内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析 被引量：5

1

作者 张玲 郝永清 +2 位作者 黄海碧 徐春光 程晨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期158-161,共4页

本试验无菌采取内蒙古地区某发病羊场的绵羊病变肺脏组织,接种于支原体液体培养基进行分离培养后获得1株支原体,根据分离株的培养特性、形态学观察及生化试验等,初步鉴定为绵羊肺炎支原体。然后提取分离株的基因组,用通用引物体外扩增... 本试验无菌采取内蒙古地区某发病羊场的绵羊病变肺脏组织,接种于支原体液体培养基进行分离培养后获得1株支原体,根据分离株的培养特性、形态学观察及生化试验等,初步鉴定为绵羊肺炎支原体。然后提取分离株的基因组,用通用引物体外扩增出分离株16SrRNA序列,将该序列与GenBank中已知33种支原体序列进行比较,结果表明该序列与绵羊肺炎支原体标准株Y-98的16SrRNA序列的同源性为99%,鉴定该分离株为绵羊肺炎支原体。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 分离 鉴定

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内蒙古地区乳样中牛支原体的分离及PCR鉴定 被引量：1

2

作者 许金朋 黄海碧 +1 位作者 王晓晖 郝永清 《动物医学进展》 北大核心 2015年第4期24-27,共4页

为检测内蒙古地区某牛场患乳房炎的奶牛乳样中是否存在牛支原体,同时建立直接提取乳样中牛支原体DNA进行PCR检测的方法,本研究无菌采集乳房炎乳样,通过支原体的分离培养、形态学观察和生化试验,初步鉴定分离株为牛支原体,然后提取液体... 为检测内蒙古地区某牛场患乳房炎的奶牛乳样中是否存在牛支原体,同时建立直接提取乳样中牛支原体DNA进行PCR检测的方法,本研究无菌采集乳房炎乳样,通过支原体的分离培养、形态学观察和生化试验,初步鉴定分离株为牛支原体,然后提取液体培养基菌体DNA进行牛支原体特异性PCR鉴定,同时,采用Chelex-100法直接提取原乳样中菌体DNA进行PCR鉴定,并测序分析扩增片段序列。液体培养物提取DNA与Chlex-100法直接提取原乳样菌体DNA进行特异性PCR均扩增出目的条带,该片段序列与GenBank中牛支原体oppD/oppF基因的同源性达到99.8%,证实分离株为牛支原体。说明Chlex-100法可直接提取乳样中牛支原体DNA进行快速PCR鉴定。 展开更多

关键词 牛支原体 乳房炎 牛乳 Chelex-100法 PCR鉴定

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大鼠IgG Fc片段与金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClfA的融合表达及其免疫学特性 被引量：3

3

作者 潘海婷 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期299-303,共5页

为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并... 为提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)串联表达的黏附素重组蛋白(r Fn BPB-Clf A)的免疫效力,本研究将RT-PCR扩增的大鼠Ig G Fc段基因与本实验室已构建的S.aureus Fn BPB-Clf A基因串联,采用SOE-PCR进行扩增,制备Fc-Fn BPB-Clf A融合基因,并将其克隆于p ET-32a(+)载体中进行原核表达。将表达的重组蛋白(r Fc-Fn BPBClf A)经乳头管注射(200μg/只)免疫哺乳期Wistar大鼠,并于加强免疫2周后,以1×109 cfu S.aureus经乳头管攻毒。结果表明,在加强免疫7 d后,与r Fn BPB-Clf A免疫组相比,r Fc-Fn BPB-Clf A免疫组血清和乳清中的抗体水平明显增高,而且Ig G水平动态检测结果表明,其特异性抗体上升趋势明显高于r Fn BPB-Clf A免疫组。攻毒保护试验证明,r Fc-Fn BPB-Clf A和r Fn BPB-Clf A免疫组对S.aureus清除率均显著高于对照组(p<0.01)。本研究结果表明,r Fc-Fn BPB-Clf A对S.aureus乳房炎的免疫效果更佳,为进一步研制有效防治S.aureus乳房炎疫苗提供了实验依据。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 大鼠IgG Fc基因 FnBPB-ClfA串联基因

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绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因的生物信息学分析及原核表达 被引量：1

4

作者 徐春光 郝永清 +3 位作者 张建华 刘波 高明华 李艳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期25-29,166,共6页

为了探讨绵羊肺炎支原体NM2010株假定P60样脂蛋白用于制备基因工程亚单位疫苗的可能性,试验运用ExPASy、SignalP 4.0、TMHMM 2.0、SOPMA、 PSORT 6.4、IEDB、BlastP、Hcluster_sg、Muscle等生物信息学软件,对绵羊肺炎支原体NM2010株P60... 为了探讨绵羊肺炎支原体NM2010株假定P60样脂蛋白用于制备基因工程亚单位疫苗的可能性,试验运用ExPASy、SignalP 4.0、TMHMM 2.0、SOPMA、 PSORT 6.4、IEDB、BlastP、Hcluster_sg、Muscle等生物信息学软件,对绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因编码蛋白的理化性质、跨膜区、信号肽、二级结构、亚细胞定位、B细胞抗原表位、蛋白功能和基因家族进行预测分析。利用人工合成方法获得P60成熟肽编码区基因序列,并克隆到表达载体pET-32a(+)上进行原核表达及Western-blot分析。结果表明:绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因编码蛋白的二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主,其结构稳定,可溶性较高;该编码蛋白有信号肽,亚细胞定位在外膜,可能是一种外膜蛋白,具有较好的抗原性;参与绵羊肺炎支原体烟酸和烟酰胺代谢途径,与绵羊肺炎支原体SC01株的GL000100(WP_010321430.1)、猪肺炎支原体7448株的0353(WP_011290189)属于同一家族,均为P60样脂蛋白。P60基因序列中的TGA成功突变为同义密码子TGG,重组蛋白的分子质量为74.0 ku,以可溶形式存在,具有良好的反应原性。说明P60重组蛋白可以作为绵羊支原体性肺炎基因工程亚单位疫苗的候选蛋白。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 假定P60样脂蛋白 生物信息学分析 基因序列人工合成 原核表达

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牛IgG Fc片段与FnBPB-ClfA串联表达及其对金黄色葡萄菌性奶牛乳腺炎的免疫效果 被引量：1

5

作者 崔健 郝永清 +2 位作者 赵红梅 杜琳 李松建 《动物医学进展》 北大核心 2017年第10期27-32,共6页

为了提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)黏附素FnBPB-ClfA基因表达蛋白对奶牛的免疫效力,应用RT-PCR扩增奶牛IgG Fc基因片段与构建的金黄色葡萄球菌(S.aureus)FnBPB-ClfA黏附素基因串联构建质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA,并通过双酶切将其克隆于p... 为了提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)黏附素FnBPB-ClfA基因表达蛋白对奶牛的免疫效力,应用RT-PCR扩增奶牛IgG Fc基因片段与构建的金黄色葡萄球菌(S.aureus)FnBPB-ClfA黏附素基因串联构建质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA,并通过双酶切将其克隆于pET32a(+),以构建质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA并进行诱导表达。以盐酸左旋咪唑(LH)或氢氧化铝(ALUM)为佐剂,与纯化的重组蛋白(bFcFnBPB-ClfA)混合以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注或首次免疫、二次免疫及三次免疫均以肌肉注射方式免疫临近干奶期的奶牛。用间接ELISA和Western blot对各组牛血清中的抗体进行监测,评价免疫效果。结果显示,以LH为佐剂免疫的(A组)牛21d时抗体水平最高,可达到1∶1 600;而以ALUM为佐剂免疫的B组和C组抗体水平分别为1∶800和1∶400。IgG水平动态监测结果表明,以LH为佐剂免疫牛的血清中特异性抗体上升趋势明显高于其他免疫组。研究结果表明,以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注的方式较好,并且bFc-FnBPB-ClfA与LH佐剂混合后免疫奶牛能最有效激发奶牛免疫反应。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 奶牛IgG FC 重组蛋白Fc—FnBPB—ClfA

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绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

6

作者 郑佳琪 黄海碧 +3 位作者 王晓晖 李真亚 邢蒙恩 郝永清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第9期2240-2245,共6页

为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体... 为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545bp和精氨酸支原体806bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 精氨酸支原体 双重PCR

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Chelex-100法直接提取乳样中奶牛乳房炎主要致病菌DNA方法的建立 被引量：5

7

作者 许金朋 郝永清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期25-29,共5页

为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分... 为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。 展开更多

关键词 Chelex-100 奶牛乳房炎 细菌DNA PCR 敏感性

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牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸的研制 被引量：1

8

作者 卞宇晨 田广原 +7 位作者 王宇琛 于佳梁 周雅坪 郭婷 赵红梅 赵逢淼 孙雅婕 周雨霞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2221-2227,2250,共8页

将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体... 将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体的胶体金免疫层析试纸,并对该试纸进行了性能评价。结果显示,该试纸在检测副结核分枝杆菌(MAP)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛支原体(M.bovis)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;该试纸在检测IBRV标准阳性血清时敏感性为1∶16;将该试纸与进口商品化ELISA试剂盒共同检测60份待检牛血清,两者的阳性符合率为93.3%,阴性符合率为100%,总符合率为96.7%。结果表明,本试验建立的胶体金免疫层析试纸可在10~15 min完成检测,具有快速、准确、简便等特点,为临床定性检测及现场诊断牛传染性鼻气管炎提供了有效工具。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒抗体 gD蛋白 gE蛋白 胶体金免疫层析试纸

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鉴别显色培养基在奶牛乳房炎病原菌快速鉴定中的应用 被引量：3

9

作者 吕天星 李松建 郝永清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期851-860,共10页

为研发用于奶牛乳房炎常见病原菌分离鉴定的鉴别显色培养基,并检验其与普通分离鉴定培养基辅以生化鉴定和16S rRNA核酸序列测定两种传统方法鉴定结果的一致性,笔者以生物信息学方法筛出各种属细菌的特异性酶、可作为唯一碳源发酵产酸的... 为研发用于奶牛乳房炎常见病原菌分离鉴定的鉴别显色培养基,并检验其与普通分离鉴定培养基辅以生化鉴定和16S rRNA核酸序列测定两种传统方法鉴定结果的一致性,笔者以生物信息学方法筛出各种属细菌的特异性酶、可作为唯一碳源发酵产酸的碳源,然后合成酶显色底物,连同碳源、酸碱指示剂制备显色培养基,将各种属标准菌株、野生型菌株涂布培养,评估菌落形态、菌落颜色及培养基基质颜色变化。采集隐性乳房炎(CMT法检测)及临床型乳房炎病例的牛奶样品(絮状物、凝块、清亮状或血乳)共计482份,用鉴别显色培养基和两种传统方法进行病原菌的分离、鉴定。鉴别显色培养基上菌落纯化后提取DNA用于16S rRNA序列扩增,产物送去测序(n=194)。以两种传统方法为参考,判定鉴别显色培养基鉴定病原菌的可靠性,用SAS 9.4的FREQ程序计算鉴别显色培养基的简单科恩κ系数。鉴别显色培养基上常见乳房炎病原菌不同种属的菌落形态和培养基基质颜色明显不同,肉眼即可辨别。鉴别显色培养基与两种传统方法鉴定结果的一致性参数分别为κ=0.70、κ=0.96。鉴别显色培养基能够作为常见奶牛乳房炎病原菌的标准鉴定方法。 展开更多

关键词 奶牛 乳房炎 病原菌快速鉴定 鉴别显色培养基

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绵羊肺炎支原体及其脂质相关膜蛋白通过Toll样受体2激活MAPK信号通路诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的研究 被引量：3

10

作者 白帆 吴金迪 +3 位作者 王晓晖 吕天星 王艳芳 郝永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期411-417,共7页

为验证绵羊肺炎支原体(M. ovi)或脂质相关膜蛋白(LAMPs)是否通过Toll样受体2(TLR2)诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的表达,本研究利用不同浓度的M.ovi或LAMPs刺激C57BL/6J WT小鼠及Tlr2-/-基因缺失小鼠的腹腔巨噬细胞12 h后,利用荧光定量PCR... 为验证绵羊肺炎支原体(M. ovi)或脂质相关膜蛋白(LAMPs)是否通过Toll样受体2(TLR2)诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的表达,本研究利用不同浓度的M.ovi或LAMPs刺激C57BL/6J WT小鼠及Tlr2-/-基因缺失小鼠的腹腔巨噬细胞12 h后,利用荧光定量PCR(qPCR)检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平。结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞TNF-α基因的转录水平明显受到抑制。进一步以终浓度为1×10^(7)cfu/mL M.ovi或8μg/mL LAMPs分别刺激C57BL/6J WT小鼠和Tlr2-/-基因缺失小鼠的巨噬细胞,不同时间后利用qPCR检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平;利用流式细胞术检测C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达水平;采用ELISA方法检测两种小鼠巨噬细胞上清液中TNF-α的分泌水平;利用western blot检测细胞中MAPK信号通路的激活。qPCR结果显示,以M. ovi或LAMPs经不同时间刺激的C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TNF-α基因的转录水平均明显受到抑制;流式细胞术检测结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TLR2蛋白的表达水平均不同程度上升;ELISA结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TNF-α蛋白的表达水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达则明显受到抑制;Western blot结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞经M. ovi或LAMPs刺激后MAPK信号通路中各信号蛋白(Erk、p38、JNK)均发生磷酸化反应,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞在受到这两种物质刺激后MAPK信号通路明显受到抑制。上述结果表明,M. ovi及其LAMPs可通过小鼠腹腔巨噬细胞的TLR2激活MAPK信号通路,继而引起细胞因子TNF-α的分泌增多。本研究首次证实M. ovi及其LAMPs是通过TLR2及MAPK信号通路引起小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的分泌水平发生变化,为进一步明确巨噬细胞参与抗M. ovi天然免疫应答的机制奠定基础。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 脂质相关膜蛋白 TOLL样受体2 TNF-Α

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FcRn介导Fc与金黄色葡萄球菌毒力因子融合蛋白跨细胞转运至局部免疫触发位点

11

作者 吕天星 郝永清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1974-1980,共7页

为了探究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子的重组蛋白能否经上皮屏障被转运至特定的乳腺局部免疫触发位点,本研究对金黄色葡萄球菌毒力因子重组蛋白FnBPB-ClfA和Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运机制、新生儿Fc受体(FcRn)是否参与... 为了探究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子的重组蛋白能否经上皮屏障被转运至特定的乳腺局部免疫触发位点,本研究对金黄色葡萄球菌毒力因子重组蛋白FnBPB-ClfA和Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运机制、新生儿Fc受体(FcRn)是否参与此进程进行了验证。原代奶牛乳腺上皮细胞(pbMECs)接种于Transwell嵌套内的多孔膜上,培养至极性状态且细胞屏障完整,用于胞吞转运试验。将pbMECs对重组蛋白的胞吞转运试验设置为温度处理组(37℃和4℃)、蛋白A处理组、胞转途径抑制剂处理组。结果表明,2种重组蛋白均可被转运跨过pbMECs屏障,该转运作用呈温度依赖性,可能与囊泡介导的转运路径及FcRn受体有关,排除了细胞旁路扩散的可能。蛋白A对FnBPB-ClfA的跨细胞转运及亚细胞定位无明显影响,但明显减少了Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运及其在细胞膜蛋白、骨架蛋白中的数量,说明Fc-FnBPB-ClfA的Fc与FcRn的结合在胞吞转运作用中发挥重要作用。LY294002、非律平以剂量-效应关系分别降低了FnBPB-ClfA、Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运。结果表明,Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA能经胞吞转运作用跨过pbMECs屏障至局部免疫触发位点,且FcRn参与并促进了Fc融合蛋白的胞吞转运作用。 展开更多

关键词 奶牛 乳腺局部免疫 金黄色葡萄球菌 新生儿Fc受体 FC融合蛋白 原代奶牛乳腺上皮细胞 胞吞转运

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丝状支原体山羊亚种脂蛋白LPPA基因的定点突变及原核表达 被引量：6

12

作者 张玲 郝永清 +2 位作者 徐春光 黄海碧 张爱荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第10期74-76,共3页

采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究。该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结... 采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究。该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结合定点突变的方法将LPPA基因序列中TGA同义突变为TGG,并构建重组表达质粒pET-LPPA,然后将其转入宿主菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达产物经SDSPAGE检测,在64 ku处出现目的条带,将重组蛋白纯化后经Western blot分析,重组蛋白能与Mmc模式株PG3兔高免血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 丝状支原体山羊亚种 LPPA 定点突变 表达

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丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组序列测定与分析 被引量：5

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作者 徐春光 郝永清 +2 位作者 郝瑞霞 张玲 刘波 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2669-2678,共10页

【目的】全面了解丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组序列信息,寻找该病原体的主要保护性抗原基因。【方法】利用高通量Illumina Hi Seq 2000测序技术对丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组进行测序与拼接,借助软件和数据库对全基因组序... 【目的】全面了解丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组序列信息,寻找该病原体的主要保护性抗原基因。【方法】利用高通量Illumina Hi Seq 2000测序技术对丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组进行测序与拼接,借助软件和数据库对全基因组序列所承载的遗传信息进行注释和分析。【结果】丝状支原体山羊亚种PG3株基因组大小为1 025 065 bp,G+C%为23.6%,预测含有846个编码基因。根据COG分类和KEGG代谢通路分类,基因组中绝大多数基因主要与蛋白翻译、核糖体结构与合成、DNA复制与修复、糖代谢和环境信号传递与转换方面有关。该菌株具有丝状支原体山羊亚种特有的麦芽糊精/麦芽糖代谢途径。与Mmc str.95010的基因组的比对结果显示二者具有良好的共线性关系。在基因组中发现3个串联排列的可变表面脂蛋白基因,即GL000459、GL000461和GL000462。【结论】获得丝状支原体山羊亚种PG3株的全基因组序列,分析基因组基本特征,初步解析3个串联排列的可变表面脂蛋白基因,为进一步研究支原体可变表面脂蛋白的功能和研制生物工程疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 丝状支原体山羊亚种 全基因组序列测定 可变表面脂蛋白

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