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基于微流控芯片PCR结合免疫层析技术检测产毒型艰难梭菌方法的建立与性能评价
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作者 程泓睿 宋小军 +6 位作者 陈毓 张萌 蔡梦婷 朱坤 邰玉蕾 应士波 金大智 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期142-149,共8页
目的 采用微流控芯片PCR结合免疫层析技术,建立产毒型艰难梭菌检测方法,评价其性能。方法 根据艰难梭菌tcdB和tpi基因,设计引物,建立产毒型艰难梭菌微流控芯片PCR结合免疫层析检测方法,对其特异性、检测限、重复性和稳定性进行评价。收... 目的 采用微流控芯片PCR结合免疫层析技术,建立产毒型艰难梭菌检测方法,评价其性能。方法 根据艰难梭菌tcdB和tpi基因,设计引物,建立产毒型艰难梭菌微流控芯片PCR结合免疫层析检测方法,对其特异性、检测限、重复性和稳定性进行评价。收集临床腹泻患者粪便样本,平行采用Xpert C.difficile/Epi、VIDAS CDAB和本试验方法进行检测,检测结果不一致的样本进行艰难梭菌分离培养和tcdB毒素基因PCR鉴定。结果 本方法与其他腹泻相关病原菌均无交叉反应,两个浓度的tcdB和tpi基因阳性质粒(10^(5)和10^(2) copies/μL)检测重复性均为100%,且采用分别保存3、6、9和12个月的PCR试剂和制备的免疫层析试纸条进行2个浓度质粒检测,结果均呈现阳性。产毒型艰难梭菌检测限为10 copies/μL。本试验方法检测到艰难梭菌阳性33例(33/215,15.3%),与Xpert C.difficile/Epi方法检测结果的一致性(Kappa值为0.965)。以Xpert C.difficile/Epi检测结果为标准,本方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为94.3%、100.0%、100.0%和98.9%,显著高于VIDAS CDAB方法(60.0%、98.9%、91.3%、92.7%)(Kappa=0.714,OR=157.50,95%CI:62.03~847.28,P=0.013)。结论 本试验建立的微流控芯片PCR结合免疫层析方法特异性、稳定性和重复性均良好,可快速、准确地检测临床腹泻样本中的产毒型艰难梭菌,可用于门急诊、社区医疗服务中心、流行病学现场等的艰难梭菌感染筛查。 展开更多
关键词 艰难梭菌 微流控芯片 免疫层析 检测
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基于微流控芯片技术同时检测8种常见呼吸道病原体方法的建立及应用
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作者 陈毓 吴紫伊 +5 位作者 徐杭聪 宋小军 陈乐扬 吕火烊 朱坤 金大智 《国际流行病学传染病学杂志》 2025年第1期24-31,共8页
目的:基于微流控芯片和快速荧光PCR技术建立针对8种常见呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、人博卡病毒、人偏肺病毒、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体及百日咳鲍特菌)的高通量、快速检测方法,为常见呼吸道病原体感染的临床... 目的:基于微流控芯片和快速荧光PCR技术建立针对8种常见呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、人博卡病毒、人偏肺病毒、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体及百日咳鲍特菌)的高通量、快速检测方法,为常见呼吸道病原体感染的临床诊断提供一种简便、快速的新技术方法。方法:设计优化针对共8种病原体的引物、探针及反应体系,设计可同时检测8种病原体的扇形微流控芯片,将8种反应液冻干预制在微流控芯片不同孔道,对微流控芯片结合快速荧光PCR检测方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。同时,选取2021年浙江省人民医院检验中心采集的192份咽拭子样本,提取样本核酸,进行8种病原体测定,并与现有临床检测试剂进行比较。结果:本实验建立了基于微流控芯片和快速荧光PCR检测8种常见呼吸道病毒的方法,发现在102~103拷贝/mL时灵敏度最高,对多种呼吸道病原体无交叉反应,特异性好;重复性变异系数小于5%。对收集的192份咽拭子样本进行检测,其中115份病原体核酸检测阳性,阳性率59.89%(115/192),94例为单一病原体感染,阳性率为48.96%(94/192),主要感染病原体为副流感病毒;21例为混合病原感染,阳性率为10.94%(21/192),主要为副流感病毒和肺炎支原体混合感染。与临床现有核酸检测试剂盒相比,该方法检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳鲍特菌、人博卡病毒和人偏肺病毒的符合率均为100.0%,副流感病毒检测的阳性预测值和阴性预测值分别为96.0%(97/101)和97.8%(89/91)。结论:本实验建立的微流控芯片和快速荧光PCR技术检测8种常见呼吸道病原体方法,具有简便、快速、准确、高通量等优点,可用于临床呼吸道疾病的病原体筛查。 展开更多
关键词 微流控芯片 快速荧光PCR 呼吸道病原体 检测
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