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Calcein-AM和Annexin V在流式细胞术检测早期细胞凋亡的敏感性比较
1
作者 王佳 冯永东 +5 位作者 陶德定 李小兰 肖薇 刘双又 余从年 龚建平 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期182-184,共3页
目的比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞术检测活细胞早期凋亡时的敏感性,建立新的检测细胞早期凋亡的方法。方法将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标... 目的比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞术检测活细胞早期凋亡时的敏感性,建立新的检测细胞早期凋亡的方法。方法将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V)染色,然后用流式细胞仪分析凋亡率,通过比较诱导后不同时间点的凋亡率来分析Calcein-AM和Annexin V对于检测细胞早期凋亡的敏感性。结果在喜树碱诱导模型中,加药后2 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而3 h后才能用Annexin V检测到;在紫外线诱导模型中,照射后1 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而要在2 h后才能用Annexin V检测到。结论Calcein-AM用于检测活细胞早期凋亡比Annexin V更为敏感,是一种稳定、可靠、灵敏度高并且较为经济的检测细胞早期凋亡的活细胞染料。 展开更多
关键词 流式细胞术 凋亡 线粒体膜通透性 Calcein-AM 膜联蛋白V
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凋亡相关分子Fas和FasL在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用 被引量：2
2
作者 张惠文 林汉华 陶德定 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期464-465,共2页
关键词 凋亡相关分子 FAS FASL 自身免疫性甲状腺炎 发病
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人类肿瘤细胞分化中细胞周期素的表达规律及作用机制 被引量：12
3
作者 王海波 龚建平 +2 位作者 裘法祖 吴在德 陶德定 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期39-40,共2页
目的　探讨诱导人类肿瘤细胞分化过程中 ,细胞周期素 (Cyclin)的变化在细胞周期调控机制中的作用。方法　应用全反式维甲酸 (ATRA)处理HL 6 0细胞 ,流式细胞仪行细胞周期分析 ,应用十二烷基磺酸钠 聚丙烯胺凝胶电泳 (SDS PAGE)及Wester... 目的　探讨诱导人类肿瘤细胞分化过程中 ,细胞周期素 (Cyclin)的变化在细胞周期调控机制中的作用。方法　应用全反式维甲酸 (ATRA)处理HL 6 0细胞 ,流式细胞仪行细胞周期分析 ,应用十二烷基磺酸钠 聚丙烯胺凝胶电泳 (SDS PAGE)及WesternBlot检测细胞周期素D1、E的蛋白表达量改变 ,使用流式细胞仪检测细胞周期素D1、E、A的表达量变化及细胞周期素B的时相性改变。结果　HL 6 0细胞经ATRA诱导后 ,80 %左右的细胞被阻滞在G0 G1 期 ,S期细胞减少到2 .81%。WesternBlot显示 ,诱导后 ,CyclinD1表达量明显降低 ,CyclinE表达量升高。流式细胞仪检测CyclinD1、CyclinE蛋白表达变化与WesternBlot结果相同 ,CyclinA表达量升高 ;CyclinB表达特征由经诱导前的非时相性表达转为诱导分化后的时相性表达。结论　细胞周期素D1、E、A、B与肿瘤细胞分化的细胞周期调控有着密切的关系。 展开更多
关键词 细胞分化 肿瘤 细胞周期素 细胞周期
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大鼠免疫细胞及器官的固有胆碱能系统 被引量：9
4
作者 王金荣 王宏伟 +5 位作者 刘胜洪 陶德定 康闽 王芳 李秀云 施虹 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期28-31,共4页
目的探讨大鼠免疫细胞及免疫器官“固有胆碱能系统”的存在状态。方法用免疫荧光双标记、流式细胞技术及免疫组织化学技术,检测烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT),乙酰胆碱酯酶(AChE)在健康大鼠外周血CD4+T... 目的探讨大鼠免疫细胞及免疫器官“固有胆碱能系统”的存在状态。方法用免疫荧光双标记、流式细胞技术及免疫组织化学技术,检测烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT),乙酰胆碱酯酶(AChE)在健康大鼠外周血CD4+T细胞、腹腔巨噬细胞、关节滑膜巨噬细胞及腹腔淋巴结的表达状态。结果nAChRα7、ChAT及AChE在大鼠免疫细胞及免疫器官均有阳性表达。腹腔巨噬细胞、淋巴结中的巨噬细胞和关节滑膜巨噬细胞表达最丰富,而腹腔淋巴结中的淋巴细胞仅有微弱表达;外周血CD4+T细胞有部分表达(nAChRα7 15.88%±0.753%,ChAT 23.09%±0.671%)。结论免疫活性细胞及免疫器官普遍存在“固有胆碱能系统”,淋巴细胞与巨噬细胞在机体固有胆碱能系统中扮演不同角色。 展开更多
关键词 胆碱能系统 大鼠 免疫细胞 表达 腹腔巨噬细胞 淋巴结 关节滑膜 免疫器官 流式细胞技术 乙酰胆碱酯酶
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EB病毒潜伏膜蛋白1介导c-Jun/Jun B异源二聚体对p16的调节 被引量：5
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作者 宋鑫 艾米丹 +5 位作者 陈晓曦 邓锡云 陶永光 龚建平 吴乔 曹亚 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期468-474,共7页
EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)是重要的致瘤蛋白,可活化包括AP-1在内的多个转录因子。转录因子功能性活化体现在其与靶基因启动子结合,反式激活靶基因转录,调节靶基因的表达,从而发挥其生物学效应。最近发现LMP1可介导c-Jun/Jun B活性... EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)是重要的致瘤蛋白,可活化包括AP-1在内的多个转录因子。转录因子功能性活化体现在其与靶基因启动子结合,反式激活靶基因转录,调节靶基因的表达,从而发挥其生物学效应。最近发现LMP1可介导c-Jun/Jun B活性异源二聚体的形成,为寻找其靶基因提供了重要的依据。采用生物信息学技术,确定了c-Jun/Jun B活性异源二聚体调控的潜在靶基因p16;在此基础上,利用建立的Tet-on系统调控LMP1表达的细胞系,采用间接免疫荧光法联合激光共聚焦荧光显微镜技术、Western blot方法、荧光素酶活性检测、Super-EMSA方法和流式细胞术,探讨LMP1介导c-Jun/Jun B异源二聚体对p16的调节功能。结果表明,LMP1介导的c-Jun/Jun B异源二聚体可下调p16启动子活性及其表达,并影响细胞的演进,该研究在AP-1信号传导通路和细胞周期之间建立了新的直接联系,从而为肿瘤发病机制研究提供了新的思路和实验模式。 展开更多
关键词 潜伏膜蛋白1 C-JUN JUN B 异源二聚体 P16 细胞周期 EB病毒 生物信息学 肿瘤
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EB病毒潜伏膜蛋白1介导c-Jun/Jun B异源二聚体对cyclin D1的调节 被引量：2
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作者 宋鑫 陶永光 +6 位作者 曾亮 杨静 唐发清 黎民敬 龚建平 吴乔 曹亚 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2004年第6期555-563,共9页
研究发现LMP1可介导c-Jun/JunB活性异源二聚体的形成,在此基础上,利用建立的Tet-on系统调控LMP1表达的细胞系,采用间接免疫荧光法联合激光共聚焦荧光显徽镜技术、Westernblot方法、荧光素酶活性检测、Super-EMSA方法和流式细胞术,探讨L... 研究发现LMP1可介导c-Jun/JunB活性异源二聚体的形成,在此基础上,利用建立的Tet-on系统调控LMP1表达的细胞系,采用间接免疫荧光法联合激光共聚焦荧光显徽镜技术、Westernblot方法、荧光素酶活性检测、Super-EMSA方法和流式细胞术,探讨LMP1介导c-Jun/JunB异源二聚体对cyclinD1的调节功能.结果表明,LMP1介导的c-Jun/JunB异源二聚体可上调cyclinD1启动子活性及其表达,并影响细胞周期的行进. 展开更多
关键词 C-JUN LMP1 介导 潜伏膜蛋白1 表达 EB病毒 间接免疫荧光法 荧光显微镜技术 启动子活性 利用
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