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髓源性抑制细胞在靶向肝再生磷酸酶-3小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达 被引量：1
1
作者 吕娟 黄昊 赵燕田 《中国医药导报》 CAS 2020年第26期79-85,103,共8页
目的观察髓源性抑制细胞(MDSC)在靶向肝再生磷酸酶-3(PRL-3)小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达,探讨MDSC的数量与肿瘤生长的关系。方法将40只雌性BALB/c小鼠分为5大组(8小组),空载对照组[pVAX1(-)组]、无佐剂组PRL-3组(K-PRL3组)、佐剂-PRL-... 目的观察髓源性抑制细胞(MDSC)在靶向肝再生磷酸酶-3(PRL-3)小鼠乳腺肿瘤基因免疫中的表达,探讨MDSC的数量与肿瘤生长的关系。方法将40只雌性BALB/c小鼠分为5大组(8小组),空载对照组[pVAX1(-)组]、无佐剂组PRL-3组(K-PRL3组)、佐剂-PRL-3融合蛋白组(K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组)及MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组),MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组),通过流式细胞术检测免疫表型CD45、Gr-1及CD11b,分析MDSC在各免疫组外周血、肿瘤、脾脏中的表达水平,观察MDSC与肿瘤生长的相关性。结果荷瘤后第28天K-PRL3组、K-T-PRL3组和K-PRL3-MT组肿瘤体积均小于pVAX1(-)组,差异均有统计学意义(均P<0.05);K-PRL3-MT组和K-T-PRL3组与K-PRL3组肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。佐剂-PRL-3融合蛋白组小鼠外周血或肿瘤组织中MDSC表达均高于K-PRL3组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDSC特异性抗体删除组(K-T-PRL3+Gr-1 Ab组和K-PRL3-MT+Gr-1 Ab组)与MDSC对照抗体删除组(K-T-PRL3+Ab control组和K-PRL3-MT+Ab control组)肿瘤体积大小比较,差异无统计学意义(P>0.05);MDSC特异性抗体删除组、MDSC对照抗体删除组肿瘤体积均大于无佐剂组PRL-3组和佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01);MDSC特异性抗体删除组脾脏、外周血MDSC表达均低于对照抗体删除组,而肿瘤组织中MDSC表达与MDSC对照抗体删除组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且均大于佐剂-PRL-3融合蛋白组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在靶向PRL-3的小鼠乳腺肿瘤基因免疫中佐剂-PRL-3融合蛋白组肿瘤组织中MDSC与肿瘤生长相关,为进一步优化靶向PRL-3的抗肿瘤免疫治疗方案及MDSC相关作用研究提供理论依据。 展开更多
关键词 髓源性抑制细胞 肝再生磷酸酶-3 肿瘤免疫抑制微环境 流式细胞术
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异柠檬酸脱氢酶1在肿瘤发生发展中的作用
2
作者 杜晓娟 寿成超 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2020年第3期223-228,共6页
异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在包括谷氨酰胺代谢、磷脂代谢、脂肪合成、胰岛素分泌及细胞活性氧调节等生命活动过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,IDH1表达水平的变化及132位氨基酸的突变与许多肿瘤,如脑胶质瘤、肺癌等的发生发展密切相... 异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在包括谷氨酰胺代谢、磷脂代谢、脂肪合成、胰岛素分泌及细胞活性氧调节等生命活动过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,IDH1表达水平的变化及132位氨基酸的突变与许多肿瘤,如脑胶质瘤、肺癌等的发生发展密切相关。本文将就IDH1的结构与功能、IDH1与肿瘤特别是与肺癌的关系及相关作用机制等的研究进展进行综述,以期为肺癌辅助诊断生物标志物及药物治疗靶点的开发提供新的思路。 展开更多
关键词 IDH1 糖代谢 肿瘤 肺癌
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TREM2单克隆抗体的制备及应用检测
3
作者 马宾 孟麟 +2 位作者 戎卓娜 赵传科 寿成超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期168-173,177,共7页
目的:制备TREM2特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定,为TREM2的抗体药物研发奠定基础。方法:表达并纯化TREM2胞外段GST融合蛋白,用其作为抗原免疫小鼠,筛选抗血清效价较高的小鼠,经过细胞融合和单克隆... 目的:制备TREM2特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定,为TREM2的抗体药物研发奠定基础。方法:表达并纯化TREM2胞外段GST融合蛋白,用其作为抗原免疫小鼠,筛选抗血清效价较高的小鼠,经过细胞融合和单克隆筛选,制备TREM2的特异性单克隆抗体。对获得的单克隆抗体的特异性、亲和力及其在免疫学实验中的应用进行检测。结果:获得了29株TREM2单克隆抗体,其中的24株可与TREM2特异性结合;29株单抗与TREM2结合的EC50均在nmol以上;它们可分别在Western blot、免疫沉淀、流式细胞术和免疫荧光中用于对TREM2的特异检测。结论:成功制备并获得了亲和力高、特异性好的抗TREM2单克隆抗体,为TREM2靶点的成药性抗体开发奠定了基础。 展开更多
关键词 TREM2 单克隆抗体 制备 鉴定
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分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用
4
作者 曹燕飞 吕娟 +2 位作者 孟麟 曲立科 寿成超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期614-617,626,共5页
目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp... 目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 肝细胞再生磷酸酶-3 结核分枝杆菌热休克蛋白 结核分枝杆菌T细胞刺激表位
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肿瘤转移灶克隆形成机制的研究进展 被引量：3
5
作者 曾妍 章程 +1 位作者 曲立科 寿成超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期202-206,共5页
转移灶克隆形成的概念由Weinberg等人在2011年提出,是指肿瘤细胞从原发灶脱落,经转移到达潜在的位点,在重新获得增殖能力后,由微小转移灶逐步生长扩大,形成肉眼可见的转移灶的过程。该过程是转移中的限速阶段,只有少部分转移细胞能够成... 转移灶克隆形成的概念由Weinberg等人在2011年提出,是指肿瘤细胞从原发灶脱落,经转移到达潜在的位点,在重新获得增殖能力后,由微小转移灶逐步生长扩大,形成肉眼可见的转移灶的过程。该过程是转移中的限速阶段,只有少部分转移细胞能够成功形成转移灶克隆。这一过程受到多类相关基因的调控,并与组织器官的结构有关。本文综合已经发表的一些研究结果,从形成过程、特点及影响因素等多个方面对转移灶克隆形成的机制进行了总结和分析,同时针对癌症转移这一特点的治疗方法进行了相关探讨。 展开更多
关键词 肿瘤转移 基因表达调控 肿瘤 转移灶克隆形成 微环境
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THBS2特异性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：5
6
作者 王冰 肖克源 +1 位作者 孟麟 寿成超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期588-593,共6页
目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的... 目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人(P<0.0001)。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。 展开更多
关键词 THBS2 胰腺癌 单克隆抗体 制备 鉴定
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IDH1单克隆抗体的制备及表位鉴定和双抗体夹心ELISA的建立 被引量：3
7
作者 杜晓娟 孟麟 +1 位作者 孙天一 寿成超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1482-1486,共5页
目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH... 目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH1的单抗克隆。构建并表达IDH1的不同截短体融合蛋白,用Western blot和ELISA检测不同单抗与不同截短体蛋白的反应。通过双抗体夹心ELISA进行两两配对,获得有较好检测效果的配对抗体。结果:通过GSTIDH1和GST蛋白的ELISA双筛和Western blot的进一步鉴定,获得了8株抗IDH1的单克隆抗体,分别命名为1H8、4H7、5C8、7C3、7E12、13F6、16B11和16H7;5C8和7C3抗体识别的抗原表位位于IDH1 119~197位氨基酸;4H7的识别表位位于197~211位氨基酸,7E12和16B11的识别表位位于211~314位氨基酸,1H8和16H7的识别表位位于314~329位氨基酸,13F6的识别表位位于314~415位氨基酸。在双抗体夹心配对实验中,1H8包被抗体,4H7作为检测抗体,可获得相对较高的检测敏感性。结论:制备获得了8株抗IDH1特异性单克隆并鉴定了各自的抗原表位识别区域,初步建立了ELISA双抗体夹心检测法,为后续外周血中IDH1的检测奠定了基础。 展开更多
关键词 IDH1 单克隆抗体 抗原表位 双抗体夹心ELISA
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利用DNA免疫技术制备人CLDN18.2单克隆抗体 被引量：1
8
作者 戎卓娜 赵传科 +4 位作者 孟麟 王冰 钟堂武 王立新 寿成超(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期2378-2383,共6页
目的:制备CLDN18.2特异性单克隆抗体并对其特性和在免疫检测中的应用进行鉴定,为CLDN18.2的抗体药物研发奠定基础。方法:将in vivo-jetPEI-Gal和pcDNA3.1-CLDN18.2质粒在体外混合后经尾静脉免疫小鼠,筛选效价较高的小鼠进行细胞融合和... 目的:制备CLDN18.2特异性单克隆抗体并对其特性和在免疫检测中的应用进行鉴定,为CLDN18.2的抗体药物研发奠定基础。方法:将in vivo-jetPEI-Gal和pcDNA3.1-CLDN18.2质粒在体外混合后经尾静脉免疫小鼠,筛选效价较高的小鼠进行细胞融合和单克隆筛选,制备CLDN18.2的特异性单克隆抗体,然后对获得的单克隆抗体的亲和力和特异性及其在细胞ELISA、流式细胞术、细胞免疫荧光和免疫沉淀等实验中的应用进行鉴定。结果:共获得15株有较好特异性的CLDN18.2单克隆抗体,其与CLDN18.2结合的EC50s均在纳摩尔或亚纳摩尔级,可在ELISA、免疫沉淀、流式细胞术和细胞免疫荧光实验中用于对CLDN18.2的特异检测,但均不能用于Western blot实验。结论:成功制备并获得了15株可识别蛋白天然构象、亲和力高、特异性好的小鼠抗人CLDN18.2单克隆抗体,为CLDN18.2抗体药物的研发奠定了重要基础。 展开更多
关键词 CLDN18.2 DNA免疫 单克隆抗体 制备 鉴定
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沉默PES1基因表达对结肠癌细胞恶性表型的抑制作用 被引量：2
9
作者 谢玮 苏亚辉 +2 位作者 冯勤 曲立科 寿成超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1175-1184,共10页
目的 :探讨核仁蛋白PES1(pescadillo homolog 1)对结肠癌细胞恶性表型的影响。方法 :构建针对PES1基因的sh RNA干扰质粒,将其转染结肠癌HCT116细胞,经G418筛选耐药细胞克隆,蛋白质印迹法验证靶基因的沉默效果。采用MTT法、平板克隆形成... 目的 :探讨核仁蛋白PES1(pescadillo homolog 1)对结肠癌细胞恶性表型的影响。方法 :构建针对PES1基因的sh RNA干扰质粒,将其转染结肠癌HCT116细胞,经G418筛选耐药细胞克隆,蛋白质印迹法验证靶基因的沉默效果。采用MTT法、平板克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell迁移及侵袭实验和FCM法分别检测沉默PES1表达对HCT116细胞增殖、克隆形成、体内成瘤、体外迁移和侵袭以及凋亡的影响,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 :成功获得PES1稳定低表达的结肠癌HCT116细胞。沉默PES1表达后,HCT116细胞的增殖、克隆形成和裸鼠体内成瘤能力均明显降低(P值均<0.01),细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P值均<0.01),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。PES1表达被抑制后,HCT116细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而Bcl-2相互作用杀伤蛋白(Bcl-2 interacting killer,BIK)、prune同源蛋白2(prune homolog 2,PRUNE2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 3,TIMP3)的m RNA表达水平明显升高(P值均<0.01)。结论 :PES1可能对结肠癌细胞的多种恶性表型起促进作用。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡 核仁蛋白PES1
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胃癌患者血清AMBP表达及临床意义 被引量：7
10
作者 冯君楠 黄昊 寿成超 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期447-450,共4页
目的探讨α-1-微球蛋白/胰蛋白酶抑制剂前体(alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP)在胃癌患者血清中的表达及其在胃癌早期诊断的价值。方法收集北京大学肿瘤医院2007-07-05-2008-12-20收治的114例胃癌患者和49名健康体检者的... 目的探讨α-1-微球蛋白/胰蛋白酶抑制剂前体(alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP)在胃癌患者血清中的表达及其在胃癌早期诊断的价值。方法收集北京大学肿瘤医院2007-07-05-2008-12-20收治的114例胃癌患者和49名健康体检者的血清,114例胃癌患者分为胃癌早期组(49例)和胃癌晚期组(65例)。采用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中AMBP水平,分析其与胃癌临床病理参数的相关性。结果蛋白质印迹法检测结果显示,正常组AMBP血清平均表达量为22.62±2.91,胃癌早期组为32.19±1.53,胃癌晚期组为41.61±3.19,差异有统计学意义,F=12.04,P=0.002 2;组间两两比较差异亦有统计学意义,P值均<0.05。ELISA检测结果显示,正常组AMBP血清平均表达量为(8.156±0.154)μg/mL,低于胃癌患者的(8.948±0.107)μg/mL,t=4.140,P<0.001;在95%可信度下,取阈值为8.546μg/mL时,其诊断敏感性为71.05%,特异性为63.27%;胃癌早期组AMBP血清平均表达量为(8.717±0.173)μg/mL,晚期组为(9.122±0.131)μg/mL,均高于正常组(8.156±0.154)μg/mL,P值均<0.05。AMBP血清表达量与患者年龄(P=0.153 9)、性别(P=0.143 1)、肿瘤大小(P=0.080 9)、淋巴结转移(P=0.073 7)无关,而与肿瘤侵袭程度有相关性,P=0.021 8。结论胃癌患者血清AMBP水平显著升高,可能是胃癌早期诊断潜在肿瘤标志之一。 展开更多
关键词 胃癌 血清 α-1-微球蛋白/胰蛋白酶抑制剂前体 早期诊断 肿瘤标志
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