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内蒙古绒山羊原始生殖细胞(PGCs)的培养与鉴定 被引量：1
1
作者 刘羿羿 赵丽霞 +2 位作者 李燕 白俊 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期92-96,共5页
本试验从内蒙古白绒山羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞体外培养并进行了鉴定。为建立内蒙古绒山羊原始生殖细胞(pri mordial germcells,PGCs)的培养体系,试验对比了A、B、C3组不同的培养条件对内蒙古绒山羊原始生殖细胞传代数的影响... 本试验从内蒙古白绒山羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞体外培养并进行了鉴定。为建立内蒙古绒山羊原始生殖细胞(pri mordial germcells,PGCs)的培养体系,试验对比了A、B、C3组不同的培养条件对内蒙古绒山羊原始生殖细胞传代数的影响。RT-PCR鉴定结果表明,β-actin、hTERT、GAPDH、Nanog、Oct3/4为阳性、AKP染色为阳性;免疫荧光检测胚胎干细胞特异标志物Oct3/4、SSEA-3、SSEA-4呈阳性。未添加任何因子的A培养体系仅能传1代,添加LIF及Insulin的B培养体系可以传至4代,添加LIF、Insulin及优质胎牛血清的C组培养体系可以传至9代。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 Oct3/4 免疫荧光 NANOG
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内蒙古白绒山羊的体细胞克隆 被引量：4
2
作者 白春玲 张立 +9 位作者 吴侠 焦泽华 雪莲 魏著英 程磊 段彪 康峰 王建国 旭日干 李光鹏 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期190-195,共6页
内蒙古白绒山羊是具有悠久历史的绒肉兼用的品种,对荒漠和半荒漠环境有较强的适应性.山羊绒是来自绒山羊的细绒毛,具有极高的商业价值.为了扩大优秀绒山羊数量,本试验尝试利用体细胞克隆技术进行绒山羊克隆研究.从一只成年优秀公绒山羊... 内蒙古白绒山羊是具有悠久历史的绒肉兼用的品种,对荒漠和半荒漠环境有较强的适应性.山羊绒是来自绒山羊的细绒毛,具有极高的商业价值.为了扩大优秀绒山羊数量,本试验尝试利用体细胞克隆技术进行绒山羊克隆研究.从一只成年优秀公绒山羊中,取其耳缘组织,培养获得成纤维细胞.从当地屠宰场获得山羊卵巢,抽取卵母细胞并体外培养成熟.然后以绒山羊成纤维细胞为核供体,通过体细胞克隆技术生产克隆胚胎.核移植重构胚的融合率、卵裂率和囊胚发育率分别为75.8%,72.6%和11.6%.将处于1-至2-细胞期的胚胎移植入同期发情受体母山羊输卵管中,于2009年4月30日诞生了一只克隆绒山羊.该克隆羊的生长状态及产绒量与细胞核供体山羊相一致,呈现良好的发育态势,说明体细胞克隆技术可以成为良种绒山羊的扩繁途径. 展开更多
关键词 体细胞克隆 绒山羊 胚胎移植 卵母细胞
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药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展 被引量：2
3
作者 吴应积 张学明 +2 位作者 杨东山 罗奋华 旭日干 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期94-100,共7页
用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的... 用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的转基因动物制作方法。综述了这一技术的优点,概括描述了了乳腺生物反应器表达载体的构建方法,及转基因动物的制作方法。讨论了这些方法的优缺点及技术改进的发展方向,特别是介绍了最近出现的、有研究和应用价值的用精原干细胞制作转基因动物的方法。 展开更多
关键词 乳腺 生物反应器 载体构建 转基因技术
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舍饲与放牧条件下内蒙古白绒山羊血液学指标的测定与分析 被引量：2
4
作者 王志 杨晓野 +3 位作者 杨莲茹 王建国 禹旺盛 旭日干 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第4期297-299,共3页
为探讨舍饲与放牧条件下内蒙古白绒山羊血液学指标的差异。采用全自动血液分析法和Westergren法,分别对舍饲和放牧条件下56只内蒙古白绒山羊血液样本的12项血液学指标进行了测定和统计学分析。结果显示:白细胞总数(WBC)、血小板含量(PLT... 为探讨舍饲与放牧条件下内蒙古白绒山羊血液学指标的差异。采用全自动血液分析法和Westergren法,分别对舍饲和放牧条件下56只内蒙古白绒山羊血液样本的12项血液学指标进行了测定和统计学分析。结果显示:白细胞总数(WBC)、血小板含量(PLT)无显著差异(P>0.05);红细胞数(RBC)、血红蛋白量(HGB)、红细胞压积容量(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白量(MCH)、平均血红蛋白浓度,舍饲组显著低于放牧组(P<0.05);红细胞沉降速度(ESR),舍饲组显著高于放牧组(P<0.05)。提示舍饲饲养方式下的白绒山羊与放牧条件下相比较,血液学指标有明显的贫血倾向,可能是饲养方式改变之后,饲料单一造成的营养不良性贫血所致。 展开更多
关键词 白绒山羊 血液学 测定 分析
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内蒙古绒山羊皮肤毛囊差异表达序列标签的筛选及分析
5
作者 苏立宁 李华 +1 位作者 刘东军 旭日干 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1499-1503,共5页
旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登... 旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登录号JK711022-JK711036),其中3条ESTs与毛囊发育有关,5条ES-Ts与次级毛囊和皮脂腺的发育有关。生物信息分析显示,JK711036与甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因有关,其他ESTs功能未知。结果表明,胎儿期初级毛囊和次级毛囊在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,这将为进一步研究山羊毛和绒的形成分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 绒山羊 毛囊 DDRT-PCR 表达序列标签
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内蒙古白绒山羊端粒酶在不同组织中的表达与活性
6
作者 岳永莉 于海泉 《实验动物科学》 2010年第5期49-51,共3页
真核生物体内的端粒酶(Telomerase)是一种逆转录酶,能够特异地延长端粒DNA长度,从而调节细胞的分裂与增殖,端粒酶主要包括RNA组分(Telomerase RNA Component,TERC)和逆转录酶组分(Telomerase ReverseTranscriptase,TERT)。本研究利用RT-... 真核生物体内的端粒酶(Telomerase)是一种逆转录酶,能够特异地延长端粒DNA长度,从而调节细胞的分裂与增殖,端粒酶主要包括RNA组分(Telomerase RNA Component,TERC)和逆转录酶组分(Telomerase ReverseTranscriptase,TERT)。本研究利用RT-PCR技术对绒山羊端粒酶这两种组分在心脏、肾脏、肝脏、睾丸组织中的mRNA转录水平进行了检测,结果表明,TERC基因在以上四种组织中均有表达,而TERT基因则仅在肾脏和睾丸中有表达,且睾丸中的转录水平明显高于肾脏,而在心脏和肝脏中未检测到。同时,通过端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP)对四种组织中的端粒酶活性状态进行了检测,在心脏和肝脏未检测到端粒酶活性,肾脏显示有较弱的活性,睾丸则表现出较强的活性,这与TERT基因的转录情况一致。由此可见绒山羊端粒酶的活性与不同组织的细胞增殖特性相关;端粒酶两种组分的转录是相互独立的,逆转录酶TERT组分是端粒酶活性的限速成分。 展开更多
关键词 绒山羊 端粒酶 活性检测
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胰岛素样生长因子及其受体mRNAs在绵羊生殖系统中的表达和分布 被引量：1
7
作者 仓明 张东 旭日干 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期876-881,共6页
为检测胰岛素样生长因子(IGFs)及其受体(IGFR)mRNAs在绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管中的表达,探讨绵羊胚胎早期发育过程中其发育环境——生殖道中生长因子的表达、分泌及其作用,取绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管,经固定、切... 为检测胰岛素样生长因子(IGFs)及其受体(IGFR)mRNAs在绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管中的表达,探讨绵羊胚胎早期发育过程中其发育环境——生殖道中生长因子的表达、分泌及其作用,取绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管,经固定、切片、免疫染色,观察IGFs mRNAs的表达和分布情况。同时用RT-PCR技术研究了各组织中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF-ⅠR、IGF-ⅡR mRNAs的表达情况。结果表明,IGFs mRNAs在绵羊发情周期早期的卵巢、子宫和输卵管中都有表达,4种因子表达模式相似:在卵巢中,IGFs主要定位于卵泡颗粒细胞,间质细胞亦有少量表达。在输卵管中,上皮细胞免疫染色呈阳性;在子宫中,腺细胞及上皮细胞的阳性信号强于固有层。RT-PCR检测表明IGFs mRNAs在3种组织中均有表达。 展开更多
关键词 绵羊 胰岛素样生长因子 发育
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同期发情及内窥镜输精技术在肉羊生产中的推广应用 被引量：1
8
作者 焦泽华 王建国 +2 位作者 王小卫 莫德日乐吐 于险峰 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第S1期278-280,共3页
为促进同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的推广应用,达到一年两产或两年三产的目的,进而改变肉羊产业的生产方式及经济结构,在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区本地杂交羊进行同期发情及腹腔内窥镜输精处理。繁殖季节与非繁殖季... 为促进同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的推广应用,达到一年两产或两年三产的目的,进而改变肉羊产业的生产方式及经济结构,在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区本地杂交羊进行同期发情及腹腔内窥镜输精处理。繁殖季节与非繁殖季节的发情率均为93%以上,差异不显著(P>0.05)。部分具有小尾寒羊血统的杂交羊同期发情处理后的第6天手术检查黄体,统计排卵率2.45个,只和1.68个,只。但是腹腔内窥镜输精的受胎率显著高于人工授精的受胎率。 展开更多
关键词 同期发情 内窥镜输精 推广应用
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同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业化中的推广应用 被引量：1
9
作者 焦泽华 王建国 +1 位作者 莫德日乐吐 包花拉 《畜牧与饲料科学》 2014年第5期19-21,共3页
同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的广泛应用,对于改变肉羊产业的生产方式及经济结构,达到一年两产或两年三产的目的具有重要意义。在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区当地杂交羊进行了同期发情及腹腔内窥镜输精处理。结果表明,... 同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的广泛应用,对于改变肉羊产业的生产方式及经济结构,达到一年两产或两年三产的目的具有重要意义。在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区当地杂交羊进行了同期发情及腹腔内窥镜输精处理。结果表明,繁殖季节与非繁殖季节的发情率均在93%以上,差异不显著;对部分具有小尾寒羊血统的杂交羊同期发情处理后的第6天进行手术检查黄体,其排卵率分别为2.45个/只和1.68个/只。在受胎率方面,腹腔内窥镜输精的受胎率显著高于常规法人工授精的受胎率。 展开更多
关键词 同期发情 腹腔内窥镜输精 肉羊 推广应用
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EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
10
作者 段彪 邵华 +2 位作者 魏著英 王凤武 旭日干 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期417-422,共6页
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光... 生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。 展开更多
关键词 EGFP转基因小鼠 嵌合体 杂种ES细胞 生殖系
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细胞核移植技术的发展及其应用
11
作者 韩堃 刘东军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期467-470,共4页
自“克隆”一词被提出到克隆羊“多莉”的降生,克隆已经发展了近一个世纪,其中细胞核移植技术始终是克隆技术的核心。本文综述了细胞核移植技术的克隆背景、分类、发展历程、影响因素及应用的研究进展。
关键词 克隆 细胞核移植技术
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体细胞克隆技术在企业肉羊繁殖生产中的初步应用 被引量：2
12
作者 孟蝶 白春玲 +5 位作者 银凤霞 苏广华 魏著英 程磊 李俊龙 李光鹏 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期404-408,共5页
虽然体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)的总体效率不高,但其潜在的开发价值仍值得尝试.本试验与企业密切合作,并以企业为开发主体,开展优秀杜泊种公羊的克隆生产与应用研究.结果表明,舍饲条件下的受体母羊比草原放养... 虽然体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)的总体效率不高,但其潜在的开发价值仍值得尝试.本试验与企业密切合作,并以企业为开发主体,开展优秀杜泊种公羊的克隆生产与应用研究.结果表明,舍饲条件下的受体母羊比草原放养母羊更适合于作克隆胚胎移植受体,同期发情处理方式与胚胎运输影响克隆胚胎的妊娠效率.在过去3年间,共有100只受体羊妊娠至3个月以上,妊娠率为13.6%.目前有61只健康存活.其中一部分克隆公羊作为种羊与本地蒙古羊配种,参与企业的肉羊繁殖生产.由此可以看出,以企业为主体的利用克隆技术进行优秀种羊规模化生产是可行的. 展开更多
关键词 动物克隆 家畜 规模化生产 杜泊羊
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奶牛体细胞核移植技术的商业化应用
13
作者 孙伟 郭继彤 +6 位作者 巴特尔 李荣凤 王建国 李明 胡树香 王春生 李喜和 《中国奶牛》 2012年第17期23-26,共4页
为了提高奶牛体细胞核移植产业化生产应用效率,拟通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎的体外生产技术条件,达到高效生产优质奶牛克隆胚胎进行克隆奶牛生产的目的。结果表明,从生产效率的角度考虑,卵母细胞直接进行盲吸去核处理,供体细胞无... 为了提高奶牛体细胞核移植产业化生产应用效率,拟通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎的体外生产技术条件,达到高效生产优质奶牛克隆胚胎进行克隆奶牛生产的目的。结果表明,从生产效率的角度考虑,卵母细胞直接进行盲吸去核处理,供体细胞无需进行同期饥饿处理,直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎,融合后的克隆胚胎在密封的混合三气(5%CO2+5%O2+90%N2)的气相条件下进行体外培养,利用西门塔尔牛做受体可以大规模地进行高产奶牛的商业化克隆。 展开更多
关键词 高产奶牛 体细胞 去核 核移植 条件优化
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大鼠脂肪间充质干细胞的分离鉴定与生物学特性研究 被引量：5
14
作者 岳永莉 张祥 +1 位作者 张丽春 于海泉 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第11期1309-1316,共8页
脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,在组织器官修复方面具有潜在应用前景。体外培养条件下脂肪间充质干细胞增殖活性和分化潜能的维持对其应用研究具有重要意义。该... 脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,在组织器官修复方面具有潜在应用前景。体外培养条件下脂肪间充质干细胞增殖活性和分化潜能的维持对其应用研究具有重要意义。该研究通过大鼠腹股沟部脂肪组织分离获得了脂肪间充质干细胞,并对其细胞生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞克隆形成等进行了检测,从而筛选出细胞生长最适的血清及浓度;再进一步对筛选条件下培养的大鼠脂肪间充质干细胞进行了免疫荧光检测、流式细胞术分析和诱导分化能力鉴定。结果显示,大鼠脂肪间充质干细胞在20%血清浓度下生长状态最好,增殖较快,细胞群体倍增时间较短,细胞克隆形成率可达(27.33±0.58)%。分离的大鼠脂肪间充质干细胞中CD44、CD90、CD106的阳性率分别为99.12%、99.59%、65.81%,CD34分子呈阴性。诱导后,细胞经油红O、碱性磷酸酶、阿新兰染色,结果表明,细胞具有向脂肪、骨、软骨方向分化的潜能。以上结果表明,成功建立了大鼠脂肪间充质干细胞系。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 血清 生物学特性
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哺乳动物精原干细胞的研究进展 被引量：3
15
作者 萨初拉 顾婷玉 +3 位作者 何志颖 Muren Herrid 王欣 乌云毕力格 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期392-399,共8页
精原干细胞是雄性体内可以永久维持的成体干细胞,它具有自我更新和分化的能力,保证了雄性个体生命过程中精子发生的持续进行,从而实现将遗传信息传递给下一代。精原干细胞不仅可在体外实现长期培养或诱导分化为各级生精细胞,并且可在特... 精原干细胞是雄性体内可以永久维持的成体干细胞,它具有自我更新和分化的能力,保证了雄性个体生命过程中精子发生的持续进行,从而实现将遗传信息传递给下一代。精原干细胞不仅可在体外实现长期培养或诱导分化为各级生精细胞,并且可在特定条件下将其诱导去分化成为多能性干细胞。同样,这种多能性干细胞如同胚胎干细胞,可被诱导形成造血细胞、神经元细胞、肌细胞等多种类型细胞。鉴于其独具的生物学特性,精原干细胞在揭示精子的发生机制、治疗雄性不育和转基因动物等研究中具有重要价值。该文对精原干细胞在生物学特性、纯化培养、移植、体外诱导分化及其相关调控方面的各项研究进行了小结,综述了近年来的研究历程和最新研究成果。 展开更多
关键词 精原干细胞 诱导分化 移植 调控
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奶牛X性控冻精应用研究 被引量：34
16
作者 王建国 周文忠 +5 位作者 钱松晋 赵锡安 秦应和 田见辉 旭日干 李喜和 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第B09期191-192,共2页
利用SX—MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子，将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率，为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果：（1）取不同种公牛、不同批次的X... 利用SX—MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子，将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率，为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果：（1）取不同种公牛、不同批次的X性控冻精及普通冻精解冻后倒人5ml。试管内摇匀，至37℃水浴锅中，每2h检测一次精子活力，4h后每小时检测一次精子活力，直至无运动精子。结果奶牛X性控冻精存活时间为5～12h，比同种普通精于的存活时间短2～10h。（2）应用奶牛X性控冻精人工授精的母牛的情期受胎率（59．4％=342／576）与普通冻精的情期受胎率（60．6％=129／213）相比，无显著差异（P〉0．05）。奶牛X性控冻精母犊出生准确率93．3％（319／342），极显著地高于普通冻精48．8％（63／129）的母犊率（P〈0．001）。且应用奶牛X性控冻精人工授精后的青年牛的情期受胎率（65．6％=240／366）极显著的高于经产牛的情期受胎率（48．6％=102／210）（P〈0．001）。（3）在母牛发情结束后6～8h左右进行人工授精，其情期受胎率为67．1％（116／173），显著地高于在母牛发情开始后8～12h进行人工授精56．1％（226／403）的情期受胎率（P〈0．01）。（4）在准确判断母牛卵巢上卵泡发育状态的前提下，将精液全部输至发育侧子宫角大弯处，其情期受胎率62．7％（289／461），高于母牛每侧子宫角输1／2支X性控冻精46．1％（53／115）的情期受胎率，但二者之间差异不显著（P〈0．05）。研究结果表明应用奶牛X性控冻精进行人工授精，其受胎率与奶牛的经产与否、授精时间和输精部位有关。 展开更多
关键词 奶牛 X/Y精子分离 X性控冻精 存活时间 人工授精 受胎率
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IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究 被引量：13
17
作者 郭旭东 尹俊 +3 位作者 杨东山 毛舒燕 宝明涛 旭日干 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1460-1467,共8页
本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光... 本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb)。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。 展开更多
关键词 绒山羊 胰岛素样生长因子l 红色荧光蛋白 毛囊细胞 胎儿成纤维细胞
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ω-3转基因克隆绵羊诞生 被引量：6
18
作者 段彪 程磊 +5 位作者 苏广华 刘欣 胡晓明 刘坤 李俊龙 李光鹏 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期121-122,共2页
我们构建了含有bfat-1表达载体pIE-bF1,通过脂质体介导转染获得转基因细胞系,再以核移植技术获得转基因克隆胚胎。胚胎移植后,于2010年10月27日出生两只克隆羊。经检测均为转ω-3基因克隆绵羊。
关键词 转基因细胞系 克隆绵羊 ω-3 脂质体介导 核移植技术 表达载体 克隆胚胎 胚胎移植
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绵羊角蛋白关联蛋白KAP6-1基因5′端调控区的分子克隆及测序结果比较 被引量：9
19
作者 郭旭东 毛舒燕 +2 位作者 宝明涛 尹俊 旭日干 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期58-63,共6页
根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP 6-1)基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,连接到pM D 19T载体中获得该片段克隆.经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所... 根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP 6-1)基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1 042 bp的特异性片段,连接到pM D 19T载体中获得该片段克隆.经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所需的目的片段.DNA测序结果也证明该克隆片段与原基因5′端调控区序列相比具有很高的一致性.研究结果为今后制备转基因克隆动物,在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础. 展开更多
关键词 角蛋白关联蛋白6-1 毛囊细胞 调控区序列
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肉苁蓉对负荷运动小鼠肝脏保护作用的探讨 被引量：6
20
作者 赵锡安 阎晓红 +2 位作者 侯金凤 闫美荣 刘东军 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期311-315,共5页
采用HE染色法、糖原染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究肉苁蓉对负荷运动小鼠肝组织、糖原及乳酸脱氢酶同工酶(LDH)活性的影响.结果显示负荷运动小鼠肝组织结构损伤严重,糖原减少、LDH5同工酶活性显著升高;服用肉苁蓉后负荷运动小鼠肝... 采用HE染色法、糖原染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究肉苁蓉对负荷运动小鼠肝组织、糖原及乳酸脱氢酶同工酶(LDH)活性的影响.结果显示负荷运动小鼠肝组织结构损伤严重,糖原减少、LDH5同工酶活性显著升高;服用肉苁蓉后负荷运动小鼠肝组织结构趋向正常,糖原丰富,LDH5同工酶活性明显下降.研究表明肉苁蓉可增加负荷运动小鼠肝糖原含量,降低LDH5同工酶活性,对肝脏具有保护作用. 展开更多
关键词 肉苁蓉 糖原 乳酸脱氢酶同工酶 聚丙烯酰胺凝胶电泳法
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