基于校企合作的农业专业研究生培养浅探 被引量：1

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作者 郑恩琴 杨杰 付晓兰 《文教资料》 2018年第12期99-100,共2页

农业专业研究生培养是我国研究生教育的重要组成部分,对我国农业现代化转型具有重要的作用。校企合作则是培养综合型、应用型人才的重要手段,在近年来的农业专业研究生培养中开始广泛采用这种模式,但由于我国农业专业学位研究生教育起... 农业专业研究生培养是我国研究生教育的重要组成部分,对我国农业现代化转型具有重要的作用。校企合作则是培养综合型、应用型人才的重要手段,在近年来的农业专业研究生培养中开始广泛采用这种模式,但由于我国农业专业学位研究生教育起步较晚,与之相关的校企业合作研究还不够系统和深入,导致其发展中存在一些问题。基于此,本文分析了基于校企合作的农业专业研究生培养存在的问题,提出了相应的解决策略,以期为农业专业研究生培养工作提供借鉴与参考。 展开更多

关键词 校企合作 农业专业 研究生教育

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基于神经辐射场的RGB图像点云重建多肉植物及尺寸测量研究

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作者 尹令 陈招达 +3 位作者 蓝善贵 杨杰 张素敏 黄琼 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期316-326,共11页

以多肉植物盆栽为研究对象,使用手持式RGB相机采集11个多肉植物盆栽的视频数据,通过将视频转换为图像帧、选取优质清晰图像帧、计算相机位姿得到含丰富信息的RGB图像数据。提出一种改进神经辐射场的多肉植物三维重建方法,根据实际场景... 以多肉植物盆栽为研究对象,使用手持式RGB相机采集11个多肉植物盆栽的视频数据,通过将视频转换为图像帧、选取优质清晰图像帧、计算相机位姿得到含丰富信息的RGB图像数据。提出一种改进神经辐射场的多肉植物三维重建方法,根据实际场景提出新的射线采样策略,同时引入改进的图像修复模块与隐式模型重建点云方法,并根据点云重建结果提取多肉植株的叶片数、株高、冠围、凸包体积、叶长、叶宽和叶色共7个表型参数。最后选取具有代表性、易测量的叶片数、株高、冠围、叶长和叶宽5个表型参数进行精度评估与误差原因分析,平均绝对百分比误差(MAPE)分别为2.32%、3.95%、4.95%、5.59%和9.55%,均方根误差(RMSE)分别为0.86片和1.95、17.54、1.87、1.27 mm,决定系数(R^(2))分别为0.99、0.99、0.86、0.91和0.89。精度评估结果表明,所提取的表型参数能够准确、高效地反映多肉植株生长状态,充分发挥RGB图像新视角合成技术、图像处理技术与三维点云重建技术的优势,实现多肉植株盆栽的表型参数高精度、非破坏性提取,能够为多肉植物的种植和养育以及为非固定、多视角的RGB数据获取研究提供重要的技术支持。 展开更多

关键词 神经辐射场 三维重建 多肉植物 尺寸测量 植物表型 RGB图像

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宏转录组测序技术在一起仔猪病毒性腹泻疾病诊断中的运用及分析

3

作者 李跃 张长春 +11 位作者 刘光裕 高梦源 符超俊 邢家宝 徐思佳 邝麒元 刘静 高校鹏 王衡 龚浪 张桂红 孙彦阔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3579-3589,共11页

为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用M... 为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用MGISEQ 200测序平台进行宏转录组测序开展猪病原感染组学研究,系统性地筛查该区域仔猪腹泻的病原谱,使用实时荧光定量RT-PCR对最主要病毒进行确认,定量分析各病原的丰度并选取鉴定到的病毒基因序列进行系统发育分析,Pearson分析解析病原混合感染的相关性。结果显示:通过宏转录组测序技术在这些样品中共检测到17种致病性细菌、12种病毒和3种寄生虫。病毒以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)代表的腹泻相关病毒为主,包括猪札幌病毒(porcine sapovirus, SaV)、猪嵴病毒(porcine kobuvirus, PKV)、猪星状病毒(porcine astrovirus, PAstV)、猪猴禽猪肠病毒(porcine sapelovirus, PSV)、轮状病毒A(rotavirus, RVA)等;细菌主要包括3种肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、3种乳杆菌科(Lactobacillaceae)、2种芽胞杆菌科(Bacillaceae)等;寄生虫包括两种滴虫和碘阿米巴原虫。来自5个场区的PEDV刺突基因(spike gene,S基因)系统发育分析显示,毒株均属于G2c簇群,毒株之间核苷酸相似性为99.99%,毒株S基因存在重组情况;其中,一发病猪场还检测到P[6]基因型的rotavirus A部分VP4序列,与人源轮状病毒的核苷酸相似性最高。此外,在4个猪场检测到2种以上的仔猪腹泻相关病毒,系统发育分析结果提示,此区域存在腹泻病原多谱系共同流行的情况。病原相关性分析显示,PEDV/PSV(P<0.001)、PEDV/猪环曲病毒(porcine torovirus, PToV)(P<0.001)和PEDV/PAstV(P<0.05)有显著的负相关,而PEDV/PKV(P<0.05)有显著的正相关。以上结果提示,在该地区相邻养殖区域中,仔猪腹泻的病原谱具有多样性,其中,直接致病病原是PEDV,同时,PEDV与样品中其他腹泻相关病毒之间存在关联。本研究较为全面地展示该地区仔猪腹泻病原的感染谱,并鉴定出导致腹泻发生最直接的病原体;同时也能分析小范围养殖区域内腹泻相关病原的相关性,为该区域仔猪腹泻疾病防控提供更加精准的参考和指导。 展开更多

关键词 宏转录组测序技术 仔猪腹泻疾病 病原识别 PEDV 遗传进化分析 相关性分析

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2022—2023年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和Nsp2基因的遗传变异分析

4

作者 彭家为 李康 +5 位作者 张歆明 吴寿堂 王爽云 刘燕玲 张乐宜 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期86-94,102,共10页

为了初步了解我国广东省猪场中猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,试验于2022年2月份——2023年10月份采集广东省11个地区(广州市、肇庆市、河源市、江门市... 为了初步了解我国广东省猪场中猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,试验于2022年2月份——2023年10月份采集广东省11个地区(广州市、肇庆市、河源市、江门市、茂名市、云浮市、韶关市、清远市、珠海市、湛江市、汕头市)27家猪场共241份疑似患猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)病猪的肺脏组织和血液样本并采用RT-PCR方法进行PRRSV检测,根据检测结果选取不同地区猪场的10份阳性样本病毒核酸对ORF5和Nsp2基因进行测序及序列遗传变异分析。结果表明:241份肺脏组织和血液样本的总阳性率为21.99%;不同地区阳性率在9.90%~42.86%之间,其中阳性率最高的地区为广州市,最低的地区为云浮市;肺脏组织样本阳性率为14.28%,血液样本阳性率为24.32%。从基于PRRSV ORF5基因构建的遗传进化树中可见,选取的10株PRRSV毒株中有1株(GDZH)位于以JXA1和CH-1a为代表的Lineage8.7亚群分支上,有5株(GDJM、GDKP、GDHY、GDMM、GDST)位于以NADC30为代表的Lineage1亚群分支上,有4株(GDGZ、GDGZ-2、GDZJ、GDGY)位于Lineage3亚群分支上。选取的10株PRRSV毒株ORF5基因之间的核苷酸序列相似性为80.1%~99.3%,其中GDGZ、GDZJ、GDGY和GDGZ-2的ORF5基因与Lineage3亚群毒株QYYZ(登录号为JQ308798.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为90.2%、89.4%、93.7%、90.0%;GDJM、GDKP、GDHY、GDST和GDMM的ORF5基因与Lineage1亚群毒株NADC30(登录号为MH500776.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为91.0%、92.2%、90.8%、85.7%、91.7%,GDZH的ORF5基因与Lineage8.7亚群高致病性毒株JXA1(登录号为EF11244.5)的核苷酸序列相似性最高,为96.2%。从基于PRRSV Nsp2基因构建的遗传进化树中可见,选取的10株PRRSV毒株中有5株(GDZH、GDGZ、GDGZ-2、GDZJ、GDGY)位于以JXA1和CH-1a为代表的Lineage8.7亚群分支上,有5株(GDJM、GDHY、GDST、GDMM、GDKP)位于以NADC30为代表的Lineage1亚群分支上。选取的10株PRRSV毒株Nsp2基因之间的核苷酸序列相似性为31.6%~96.6%。其中GDZH、GDGZ、GDGZ-2、GDZJ和GDGY的Nsp2基因与Lineage8.7亚群高致病性毒株JXA1(登录号为EF11244.5)的核苷酸序列相似性最高,分别为97.1%、98.1%、96.8%、91.3%、94.2%,GDJM、GDKP、GDST、GDMM、GDHY的Nsp2基因与Lineage1亚群毒株NADC30(登录号为MH500776.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为67.6%、83.6%、82.2%、82.8%、80.3%。说明广东省猪场中流行的PRRSV毒株呈现多样性,Lineage3、Lineage1和Lineage8.7为主要流行的亚群。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 NSP2基因 遗传变异 广东省

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白多克隆抗体的制备及其中和活性研究 被引量：2

5

作者 马晓莉 舒会友 +5 位作者 郑恩琴 夏兆伦 余文兰 谢淑敏 刘永伦 徐铮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期78-81,85,181,共6页

为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白鼠源多克隆抗体并验证其中和活性,试验采用RT-PCR方法扩增了PRRSV的ORF7基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并在大肠杆菌BL21(DE3... 为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白鼠源多克隆抗体并验证其中和活性,试验采用RT-PCR方法扩增了PRRSV的ORF7基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达重组N蛋白,纯化重组N蛋白制成弗氏佐剂抗原,采用皮下多点注射法免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,以血清中和试验和间接免疫荧光法验证其中和活性。结果表明:试验成功扩增了大小为390 bp的ORF7基因片段,经双酶切和序列测定,重组表达质粒pET-32a-N构建成功,重组N蛋白分子质量约为28.0 ku,制备的多克隆抗体效价较高,重组N蛋白多克隆抗体按照1∶2、1∶4和1∶8比例稀释时,荧光数量与不加多克隆抗体时比较无明显区别。说明在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达了PRRSV重组N蛋白,制备的鼠源多克隆抗体能够与重组N蛋白发生特异性反应,但没有抗PRRSV中和活性。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组N蛋白 原核表达 弗氏佐剂 多克隆抗体 中和活性

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长链非编码RNA NEAT1通过Wnt/β-catenin信号通路影响PRRSV复制机制的初步研究 被引量：5

6

作者 王京煜 陈万里 +6 位作者 龚浪 潘昊鸣 曾宇晨 梁杏玲 马俊 张桂红 王衡 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期239-245,共7页

长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 nt的非编码RNA分子,对于调节多种生命活动发挥着重要作用。为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与LncRNA核富集转录体1(NEAT1)相互作用的分子基础,本研究将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞,分别... 长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 nt的非编码RNA分子,对于调节多种生命活动发挥着重要作用。为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与LncRNA核富集转录体1(NEAT1)相互作用的分子基础,本研究将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞,分别在感染后不同时间(0、1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h、48 h、60 h、72 h)收集细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示:PRRSV感染显著上调Marc-145细胞内NEAT1的转录水平(p<0.001);将不同MOI(0.1、0.5、1、2)PRRSV感染Marc-145细胞48 h后收集细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示,不同MOI的PRRSV对NEAT1的转录水平影响不显著;将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞48 h后,采用RNA荧光原位杂交(RNAscope)方法检测PRRSV感染对NEAT1在Marc-145细胞内分布的影响,结果显示,NEAT1定位于Marc-145细胞核,PRRSV感染诱导核内NEAT1的转录水平上调(p<0.01);将NEAT1-C0、C1、C2、C3、C4、C5和C6分别转染Marc-145细胞12 h后,接种PRRSV(MOI 0.1)24 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1各个片段对PRRSV复制的影响,结果显示,NEAT1各个片段过表达均可抑制PRRSV ORF7 mRNA的转录,其中C4区域的抑制效果最佳(p<0.001);将NEAT1-C4转染Marc-145细胞36 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1-C4对细胞因子分泌的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4上调Marc-145细胞内IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10、细胞性骨髓瘤病病毒癌基因(c-myc)和细胞周期蛋白1(cyclinD1)的转录水平(p<0.001);将TOP、NEAT1-C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞36 h,同时将FOP、C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞作为对照,利用双荧光素酶报告基因方法检测NEAT1-C4对Wnt/β-catenin通路活性的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4显著增加LEF1/TCF转录因子的转录活性(p<0.01),及诱导Wnt/β-catenin通路的活化。上述结果首次证实了LncRNA NEAT1通过C4段区域上调Marc-145细胞内Wnt/β-catenin信号通路的活性从而抑制PRRSV的复制。本研究为探究PRRSV与宿主之间的相互作用及PRRSV致病机制提供参考依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 LncRNA NEAT1 病毒复制 WNT/Β-CATENIN信号通路

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核移植介导的哺乳动物体细胞核重编程研究进展 被引量：1

7

作者 吴霄 庄站伟 +3 位作者 马晓莉 黄思秀 李紫聪 徐铮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期187-194,共8页

哺乳动物的体细胞核移植技术已经发展了20年有余,重构胚发育过程中的核重编程异常是制约这项技术应用的主要障碍。目前,提高克隆效率的方法主要是通过调节重编程过程中的表观遗传修饰来修复重编程的错误,从而提高核移植胚胎的发育效率... 哺乳动物的体细胞核移植技术已经发展了20年有余,重构胚发育过程中的核重编程异常是制约这项技术应用的主要障碍。目前,提高克隆效率的方法主要是通过调节重编程过程中的表观遗传修饰来修复重编程的错误,从而提高核移植胚胎的发育效率。综述了核移植后早期胚胎发育过程中供体核重编程的异常,讨论了修复这些异常表观遗传修饰的研究进展,并对可能影响核移植胚胎发育的重编程事件及新兴技术进行展望。 展开更多

关键词 体细胞核移植 重编程 表观遗传修饰

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猪圆环病毒2型ORF2基因在Vero细胞中真核表达的研究

8

作者 马晓莉 林彦星 +4 位作者 董建国 刘燕玲 刘清神 宋长绪 徐铮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期12-15,19,250,共6页

为了研究猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）ORF2基因在Vero细胞中的表达情况,试验利用PCR方法将扩增的PCV-2 ORF2基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）上,构建重组表达质粒pcDNA-ORF2,测序后对4株毒株的ORF2基因... 为了研究猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）ORF2基因在Vero细胞中的表达情况,试验利用PCR方法将扩增的PCV-2 ORF2基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）上,构建重组表达质粒pcDNA-ORF2,测序后对4株毒株的ORF2基因进行核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较分析,并分别采用磷酸钙法和脂质体法将重组表达质粒pcDNA-ORF2导入哺乳动物Vero细胞内,通过间接免疫荧光试验验证重组表达质粒在Vero细胞中的表达情况。结果表明：PCR方法成功扩增出4株PCV-2毒株的ORF2基因;成功构建出重组表达质粒pcDNA-ORF2;4株毒株的ORF2基因核苷酸序列同源性在98.6%-99.1%之间,推导氨基酸序列的同源性在97.4%-98.7%之间;间接免疫荧光试验检测到Vero细胞内发出绿色荧光。说明重组表达质粒pcDNA-ORF2在Vero细胞中得到了正确表达。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 VERO细胞 真核表达载体 重组表达质粒 间接免疫荧光试验

原文传递

动物体细胞克隆与转基因技术科普需求及认知度调研分析

9

作者 庄站伟 徐铮 +1 位作者 吴霄 马晓莉 《现代农业科技》 2019年第16期240-241,243,共3页

当前,社会上存在着对“克隆”“转基因”的误解。为使民众对克隆和转基因有科学性的认知,本研究采取问卷调查的方式,获取公众对当前体细胞克隆和转基因技术的认知水平与态度的数据,以期为相关的科普活动提供参考。

关键词 体细胞克隆 转基因 问卷调查 科普宣传

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基于音频特征和模糊神经网络的禽流感病鸡检测 被引量：14

10

作者 张铁民 黄俊端 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期168-174,共7页

为了能在早期发现禽流感并进行预防,该文提出了一种基于音频特征和模糊神经网络的禽流感病鸡检测方法。依据获取的家禽音频和环境及其他噪声的谱熵差别大的特点,在复杂环境中分析并提取出鸡声,丢弃非鸡声段,对提取的鸡声进行分析及处理... 为了能在早期发现禽流感并进行预防,该文提出了一种基于音频特征和模糊神经网络的禽流感病鸡检测方法。依据获取的家禽音频和环境及其他噪声的谱熵差别大的特点,在复杂环境中分析并提取出鸡声,丢弃非鸡声段,对提取的鸡声进行分析及处理,计算短时过零率、短时能量以及短时过零率与短时能量混合特征,用作判别患禽流感的病鸡和健康鸡的依据。利用T-S模糊神经网络,对提取出来的家禽音频特征进行训练和识别,试验表明隶属度函数为钟形函数、隶属度个数为2时模糊神经网络对试验提取的3个鸡声特征组成的3组测试集的敏感性分别为75.47%、80.39%和76.92%,特异性分别为80.85%、79.59%和72.92%,正确识别率分别为78%、80%和75%。该研究为规模化家禽养殖场及大型家禽流通市场的禽流感病禽识别提供一套快速、高效检测方法。 展开更多

关键词 神经网络 识别 提取 谱熵 短时过零率 短时能量 鸡病检测

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养殖废水处理理论与实践进展 被引量：3

11

作者 廖新俤 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2317-2319,共3页

养殖废水主要由动物尿液、粪便和养殖管理用水组成,含有高浓度的有机物、氮、磷和悬浮物,还包括构成盐分的部分元素。为了比较清楚地了解迄今为止我国养殖废水技术关键突破口以及实际应用中遇到的问题,本文在本领域组稿主题之外额外归... 养殖废水主要由动物尿液、粪便和养殖管理用水组成,含有高浓度的有机物、氮、磷和悬浮物,还包括构成盐分的部分元素。为了比较清楚地了解迄今为止我国养殖废水技术关键突破口以及实际应用中遇到的问题,本文在本领域组稿主题之外额外归纳总结了养殖废弃物在资源化利用与深度处理之间的纠结、当前备受关注的污染物内容,以及部分技术领域的进展。最后对养殖废水处理技术的研发和应用提出了建议。 展开更多

关键词 养殖废水 污染物 处理技术 资源化利用 深度处理

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前言

12

作者 吴珍芳 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第S01期I0002-I0002,共1页

我国是世界上养猪生产和猪肉消费第一大国,生猪出栏量和猪肉消费量均约占世界总量的一半。猪肉是我国大多数城乡居民最主要的肉类食品,占我国肉类消费总量的63%。保障猪肉供应是重大民生问题,事关我国经济发展和社会稳定大局。90年代以... 我国是世界上养猪生产和猪肉消费第一大国,生猪出栏量和猪肉消费量均约占世界总量的一半。猪肉是我国大多数城乡居民最主要的肉类食品,占我国肉类消费总量的63%。保障猪肉供应是重大民生问题,事关我国经济发展和社会稳定大局。90年代以来,我国规模化养猪业快速兴起,猪肉市场需求主要为瘦肉,饲养瘦肉型猪成为主流。自主培育适合我国养殖条件和满足我国市场需求的瘦肉型种猪,对于保障国家生猪种业安全、促进养猪业可持续发展有重要意义。 展开更多

关键词 猪肉消费 我国经济发展 猪肉市场 肉类消费 瘦肉型猪 重大民生问题 养殖条件 可持续发展

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不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响 被引量：7

13

作者 钟翠丽 李国玲 +5 位作者 莫健新 全绒 王豪强 李紫聪 吴珍芳 张献伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期930-938,共9页

为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)最佳的电转染效率,本研究利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)辅助优化NEPA 21和Nucleofector?2b两种电转仪电转染PFFs细胞的参数,比较不同质... 为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)最佳的电转染效率,本研究利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)辅助优化NEPA 21和Nucleofector?2b两种电转仪电转染PFFs细胞的参数,比较不同质粒用量和拓扑结构在ECM?830、NEPA 21和Nucleofector?2b中的转染效率。结果显示:NEPA 21电转PFFs的最佳穿孔参数为脉冲电压200 V,脉冲长度3 ms,脉冲间隔50 ms,脉冲次数3次,脉冲电压衰减幅度10%;Nucleofector?2b在U-023的转染参数下达到最高转染效率。ECM?830和Nucleofector?2b的最适质粒用量都为10μg,而NEPA 21为8μg;超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高,且3种仪器中Nucleofector?2b转染效果最佳。本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影响因素以优化PFFs的电转条件,为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础。 展开更多

关键词 电转染 猪胎儿成纤维细胞 ECM^(■) 830 NEPA 21 Nucleofector^(TM) 2b

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微生物源果胶酶在猪PK15细胞中异源表达及其酶学性质分析 被引量：5

14

作者 莫健新 王豪强 +3 位作者 黄广燕 蔡更元 吴珍芳 张献伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期736-745,共10页

果胶是植物细胞壁组分之一,是畜禽饲料中主要的抗营养因子,影响畜禽对日粮中能量和氮的利用效率。果胶酶在自然界中广泛存在于细菌、酵母和丝状真菌等微生物中,对解除果胶的抗营养作用、提高饲料利用率具有良好的效果。为了探索在猪细... 果胶是植物细胞壁组分之一,是畜禽饲料中主要的抗营养因子,影响畜禽对日粮中能量和氮的利用效率。果胶酶在自然界中广泛存在于细菌、酵母和丝状真菌等微生物中,对解除果胶的抗营养作用、提高饲料利用率具有良好的效果。为了探索在猪细胞中表达微生物源果胶酶基因的可行性,本研究通过脂质体转染法将微生物源果胶酶基因pg5a、pgI、pga3A和pgaA导入猪PK15细胞中进行异源表达,利用3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法测定这4种基因编码果胶酶的酶活力。结果显示,4种果胶酶基因均能在猪PK15细胞中转录出mRNA,但只有pg5a和pgI适应猪细胞表达系统。其中,果胶酶PG5A的最高酶活为0.95 U/mL,最适作用pH为pH4.0,在pH4.6~6.0范围内维持46%以上的酶活;PGI在pH5.0处获得最高酶活,为0.30 U/mL,在pH4.0~6.0范围内维持35%以上的酶活。消化蛋白酶耐受实验结果显示,PG5A和PGI对胃蛋白酶和胰蛋白酶均有较强的耐受能力,用1 mg/mL的猪胃蛋白酶处理2 h后,PG5A和PGI的剩余酶活分别为76%和71%;用1 mg/mL的猪胰蛋白酶处理2 h后,PG5A和PGI的剩余酶活分别为44%和93%。综上所述,果胶酶基因pg5a和pgI能在猪细胞中正常表达,其编码的果胶酶对猪消化道pH条件和消化蛋白酶具有较强的耐受能力,可作为制备转果胶酶基因猪的候选基因。 展开更多

关键词 果胶酶 果胶 抗营养因子 转基因 猪

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基于B646L、EP402R、MGF360/505基因的非洲猪瘟病毒ERA检测方法的建立 被引量：13

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作者 曾宇晨 龚浪 +5 位作者 王京煜 潘昊鸣 梁杏玲 马俊 张桂红 王衡 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期33-40,共8页

【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序... 【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序列,设计特异性的ERA探针和引物,经过反应条件的优化,建立42℃等温条件下检测ASFV DNA的ERA方法。【结果】ERA-ASFV-B646L、ERA-ASFV-EP402R和ERA-ASFV-MGF3个检测方法分别在16、7和13 min内即可得出检测结果;特异性强,对阳性样品拷贝数的检测下限均为102μL-1;与我国非洲猪瘟诊断技术标准中的方法对比,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的ERA检测方法可以用于ASFV的快速检测,为流行病学调查和现场检测提供了一种快速有效的检测方法。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 酶促重组酶扩增 等温扩增 快速检测

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1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定 被引量：4

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作者 陈孝军 马俊 +9 位作者 陈熊男 梁祎凡 高琦 黄钊 许润达 郑佳琛 郑泽中 张桂红 王衡 龚浪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期2239-2251,共13页

旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备... 旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为^(84)M~K^(142);噬菌体淘选试验结果表明,^(116)TSSFETLFE^(124)为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 单克隆抗体 生物淘选 抗原表位

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2021-2022年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析 被引量：3

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作者 王志远 刘博奇 +5 位作者 许志颖 徐思佳 邢家宝 张桂红 王衡 孙彦阔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3812-3823,共12页

为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRS... 为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRSV的ORF5基因进行了遗传变异分析。通过实时荧光定量PCR鉴定PRRSV阳性样品和基因型,应用RT-PCR扩增PRRSV ORF5和ORF7基因,将阳性样本进行测序并开展系统发育学分群和GP5氨基酸突变分析。结果显示,共检出PRRSV-2阳性样品48份(总体阳性率约41%),经测序共获取38条ORF5序列和10条ORF7序列。所有ORF5序列间核苷酸相似性为77.1%~99.8%,ORF7序列间核苷酸相似性为83.3%~98.7%。系统发育学分群显示,谱系1占比60%(29/48,28株NADC30-like毒株,1株NADC34-like毒株),谱系3占比25%(12/48),谱系5.1占比5%(2/48),谱系8.7占比10%(5/48)。GP5氨基酸分析表明,信号肽(aa 1—26)、中和表位C(aa 52—61)及潜在的N-糖基化位点(aa 32—35、aa 44、aa 51)3个区域氨基酸存在显著变异。研究结果表明:多个谱系PRRSV同时在我国流行,谱系1已替代谱系8.7成为主要流行谱系,并分布于我国大多数省份;谱系3仅次于谱系1,主要在华南局部地区流行;谱系8.7毒株检出率较低。需要注意的是,在广东省惠州市检出1株NADC34-like毒株,说明该毒株可能已在华南地区潜在流行。近几年来,PRRSV在我国的流行日趋复杂,谱系1毒株的广泛流行增加了PRRSV的遗传多样性。本研究结果将为制定PRRSV防控策略提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 系统发育学分析 NADC30 NADC34

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猪精液性状的遗传参数估计 被引量：2

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作者 洪一峰 张恒 +6 位作者 谈成 董林松 李娅兰 叶健 蔡更元 吴珍芳 李紫聪 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期71-74,共4页

本研究采用单性状重复力模型和双性状动物模型分别对公猪精液体积、精子活力、精子密度、精子畸形率4个性状进行遗传参数估计,并对不同性状间的遗传相关进行估计。结果显示:精液体积为中等遗传力(遗传力为0.29),精子密度、精子活力和精... 本研究采用单性状重复力模型和双性状动物模型分别对公猪精液体积、精子活力、精子密度、精子畸形率4个性状进行遗传参数估计,并对不同性状间的遗传相关进行估计。结果显示:精液体积为中等遗传力(遗传力为0.29),精子密度、精子活力和精子畸形率性状具有较低遗传力,遗传力分别为0.10、0.16、0.15;这4个性状均有中等偏高的重复力,分别为0.47、0.42、0.36、0.50。精液体积与精子密度具有较强的遗传负相关(-0.389),精液体积与精子畸形率具有较弱的遗传负相关(-0.171),精子活力与精子畸形率具有强的遗传负相关(-0.826),其余性状均无明显遗传相关。以上结果表明可以通过对精液性状进行选择来提高公猪精液品质。 展开更多

关键词 精液性状 重复力动物模型 双性状动物模型 遗传相关

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2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒S1、M和ORF3基因遗传进化分析 被引量：3

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作者 熊谋康 梁太润 +5 位作者 刘献辉 王志朋 王爽云 刘燕玲 张乐宜 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第15期8-17,共10页

为了解2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株变异及遗传进化情况,试验从多个地区的51家猪场采集340份疑似感染PEDV的猪小肠组织、粪便和肛拭子,提取病毒核酸后采用RT-PCR方法扩增S1、M... 为了解2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株变异及遗传进化情况,试验从多个地区的51家猪场采集340份疑似感染PEDV的猪小肠组织、粪便和肛拭子,提取病毒核酸后采用RT-PCR方法扩增S1、M和ORF3基因并测序,与GenBank中PEDV参考毒株进行比对分析,利用生物信息学软件构建遗传进化树,分析核苷酸序列同源性及氨基酸序列。结果表明:共获得57份PEDV阳性样品,来源于14家猪场,猪场阳性率为27.5%,并对从阳性猪场获得的14株毒株进行命名。与经典毒株CV777相比,14株PEDV毒株的S1、M和ORF3基因均出现不同程度的氨基酸突变。在14株毒株的S1基因中,Heyuan2021-7毒株位于G1-2分支,其余13株位于G2分支,14株毒株与参考毒株GD-A核苷酸序列的相似性较高,为89.3%~99.9%,存在多处氨基酸的缺失和插入。在M基因中,14株毒株位于G2分支且与参考毒株FR-001核苷酸序列的相似性为98.1%~99.7%,只存在氨基酸突变。在ORF3基因中,FC2021-1、GDzq2020-12、GDmm^(2)021-1和GDjm-DG-2021-12毒株位于G1-2分支,其余10株位于G2分支,14株毒株与参考毒株VN-JFP1013核苷酸序列的相似性为95.4%~99.3%,同源性较高,只存在氨基酸突变。说明2020—2021年我国部分地区流行的PEDV毒株有G1型和G2型毒株,其S1基因较M和ORF3基因突变程度更大,PEDV的流行情况相对复杂。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 检测 S1基因 M基因 ORF3基因 基因测序 遗传变异

原文传递

细菌脂多糖对猪圆环病毒2型在PK-15细胞中复制的影响 被引量：2

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作者 张歆明 徐舸 +6 位作者 郑钦生 刘献辉 张鹏飞 王爽云 张乐宜 刘燕玲 宋长绪 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期24-29,共6页

研究脂多糖(LPS)对PCV2在PK-15细胞复制的影响,并探究其内在机制。用不同来源的LPS刺激感染PCV2的PK-15细胞,实时荧光定量PCR检测不同时间点对病毒复制的影响,以及NF-κB信号通路相关分子表达水平,吸附试验验证LPS对PCV2感染过程的影响,... 研究脂多糖(LPS)对PCV2在PK-15细胞复制的影响,并探究其内在机制。用不同来源的LPS刺激感染PCV2的PK-15细胞,实时荧光定量PCR检测不同时间点对病毒复制的影响,以及NF-κB信号通路相关分子表达水平,吸附试验验证LPS对PCV2感染过程的影响,用Pymol软件对PCV2衣壳蛋白与LPS进行分子对接。结果表明,LPS刺激PK-15细胞12 h抑制PCV2的复制,而刺激24 h和48 h促进PCV2的复制,LPS还可以抑制PCV2病毒的吸附过程。对LPS与PCV2的Cap蛋白进行结构功能预测,发现二者有多处结合位点,表明LPS可能通过与PCV2核衣壳蛋白直接作用抑制PCV2与受体结合影响病毒前期吸附过程。后期LPS通过激活TLR4/NF-κB信号通路,促进IFN-β的表达,使病毒复制滴度增加。说明LPS对PCV2的复制存在双重影响,总体上促进PCV2的复制。 展开更多

关键词 脂多糖 猪圆环病毒2型 吸附 核因子ΚB Β干扰素

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