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泛素化激酶Cbl蛋白对H9N2亚型禽流感病毒早期复制的抑制作用
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作者 陈佳静 李彤彤 +3 位作者 张则 卢安然 李陈飞 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第6期78-83,共6页
为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒... 为研究Cbl蛋白(Casitas b-lineage lymphoma)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,采用PCR技术扩增Cbl基因片段并连接到FLAG-N载体中,Western blot技术验证FLAG-Cbl重组载体表达及病毒NP蛋白的表达情况,并采用荧光定量PCR技术检测病毒的血凝素(HA)、核蛋白(NP)和非结构蛋白(NS)基因水平;采用RNAi技术检测Cbl对病毒HA基因表达水平的影响。结果显示:EcoRⅠ、HindⅢ双酶切鉴定及测序分析发现,成功构建真核表达重组载体FLAG-Cbl;Western blot结果证实H9N2亚型AIV感染FLAG-Cbl重组载体转染的A549细胞6 h时,病毒NP蛋白表达降低;荧光定量PCR结果证实病毒NP、NS及HA基因在AIV感染FLAG-cbl重组载体转染的A549细胞的6和12 h时表达水平均明显降低;RNAi敲低A549细胞内源性Cbl蛋白后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12、24和36 h明显升高。结果表明:Cbl蛋白能在早期抑制H9N2亚型AIV在A549细胞上的复制,为深入研究Cbl蛋白抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗AIV的药物研发提供了参考。 展开更多
关键词 Cbl蛋白 H9N2亚型AIV 重组蛋白表达 病毒基因表达 SIRNA
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法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞的功能研究
2
作者 张则 郑阳 +2 位作者 郝珊珊 蔡佳希 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第5期88-93,共6页
旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平... 旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平;流式分析图显示,法氏囊多肽BP7促进活化T细胞增殖分化成CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+) T细胞,而BP9在48 h促进CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例增加,但未达到差异水平;细胞凋亡结果显示,BP7和BP9均能抑制T淋巴细胞早期凋亡。此外,ELISA检测表明,BP7促进T细胞分泌IL-4和IFN-γ。以上结果表明:法氏囊活性肽BP7和BP9均参与T细胞分化成熟反应,但其调节功能略有差异。 展开更多
关键词 法氏囊活性肽BP7 BP9 H9N2灭活疫苗 T细胞亚型
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