目的:探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法:利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^(flox/flox)小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在...目的:探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法:利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^(flox/flox)小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre;Kindlin-2^(flox/flox))和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2^(flox/flox))子宫蛋白,每组包含6~8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平。结果:成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、Western blot、免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)等方法鉴定和验证Kindlin-2在小鼠子宫中的敲除效率。子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的雌鼠与对照组相比体质量减轻、生殖能力严重受损、出生仔鼠数量减少,但出生仔鼠中雌鼠和雄鼠的比例未发生改变,通过苏木精-伊红染色实验观察表明实验组子宫内膜发育不完整、子宫壁厚度变薄。机制方面,子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中敲除Kindlin-2能够下调mTOR、磷酸化mTOR、腺嘌呤核糖核苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK和磷酸化的核糖体蛋白(ribosomal protein S6,S6)的蛋白水平,在雌鼠子宫中发现特异性敲除Kindlin-2能够上调Mps结合1(Mps one binding 1,MOB1)、磷酸化的Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的蛋白水平。结论:Kindlin-2通过抑制mTOR信号通路、激活Hippo信号通路抑制子宫内膜的发育,进而抑制雌鼠的生育能力。展开更多
临床生物样本作为国家战略性资源一直受到广泛重视[1]。样本库信息管理系统对于实体生物样本和样本关联临床信息的管理至关重要。临床样本合法规范的管理可以有效地促进基于样本的下游科学研究[2]。但目前各地生物样本库的信息管理系统...临床生物样本作为国家战略性资源一直受到广泛重视[1]。样本库信息管理系统对于实体生物样本和样本关联临床信息的管理至关重要。临床样本合法规范的管理可以有效地促进基于样本的下游科学研究[2]。但目前各地生物样本库的信息管理系统缺乏统一的模式,功能模块也各不相同,因此不利于后续的开放共享。北京大学第三医院生物样本库以样本科学为导向建设信息管理系统,系统中不仅记录生物样本库中存储的生物材料包括离体器官、组织、细胞、血液、分泌物、排泄物及其衍生的生物大分子等样本信息,同时兼顾生物样本关联患者的诊疗信息、护理、病理、随访、伦理审批、知情同意等数据及图像信息[3-4](图1)。该系统在样本库运行过程中,根据需要不断完善与添加模块,集成医院数据中心(hospital data repository,HDR)实现临床治疗信息的规范化收集,对生物样本库管理系统实现了生物样本的质量控制,有效准确地追踪样本实体从产生到应用的全过程,实现全闭环管理,形成完整的样本全生命周期管理的标准化流程,提升了生物样本的科研价值。此文旨在介绍北医三院生物样本库管理系统建设情况及应用案例,以期为其他样本库的建设提供参考借鉴。展开更多
文摘目的:探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法:利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^(flox/flox)小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre;Kindlin-2^(flox/flox))和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2^(flox/flox))子宫蛋白,每组包含6~8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平。结果:成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、Western blot、免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)等方法鉴定和验证Kindlin-2在小鼠子宫中的敲除效率。子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的雌鼠与对照组相比体质量减轻、生殖能力严重受损、出生仔鼠数量减少,但出生仔鼠中雌鼠和雄鼠的比例未发生改变,通过苏木精-伊红染色实验观察表明实验组子宫内膜发育不完整、子宫壁厚度变薄。机制方面,子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中敲除Kindlin-2能够下调mTOR、磷酸化mTOR、腺嘌呤核糖核苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK和磷酸化的核糖体蛋白(ribosomal protein S6,S6)的蛋白水平,在雌鼠子宫中发现特异性敲除Kindlin-2能够上调Mps结合1(Mps one binding 1,MOB1)、磷酸化的Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的蛋白水平。结论:Kindlin-2通过抑制mTOR信号通路、激活Hippo信号通路抑制子宫内膜的发育,进而抑制雌鼠的生育能力。
文摘临床生物样本作为国家战略性资源一直受到广泛重视[1]。样本库信息管理系统对于实体生物样本和样本关联临床信息的管理至关重要。临床样本合法规范的管理可以有效地促进基于样本的下游科学研究[2]。但目前各地生物样本库的信息管理系统缺乏统一的模式,功能模块也各不相同,因此不利于后续的开放共享。北京大学第三医院生物样本库以样本科学为导向建设信息管理系统,系统中不仅记录生物样本库中存储的生物材料包括离体器官、组织、细胞、血液、分泌物、排泄物及其衍生的生物大分子等样本信息,同时兼顾生物样本关联患者的诊疗信息、护理、病理、随访、伦理审批、知情同意等数据及图像信息[3-4](图1)。该系统在样本库运行过程中,根据需要不断完善与添加模块,集成医院数据中心(hospital data repository,HDR)实现临床治疗信息的规范化收集,对生物样本库管理系统实现了生物样本的质量控制,有效准确地追踪样本实体从产生到应用的全过程,实现全闭环管理,形成完整的样本全生命周期管理的标准化流程,提升了生物样本的科研价值。此文旨在介绍北医三院生物样本库管理系统建设情况及应用案例,以期为其他样本库的建设提供参考借鉴。
