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梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究 被引量：10
1
作者 赵飞骏 吴移谋 +2 位作者 张晓红 刘双全 余敏君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期767-771,共5页
利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA... 利用PCR技术从Tp Nichols株基因组模板中扩增梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)外膜蛋白Gpd基因,定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd,免疫印迹和免疫组化技术检测pcDNA3.1(+)-Gpd在HeLa细胞中的表达;同时将真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd免疫新西兰兔,检测其在兔体内的免疫应答效果。免疫印迹和免疫组化鉴定均显示重组体在HeLa细胞中能有效表达一个41kD的Gpd融合蛋白。新西兰兔接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度可达1∶1024,免疫后兔脾细胞受Gpd蛋白刺激有明显增殖反应。所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖情况均显著高于空质粒对照组和空白对照组(p<0.05)。Tp真核表达重组体pcDNA3.1(+)-Gpd的成功构建及能刺激新西兰兔产生较强特异的免疫应答,为Gpd蛋白生物学功能及梅毒DNA疫苗的深入研究奠定了一定的实验基础。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 Gpd基因 真核表达 免疫
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过表达外源M-CSF促进MCF7细胞增殖 被引量：2
2
作者 涂剑 姚志红 +2 位作者 龙治峰 朱炳阳 唐圣松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期132-136,共5页
为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷... 为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响.结果表明,转染M-CSF的MCF7细胞过表达M-CSF mRNA及蛋白,并且定位表达于细胞质;与转染空载体及未转染M-CSF组细胞比较,转染M-CSF的MCF7细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的MCF7细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强;以上结果提示,胞质过表达M-CSF可促进MCF7细胞的增殖. 展开更多
关键词 巨噬细胞集落刺激因子 pCMV/cyto/myc—M—CSF载体 MCF7细胞 胞质 细胞增殖
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梅毒螺旋体融合双价DNA疫苗的构建及其免疫活性研究 被引量：12
3
作者 赵飞骏 吴移谋 +3 位作者 张晓红 刘双全 杨胜辉 余敏君 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期250-253,共4页
目的构建含有梅毒螺旋体Gpd和Tp92抗原编码基因的真核表达重组体,并检测其在兔体内的免疫应答效果。方法定向克隆构建双基因融合真核表达重组体pcDNA3．1(+)/Gpd-Tp92,用免疫组化技术检测其在HeLa细胞中的表达；同时将其与先期构建的pcD... 目的构建含有梅毒螺旋体Gpd和Tp92抗原编码基因的真核表达重组体,并检测其在兔体内的免疫应答效果。方法定向克隆构建双基因融合真核表达重组体pcDNA3．1(+)/Gpd-Tp92,用免疫组化技术检测其在HeLa细胞中的表达；同时将其与先期构建的pcDNA3．1(+)/Gpd、pcDNA3．1(+)/Tp92真核表达重组体分别免疫新西兰兔,ELISA检测免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IFN-γ诱导水平,MTT法检测兔脾细胞增殖水平。结果pcDNA3．1(+)/Gpd-Tp92在HeLa细胞中能有效表达。新西兰兔分别接种3种核酸疫苗后,均能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度均可达1∶1024及以上,免疫后兔脾细胞受相应蛋白刺激有明显增殖反应,细胞培养上清中IFN-γ水平显著升高。检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组(P＜0．05)。3组核酸疫苗组抗体诱导水平差异无统计学意义,但Gpd-Tp92融合核酸疫苗组刺激机体引发特异性淋巴细胞增殖能力较之两单基因核酸疫苗组有明显提高。结论梅毒螺旋体真核表达重组体pcDNA3．1(+)/Gpd-Tp92的成功构建及对新西兰兔产生强特异免疫应答的有效刺激,为梅毒DNA疫苗的研究奠定一定的实验基础。 展开更多
关键词 密螺旋体 苍白 疫苗 DNA 抗体生成 免疫 细胞
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