采用顺铂(cisplatin,DDP)药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的顺铂耐药细胞系LS-174T/DDP,药物Ly294002阻断PI3K-Akt信号通路传导后,采用Western Blot方法检测耐药肿瘤细胞磷酸化Akt表达水平,电泳迁移改变分析(EMSA)方法检测其核中转录因子YB-1活性的改变,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阻断PI3K-Akt信号通路后,顺铂耐药细胞株中磷酸化Akt蛋白表达水平显著下降,同时其细胞核中YB-1的活性明显降低,且细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:阻断PI3K-Akt信号通路能够提高顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,PI3K-Akt信号通路可能通过激活YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中发挥重要作用. 展开更多

关键词 PI3K-AKT信号通路 Y-Box结合蛋白1 人结肠癌 获得性顺铂耐药

原文传递

质粒超螺旋比例对其细胞转染效率及表达的影响 被引量：8

4

作者 哈小琴 吴祖泽 +2 位作者 张庆林 吴彬 吕同德 《生物技术通讯》 CAS 2005年第4期392-394,共3页

检测质粒开环、闭环比例不同时对其细胞转染效率及表达的影响。构建携带人肝细胞生长因子基因的质粒(pcDNA3-HGF)及携带LacZ报告基因的质粒(pcDNA3-LacZ),用核酸纯化试剂盒提取开环、闭环比例不同的质粒,然后用LipofectAMINE介导它们分... 检测质粒开环、闭环比例不同时对其细胞转染效率及表达的影响。构建携带人肝细胞生长因子基因的质粒(pcDNA3-HGF)及携带LacZ报告基因的质粒(pcDNA3-LacZ),用核酸纯化试剂盒提取开环、闭环比例不同的质粒,然后用LipofectAMINE介导它们分别转染NIH3T3细胞,采用X-Gal染色和ELISA法分别观察转染效率和表达活性。结果表明,用超螺旋比例分别为85.45%和48.44%的质粒pcDNA3-LacZ转染生长旺盛的NIH3T3细胞,48h检测转染效率分别为23.4%±3.8%和9.3%±2.5%,前者约是后者的2.5倍。用超螺旋比例分别为93.28%和40.53%的质粒pcDNA3-HGF转染1×106NIH3T3细胞,ELISA法检测48h细胞培养上清中HGF的表达量分别为46.5±6.3ng和25.6±4.2ng,前者是后者的1.8倍。初步认为质粒开环、闭环比例不同对其细胞转染效率及表达有一定影响,超螺旋比例高时其转染效率及表达量较高。 展开更多

关键词 质粒 超螺旋 转染效率 表达

下载PDF 职称材料

大鼠骨髓MSCs表面分子检测及诱导分化研究 被引量：11

5

作者 王刚 吕同德 +1 位作者 马静 常雅萍 《中国实验诊断学》 2008年第1期12-15,共4页

目的通过建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离培养方法,探讨大鼠MSCs表型特征以及多向分化潜能。方法利用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化SD大鼠骨髓MSCs,传代扩增,进行形态学观察,测定生长曲线。免疫细胞组织化学及流式细... 目的通过建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离培养方法,探讨大鼠MSCs表型特征以及多向分化潜能。方法利用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化SD大鼠骨髓MSCs,传代扩增,进行形态学观察,测定生长曲线。免疫细胞组织化学及流式细胞分析检测细胞表面分子的表达。定向诱导MSCs向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。结果原代分离的MSCs在接种后48 h贴壁,细胞形态为椭圆形,多角形及短梭形,12天时细胞呈长梭形并达到90%单层融合。经传代扩增,细胞进一步纯化,细胞形态为均一的长梭形并呈漩涡状排列,而且生长速率加快,P1代细胞群体倍增时间为20.3 h。细胞免疫组化结果显示P2代细胞表面分子CD44、FN表达阳性,而CD14、CD34阴性,流式细胞检测CD44、FN阳性率分别为92.09%和90.55%。不同诱导剂定向诱导2周,经油红O、阿新兰及茜素红S染色鉴定,P3代MSCs分别向脂肪细胞,软骨细胞及成骨细胞分化。结论通过密度梯度离心结合贴壁筛选方法,体外分离培养的大鼠骨髓MSCs具有很强的增殖能力,并保持稳定的表型特征及多向分化潜能。 展开更多

关键词 骨髓 间充质干细胞 细胞培养 鉴定 大鼠

下载PDF 职称材料

pUDKH基因治疗犬下肢缺血后对血管、肌肉组织的影响 被引量：2

6

作者 哈小琴 赵治华 +3 位作者 吕同德 李元敏 任建平 吴祖泽 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第17期1594-1598,共5页

目的：观察pUDKH（携带肝细胞生长因子基因的质粒）基因治疗犬下肢缺血后对其血管和肌肉组织病理学的影响．方法：杂种犬在静脉内注射苯巴比妥钠麻醉下，于左后侧腹股沟在股动脉由髂外动脉分支处的起始端进行全结扎，造成肢体缺血模型... 目的：观察pUDKH（携带肝细胞生长因子基因的质粒）基因治疗犬下肢缺血后对其血管和肌肉组织病理学的影响．方法：杂种犬在静脉内注射苯巴比妥钠麻醉下，于左后侧腹股沟在股动脉由髂外动脉分支处的起始端进行全结扎，造成肢体缺血模型．模型犬被随机分为对照组和pUDKH处理组，并在结扎后即刻分别注射pUDK（空白质粒）或pUD—KH．于手术后3mo，行左髂外动脉造影术，测定股动脉血流量和下肢远端局部温度，并从被结扎的后肢股动脉及内外侧肌肉取组织标本，经常规组织病理切片染色，光学显微镜下观察．结果：3mo时血管造影pUDKH组可见明显血管网的形成，而转移空质粒的对照组仅见少量新生血管；此时转移pUDKH组犬股动脉血流量已恢复到结扎前的水平，而对照组股动脉血流量仅为结扎前的1／5～1／3；转移pUDKH组结扎侧肌肉温度与健侧相比无明显差异，而对照组两肢体肌肉温度却相差1～2℃．组织学观察对照犬可见结扎点远端股动脉塌陷，肌束间动脉管壁变厚，管腔变小甚至消失，少见新生的小血管；pUDKH处理组犬结扎点远端股动脉管腔开放，肌束间小动脉壁均普遍未见增厚，管腔亦未缩小；对照犬结扎侧肌纤维变性、断裂、肌束内水肿、脂肪性变，pUDKH处理组结扎侧的肌肉组织中上述病变不明显．结论：pUDKH的局部注射对犬下肢缺血后血管和肌肉具有保护作用． 展开更多

关键词 pUDKH基因 血管 肌肉 组织病理

下载PDF 职称材料

青海汉族、回族、藏族MICA-TM基因多态性与胃癌相关性 被引量：5

7

作者 邢永华 杨生玺 +2 位作者 吕同德 哈小琴 耿排力 《青海医学院学报》 CAS 2011年第1期1-4,共4页

目的分析青海汉族、回族、藏族MICA-TM基因多态性与胃癌相关性。方法以特异引物聚合酶链法扩增青海汉族、回族、藏族胃癌患者(病例组)MICA-TM基因特异序列,直接测序分型技术检测等位基因频率分布情况,并与健康人群(对照组)进行对比分析... 目的分析青海汉族、回族、藏族MICA-TM基因多态性与胃癌相关性。方法以特异引物聚合酶链法扩增青海汉族、回族、藏族胃癌患者(病例组)MICA-TM基因特异序列,直接测序分型技术检测等位基因频率分布情况,并与健康人群(对照组)进行对比分析。结果病例组检测出*A4、*A5、*A5.1、*A6、*A7、*A8、*A9等7种MICA-TM等位基因;回族、藏族病例组*A5、*A5.1等位基因分布频率有差别(χ2=8.003,P<0.05;χ2=23.300,P<0.05);与对照组对比分析,回族病例组*A5.1等位基因分布频率高于回族对照组人群(χ2=9.181,P=0.002;OR=3.692,95%CI=1.559～8.746)。结论回族人群中MICAA5.1等位基因与胃癌发生可能相关。 展开更多

关键词 民族 胃癌 MICA—TM 等位基因 相关性

下载PDF 职称材料

乳兔脂肪间充质干细胞体外高密微团培养及向软骨细胞的分化 被引量：1

8

作者 王海燕 耿排力 +2 位作者 吕同德 哈小琴 张晓岩 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期3092-3096,共5页

目的：脂肪间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的干细胞,在特定培养条件下可分化为骨、软骨、脂肪、神经、心肌、内皮细胞等。实验拟采用高密度、多种生长因子体外诱导兔脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化。方法：实验于2007-01/12在解... 目的：脂肪间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的干细胞,在特定培养条件下可分化为骨、软骨、脂肪、神经、心肌、内皮细胞等。实验拟采用高密度、多种生长因子体外诱导兔脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化。方法：实验于2007-01/12在解放军兰州军区总医院实验中心完成。①实验材料：7d龄乳兔6只,雌雄不限,体质量150-200g,由兰州生物制品研究所动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：分离乳兔脂肪间充质干细胞,体外扩增至第3代,高密度诱导组按Zuk等高密度微团培养法调整细胞密度为1×10^10L^-1高密度培养,加入10μg/L转化生长因子β1、50μg/L胰岛素样生长因子、100μmol/L地塞米松、50mg/L维生素C诱导成软骨;低密度诱导组按5×10^8L^-1低密度培养,并加入与高密度诱导组相同的诱导剂诱导培养;高密度常规培养组按1×10^10L^-1高密度加入常规培养基培养;对照组按5×10^8L^-1的密度接加入常规培养基培养。③实验评估：诱导7、14、21d后观察细胞形态学变化,应用MTT法检测细胞生长曲线,RT-PCR、免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原表达,阿尔新蓝染色检测糖氨多糖的合成。结果：①兔脂肪间充质干细胞经诱导后生长速度减慢,由长梭形细胞变为短梭多角细胞,呈铺路石状。常规培养的脂肪间充质干细胞潜伏期为一二天,3d为对数增殖期,第5天以后进入生长平台期。诱导的脂肪间充质干细胞潜伏期为1-3d,4d为对数增殖期,第6天进入平台期。②RT-PCR、免疫细胞化学法检测显示,高密度诱导组诱导14、21dⅡ型胶原阳性表达,阿尔新蓝染色见胞浆和细胞基质有棕黄色颗粒。低密度诱导组组诱导14、21dⅡ型胶原弱阳性表达,阿尔新蓝染色仅少量细胞基质着色。高密度常规培养组和对照组Ⅱ型胶原与阿尔新蓝染色均为阴性。结论：高密度培养的脂肪间充质干细胞经多种生长因子诱导可以向软骨细胞分化。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 软骨 分化 组织工程

下载PDF 职称材料

大鼠注射重组腺病毒Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体的检测 被引量：2

9

作者 哈小琴 赵治华 +2 位作者 吕同德 劳妙芬 吴祖泽 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第9期515-517,F0002,共4页

目的观察大鼠重复给与携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus carrying hep-atocyte growth factor gene,Ad-HGF)后,血清中抗腺病毒抗体的出现时间及消失规律。方法大鼠给与不同剂量的Ad-HGF共14次,利用病毒中和反... 目的观察大鼠重复给与携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus carrying hep-atocyte growth factor gene,Ad-HGF)后,血清中抗腺病毒抗体的出现时间及消失规律。方法大鼠给与不同剂量的Ad-HGF共14次,利用病毒中和反应(细胞病变效应及绿色荧光方法)观察血清中抗腺病毒抗体。结果手术及正常对照组和实验组动物给药7次前血清处理的细胞均出现明显细胞病变效应及强荧光。之后各剂量组动物血清均对腺病毒有不同程度的中和作用,停药后13周到14周抗体水平很低或已不存在。同时观察到动物性别及给药剂量大小无差异。结论大鼠肌注Ad-HGF 7次后,动物血清中可检测到抗腺病毒抗体,停药后13周或14周抗体基本消失,此结果对Ad-HGF的实际应用具有指导意义。 展开更多

关键词 AD-HGF 抗腺病毒抗体 血清 检测

下载PDF 职称材料

股动脉周围骨骼肌多点注射携带肝细胞生长因子基因重组质粒糖尿病大鼠肢体缺血骨骼肌的组织学变化 被引量：1

10

作者 胡朝昶 哈小琴 +3 位作者 何玉梅 谢富强 邢占奎 韩军平 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第15期2724-2727,共4页

背景:质粒载体因其较好的生物安全性和较高的体内维持时间,被广泛应用于基因治疗研究领域。目的:观察携带肝细胞生长因子基因重组质粒pUDKH在糖尿病后肢缺血模型大鼠股动脉周围骨骼肌多点注射15d后骨骼肌组织的病理学变化。方法:利用ST... 背景:质粒载体因其较好的生物安全性和较高的体内维持时间,被广泛应用于基因治疗研究领域。目的:观察携带肝细胞生长因子基因重组质粒pUDKH在糖尿病后肢缺血模型大鼠股动脉周围骨骼肌多点注射15d后骨骼肌组织的病理学变化。方法:利用STZ制备SD大鼠糖尿病模型。随机分为3组,建模后24h内高浓度组注射pUDKH 200μg/只,低浓度组注射pUDKH 100μg/只,对照组注射等体积医用注射用水。15d后,取大鼠的骨骼肌组织进行病理学观察。结果与结论:对照组肌浆萎缩变性,纤维化增生并透明变性,浆细胞浸润变性,肌间隙变宽,有局灶性脓肿形成;pUDKH治疗后有丰富的微血管形成,高浓度组肌纤维横纹较低浓度组保持完整。提示携载肝细胞生长因子基因质粒pUDKH对糖尿病大鼠肢端缺血有治疗作用。 展开更多

关键词 肢体缺血 pUDKH 糖尿病 基因治疗 疾病模型 动物

下载PDF 职称材料

比格犬注射重组腺病毒Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体及中和抗体的检测

11

作者 哈小琴 赵治华 +3 位作者 吕同德 劳妙芬 吴丹莉 吴祖泽 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第8期676-678,共3页

目的:观察Beagle犬重复给予Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体及抗肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)抗体的出现时间及消失规律.方法:将24只比格犬随机分为四组:正常对照组、手术对照组、Ad-HGF小剂量组(2.4×107pfu/kg)和Ad-... 目的:观察Beagle犬重复给予Ad-HGF后血清中抗腺病毒抗体及抗肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)抗体的出现时间及消失规律.方法:将24只比格犬随机分为四组:正常对照组、手术对照组、Ad-HGF小剂量组(2.4×107pfu/kg)和Ad-HGF大剂量组(2.4×108pfu/kg).Ad-HGF各组犬给予不同剂量Ad-HGF共14次.在给药2次后分别利用病毒中和反应和ELISA方法检测血清中抗腺病毒抗体和抗HGF抗体.结果:手术组、正常对照组及实验组动物于给药前及给药3次时血清细胞均未出现明显中和反应.给药4次后各剂量组动物血清均对腺病毒有不同程度中和作用,至停药后12wk抗体水平很低或已不存在.各时间点血清样品中未检测到抗HGF抗体.结论:犬肌注Ad-HGF4次后动物血清中检测到了抗腺病毒抗体,停药4wk后抗体水平有不同程度下降,直至12wk后血清中腺病毒抗体基本消失. 展开更多

关键词 AD-HGF 抗腺病毒抗体 中和抗体 血清

下载PDF 职称材料

携带人白细胞介素-1受体拮抗剂基因腺病毒质粒的构建

12

作者 王刚 哈小琴 常雅萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期5-7,15,共4页

目的构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒。方法用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1RacDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-IRa。经PmeⅠ酶切线性化... 目的构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒。方法用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1RacDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-IRa。经PmeⅠ酶切线性化,穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,二质粒在细菌内同源重组,得到重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒。脂质体介导pAd/hIL-1Ra质粒转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染HEK293细胞扩增病毒后,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、纯度及滴度。结果经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭质粒和重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒。扩增纯化后,重组腺病毒颗粒数为1.19×1011OPU/ml,A260/A280为1.279,滴度为3.6×109CCID50/ml。结论已成功构建重组腺病毒质粒pAd/hIL-1Ra,为hIL-1Ra基因在腺病毒载体介导下的免疫抑制治疗研究奠定实验基础。 展开更多

关键词 同源重组 腺病毒 白细胞介素-1 受体拮抗剂

下载PDF 职称材料

携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌在大鼠胃溃疡治疗中的组织分布

13

作者 蒋泽斌 哈小琴 高鹏 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第16期1722-1727,共6页

目的:阐明携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门氏菌在大鼠胃溃疡治疗中的组织分布规律,为HGF在胃溃疡基因治疗中的实际应用提供依据.方法:乙酸诱发80只大鼠胃溃疡模型,随机分成2组:HGF灌胃组(40只)和绿色荧光蛋白(GFP)灌胃组(40只).... 目的:阐明携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门氏菌在大鼠胃溃疡治疗中的组织分布规律,为HGF在胃溃疡基因治疗中的实际应用提供依据.方法:乙酸诱发80只大鼠胃溃疡模型,随机分成2组:HGF灌胃组(40只)和绿色荧光蛋白(GFP)灌胃组(40只).将携带HGF和GFP基因真核表达质粒的减毒沙门氏菌分别给予大鼠灌胃,每只0.2mL,隔日1次,共3次.GFP灌胃组第1、3、5、7、9天分别处死大鼠3只,取胃、肠、肝、脾及肾组织制备成冰冻切片,荧光显微镜下观察目的基因组织分布;HGF灌胃组第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天分别处死大鼠3只,ELISA方法检测HGF在各组织中的表达;PCR方法检测真核表达载体在组织中的分布.结果:GFP组大鼠在荧光显微镜下观察到胃、肠组织有较强的荧光,在肝、脾、肾组织有微弱的荧光,荧光强度在第5、7天达到峰值;HGF组大鼠胃、肝、脾、肾、大肠、小肠组织,均检测到有HGF表达,但胃、肠组织中表达较高;大鼠胃、肝、脾、肾、大肠、小肠均可检测到真核表达载体的启动子CMV片段.结论:在大鼠胃溃疡治疗中,减毒沙门氏菌作为细胞载体以po方式可将携带目的基因的真核表达载体相对靶向性转入胃、肠组织中. 展开更多

关键词 肝细胞生长因子 减毒沙门氏菌 胃溃疡 绿色荧光蛋白 真核表达载体

下载PDF 职称材料

肝细胞生长因子对冠心病患者内皮祖细胞功能的影响 被引量：4

14

作者 董芳 李富军 +2 位作者 哈小琴 吕同德 贾庆华 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第12期1089-1092,共4页

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的影响,为HGF在冠心病治疗方面的应用提供研究基础。方法选择冠心病患者(冠心病组)和非冠心病患者(对照组)各15例,每组再随机分为重组人HGF(rhHGF)干... 目的观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)生物学功能的影响,为HGF在冠心病治疗方面的应用提供研究基础。方法选择冠心病患者(冠心病组)和非冠心病患者(对照组)各15例,每组再随机分为重组人HGF(rhHGF)干预组和非rhHGF干预组,ELISA法检测血浆中HGF水平。流式细胞仪检测EPCs数量,并体外选择培养EPCs,检测rhHGF对EPCs增殖、迁移和黏附能力的影响。结果与对照组比较,冠心痛组患者外周血EPCs数量明显减少,血浆HGF含量明显升高(P<0.01);EPCs增殖、黏附和迁移能力明显下降(P<0.05,P<0.01)。在冠心病组,与非rhHGF干预组比较,rhHGF干预组能明显促进冠心病患者FPCs增殖、黏附和迁移(P<0.05,P<0.01);在对照组,与非rhHGF干预组比较,rhHGF干预组仅促进对照组患者EPCs增殖,对黏附和迁移虽有促进作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HGF可增强冠心病患者EPCs的各项生物学功能,有望将HGF刺激EPCs的生物学活性的作用应用于冠心病的治疗。 展开更多

关键词 肝细胞生长因子 冠心痛 内皮细胞 千细胞 细胞计数 细胞运动

下载PDF 职称材料

减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：3

15

作者 董春娜 李刚 +4 位作者 李伟 张坤 史利军 哈小琴 胡永浩 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期1-5,共5页

根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol... 根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测. 展开更多

关键词 减蛋综合征病毒 环介导等温扩增 检测

下载PDF 职称材料

减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析

16

作者 董春娜 李刚 +2 位作者 邱文英 张坤 哈小琴 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期21-28,共8页

根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列... 根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性. 展开更多

关键词 减蛋综合征病毒 基因组 同源性 序列分析

下载PDF 职称材料

过表达钙整合素结合蛋白CIB诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡的实验研究 被引量：3

17

作者 惠玲 邹华 +6 位作者 王晓辉 吕同德 哈小琴 李富军 王建峰 杨霄鹏 贾庆华 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第3期267-271,共5页

目的观察CIB基因对人胶质瘤SHCcM细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法构建重组质粒pcDNA3-CIB，转染人胶质瘤细胞株SHG44，MTF观察各组细胞的体外生长情况，流式细胞术（FCM）测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量，Western—blot检测... 目的观察CIB基因对人胶质瘤SHCcM细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法构建重组质粒pcDNA3-CIB，转染人胶质瘤细胞株SHG44，MTF观察各组细胞的体外生长情况，流式细胞术（FCM）测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量，Western—blot检测CIB转染后凋亡相关蛋白的表达变化。结果RT—PCR、Western印迹显示pcDNA3-CIB转染组CIB的mRNA及CIB蛋白表达水平明显高于对照组；与对照组细胞相比，转染CIB的SHG44-CIB组细胞生长明显减缓（P〈0．01），SHG44-CIB组细胞G1、S期细胞减少，G2期细胞增多，凋亡细胞增加至19．2％；凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调，Bax表达上调。结论CIB在体外明显抑制SHG44细胞的生长并诱导其发生凋亡，CIB诱导的凋亡可能与Bcl-2及Bax表达的变化相关。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 凋亡 CIB 基因转染

原文传递

pUDKH基因治疗制剂临床前安全性初步分析 被引量：1

18

作者 哈小琴 吴祖泽 +3 位作者 袁丽珍 李元敏 毕建进 张庆林 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2006年第2期156-158,165,共4页

目的:观察大鼠肌肉注射pUDKH后,出现毒性反应的时间、性质和程度,为临床毒副反应的监测和确定初始安全剂量提供依据。方法:实验设3个组,即正常对照组、pUDKH小剂量(0.63 mg/kg)和大剂量(2.50 mg/kg)组,给药途径为肌肉注射,且每只大鼠的... 目的:观察大鼠肌肉注射pUDKH后,出现毒性反应的时间、性质和程度,为临床毒副反应的监测和确定初始安全剂量提供依据。方法:实验设3个组,即正常对照组、pUDKH小剂量(0.63 mg/kg)和大剂量(2.50 mg/kg)组,给药途径为肌肉注射,且每只大鼠的给药方式相同,每只大鼠共给药14次,停药后观察16周。试验期间观测一般药物反应,分析尿液生化和血清生化,测定大鼠血清中抗人肝细胞生长因子(HGF)的抗体,目的基因HGF在多种组织内的分布,病理组织学检查各脏器的组织结构。结果:试验中给药组动物未见药物毒性反应,尿生化指标基本无有意义的变化,各时间点血清生化也无明显有意义的改变。各时间点血清样品中未检测到抗HGF抗体。除了注射局部的肌肉组织检测到高表达的HGF外,其他组织未见到高表达的HGF。各脏器病理学检查均未见异常改变。结论:大鼠肌注pUDKH剂量为0.63 mg/kg和2.5 mg/kg两种,分别是大鼠起始有效剂量的3倍和12.5倍,各项观测指标未见明显有意义的改变,故在本试验条件下可视2.50 mg/kg以下为安全剂量,pUDKH基因治疗大鼠肢体缺血是安全、可行的。 展开更多

关键词 pUDKH 基因治疗 制剂 基因剂量 安全性 评价

原文传递

醋酸铅对人股动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应 被引量：2

19

作者 贾庆华 蒋军军 哈小琴 《职业与健康》 CAS 2010年第6期626-629,共4页

目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式... 目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24h后Giemsa,H.E染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。动脉内皮细胞和星形胶质细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bc1-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤动脉内皮细胞和星形胶质细胞,促进凋亡及影响血脑屏障。 展开更多

关键词 醋酸铅 人股动脉内皮细胞HFAEC 星形胶质细胞C8 血脑屏障

原文传递

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

20

作者 贾庆华 杨彩 +2 位作者 哈小琴 杨霄鹏 蒋军军 《职业与健康》 CAS 2011年第2期129-132,共4页

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达... 目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05)。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。 展开更多

关键词 醋酸铅 人股动脉内皮细胞 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3) 凋亡 血脑屏障

原文传递