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白细胞介素32对人脐带来源间充质干细胞向脂肪细胞分化的调控作用
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作者 张夏茹 赵薪丰 +5 位作者 郑远静 刘元林 李雪 王洋 王丽峰 张毅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期256-264,共9页
目的探讨白细胞介素32(IL-32)对人脐带来源间充质干细胞(HuMSC)成脂分化的调控作用。方法①用肿瘤坏死因子α(TNF-α)20μg·L^(-1)和干扰素γ(IFN-γ)20μg·L^(-1)处理HuMSC 24 h得到激活的HuMSC(S-HuMSC),流式细胞术检测HuMS... 目的探讨白细胞介素32(IL-32)对人脐带来源间充质干细胞(HuMSC)成脂分化的调控作用。方法①用肿瘤坏死因子α(TNF-α)20μg·L^(-1)和干扰素γ(IFN-γ)20μg·L^(-1)处理HuMSC 24 h得到激活的HuMSC(S-HuMSC),流式细胞术检测HuMSC和S-HuMSC表面标志物CD14,CD34,CD45,CD73,CD90和CD105表达鉴定其表型;对HuMSC和S-HuMSC进行成脂诱导10 d后进行油红O染色检测脂滴面积,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成脂相关转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和脂肪酶(ADI)mRNA表达,测定其成脂分化能力;成骨诱导14 d后进行碱性磷酸酶(ALP)染色检测ALP着色面积,RT-qPCR检测成骨相关转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)、ALP和无远侧同源盒5(DLX5)mRNA表达,测定其成骨分化能力。②构建含有过表达IL-32基因序列且带有绿色荧光蛋白及嘌呤霉素抗药基因的慢病毒载体和阴性对照(NC)空载体并收获慢病毒,分别感染HuMSC得到IL-32^(high)HuMSC和NC-HuMSC。对HuMSC,NC-HuMSC和IL-32^(high)HuMSC进行成脂诱导分化,于诱导后第0,3,5,7,10和14天进行油红O染色检测细胞内脂滴形成面积,RT-qPCR检测成脂分化相关转录因子PPARγ,C/EBPα和ADI mRNA表达。结果①流式细胞术检测结果表明,HuMSC和S-HuMSC均高表达CD73,CD90和CD105,低表达或不表达CD14,CD34和CD45,两者表型符合MSC的生物学特征。HuMSC和S-HuMSC成脂和成骨诱导分化后,与各自自分化对照组相比,诱导组ALP染色面积和脂滴面积增加(P<0.01),成骨分化相关转录因子RUNX2,ALP和DLX5及成脂分化相关转录因子PPARγ,C/EBPα和ADI mRNA表达亦显著增加(P<0.01),表明两者均具有MSC的特性。与HuMSC诱导组相比,S-HuMSC诱导后脂滴形成面积明显减少(P<0.01),成脂分化相关转录因子PPARγ,C/EBPα和ADI mRNA表达亦显著下降(P<0.05),且S-HuMSC高表达IL-32(P<0.01)。②HuMSC,NC-HuMSC和IL-32^(high)HuMSC体外成脂诱导后,从第3天开始IL-32^(high)HuMSC诱导组细胞脂滴形成面积明显小于HuMSC和NC-HuMSC诱导组(P<0.01),且成脂相关转录因子PPARγ,C/EBPα和ADI mRNA表达也显著降低(P<0.05)。结论过表达IL-32可显著降低HuMSC的成脂分化能力。 展开更多
关键词 间充质干细胞 白细胞介素32 成脂分化
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