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毛蕊异黄酮通过Nrf2/HO-1信号途径诱导人甲状腺癌FTC-133细胞发生铁死亡 被引量：11
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作者 谭雄 陈洁 +2 位作者 熊国祚 申昕 颜红霞 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第18期3269-3274,共6页
目的:观察毛蕊异黄酮(CA)是否可诱导人甲状腺癌细胞系FTC-133细胞铁死亡并探讨其可能机制。方法:采用RPMI 1640培养液培养FTC-133细胞,分为对照和CA、铁死亡抑制剂ferrostatin-1、血红素氧合酶-1(HO-1)激动剂CoPP、CA+ferrostatin-1和CA... 目的:观察毛蕊异黄酮(CA)是否可诱导人甲状腺癌细胞系FTC-133细胞铁死亡并探讨其可能机制。方法:采用RPMI 1640培养液培养FTC-133细胞,分为对照和CA、铁死亡抑制剂ferrostatin-1、血红素氧合酶-1(HO-1)激动剂CoPP、CA+ferrostatin-1和CA+CoPP组。CCK-8法检测细胞增殖。相应试剂盒检测细胞活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、总铁和二价铁离子水平。Western Blot检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和HO-1蛋白表达。结果:与对照组比较,CA(50、100和150μmol/L)处理在24 h、48 h和72 h三个时间点均降低细胞存活率,并呈现剂量依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,CA(50、100和150μmol/L)处理48 h降低细胞中GSH的浓度(均P<0.05),增加了FTC-133细胞中ROS、MDA、总铁和二价铁离子浓度(均P<0.05)。与对照组比较,CA(50、100和150μmol/L)处理48 h显著降低细胞中GPX4(P<0.05)和FTH1(P<0.05)蛋白表达水平(均P<0.05)。Ferrostatin-1部分逆转了CA诱导FTC-133细胞铁死亡的作用(均P<0.05)。与对照组比较,CA(50、100和150μmol/L)处理均降低Nrf2在细胞核中的表达及Nrf2在细胞核中表达与Nrf2总蛋白表达的比值(均P<0.05),而没有影响Nrf2总蛋白表达(均P>0.05)。与对照组比较,CA(50、100和150μmol/L)处理均降低细胞中HO-1的蛋白表达(均P<0.05)。CoPP部分逆转了CA诱导FTC-133细胞铁死亡的作用(均P<0.05)。结论:CA诱导了人甲状腺癌细胞系FTC-133细胞发生铁死亡,而其机制可能是通过Nrf2/HO-1信号通路。 展开更多
关键词 毛蕊异黄酮 甲状腺癌 铁死亡 Nrf2/HO-1信号通路
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红景天甙诱导骨肉瘤细胞系凋亡并抑制上皮细胞-间充质转化 被引量：2
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作者 谭雄 陈洁 +3 位作者 毕国善 申昕 戴先鹏 颜红霞 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第11期1506-1511,共6页
目的探讨红景天甙(Sal)对骨肉瘤细胞系(HOS、U2OS)增殖、凋亡以及上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养骨肉瘤细胞系HOS以及U2OS细胞,用不同浓度Sal处理细胞24 h后,MTT法和流式细胞计量术分别检测细胞活性以及细胞凋亡水平;Wes... 目的探讨红景天甙(Sal)对骨肉瘤细胞系(HOS、U2OS)增殖、凋亡以及上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养骨肉瘤细胞系HOS以及U2OS细胞,用不同浓度Sal处理细胞24 h后,MTT法和流式细胞计量术分别检测细胞活性以及细胞凋亡水平;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bcl-2/Bak以及EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin、Slug和Snial的表达水平。随后,通过Transwell小室法以及细胞划痕实验检测Sal对细胞侵袭以及迁移的影响。PI3K/Akt抑制剂处理细胞后,Western blot检测EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin、Slug和Snial的变化情况。结果不同浓度Sal均能显著抑制HOS及U2OS细胞的细胞活性,并增加细胞凋亡率,且细胞中Bcl-2表达降低,Bak表达增高。150μmol/L的Sal能够显著降低HOS和U2OS细胞的侵袭率以及迁移水平。Western blot结果显示,150μmol/L Sal处理后,HOS和U2OS细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin、Slug和Snial表达下调。PI3K/Akt抑制剂处理后,E-cadherin表达水平较Sal单独处理的细胞进一步升高,而N-cadherin、Slug和Snial表达则显著下降(P<0.05)。结论Sal能够抑制骨肉瘤细胞系细胞的增殖、侵袭以及迁移,并促进细胞凋亡。同时,还能够通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制骨肉瘤细胞系发生EMT。 展开更多
关键词 红景天甙 骨肉瘤细胞系 凋亡 上皮细胞-间充质转化
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毛蕊异黄酮对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞增殖及瓦博格效应的影响
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作者 谭雄 陈洁 +2 位作者 申昕 戴先鹏 毕国善 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2021年第10期927-932,共6页
目的观察毛蕊异黄酮(calycosin,CA)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞增殖和瓦博格效应的影响并探讨其可能的机制。方法将SH-SY5Y细胞培养于DMEM培养基,实验分为对照组和CA组、CA+siRNA阴性对照组和CA+siRNA TAp73... 目的观察毛蕊异黄酮(calycosin,CA)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞增殖和瓦博格效应的影响并探讨其可能的机制。方法将SH-SY5Y细胞培养于DMEM培养基,实验分为对照组和CA组、CA+siRNA阴性对照组和CA+siRNA TAp73α组。CA组的细胞用50、100和150μmol/L CA分别处理24、48和72 h。CA+siRNA阴性对照组的细胞转染阴性对照siRNA质粒24 h后,再加100μmol/L CA处理48 h。CA+siRNA TAp73α组的细胞转染TAp73α干扰RNA质粒24 h后,再加100μmol/L CA处理48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖水平,用化学检测法检测细胞培养液中乳酸的水平和细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,用液闪法检测细胞对葡萄糖的吸收量。采用细胞外通量分析仪检测细胞外液酸化速率、细胞氧气消耗速率和细胞糖酵解能力。采用蛋白质印迹法检测TAp73蛋白的表达水平。采用实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测TAp73αmRNA的相对表达水平。采用单因素方差分析比较各组间的差异,采用LSD-t检验进行组间差异的两两比较。结果与对照组比较,经50、100和150μmol/L CA处理的SH-SY5Y细胞,在24、48和72 h细胞的增殖水平显著降低,呈现剂量和时间依赖性。与对照组比较,经50、100和150μmol/L CA处理的SH-SY5Y细胞在48 h以剂量依赖的方式降低了培养液中乳酸的水平,对照组和CA组(50、100和150μmol/L)的乳酸相对水平分别为(100±0)%、(84.31±5.14)%、(52.06±6.37)%和(32.16±4.11)%,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(均P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞中LDH活力,LDH的活力在对照组和CA组(50、100和150μmol/L)分别为(24.32±3.77)U/mg、(19.39±2.34)U/mg、(12.34±2.64)U/mg和(7.61±1.06)U/mg,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞对葡萄糖的吸收,葡萄糖吸收的相对水平在对照组和CA组(50、100和150μmol/L)分别为(100±0)%、(78.36±6.22)%、(42.91±5.07)%和(26.18±4.39)%,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞的细胞外液酸化速率,细胞外液酸化速率在对照组和CA组(50、100和150μmol/L)的相对水平分别为(100±0)%、(75.37±5.37)%、(38.42±4.11)%和(22.31±2.86)%,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞氧气消耗速率的相对水平在对照组和CA组(50、100和150μmol/L)分别为(100±0)%、(85.76±5.29)%、(64.11±6.07)%和(42.86±3.85)%,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞糖酵解能力的相对水平在对照组和CA组(50、100和150μmol/L)分别为(100±0)%、(75.87±8.06)%、(54.93±6.33)%和(36.75±5.28)%,对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,100、150μmol/L的CA显著上调了TAp73蛋白的表达水平,对照组和CA组(100和150μmol/L)的TAp73蛋白相对表达水平分别为12.76±2.64、35.84±5.61和67.51±5.97。RNA干扰沉默TAp73α的表达,影响CA对SH-SY5Y细胞增殖和瓦博格效应的抑制作用。结论CA可抑制人NB细胞株SH-SY5Y细胞的增殖,作用机制可能与通过上调TAp73蛋白的表达水平从而抑制瓦博格效应有关。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 毛蕊异黄酮 细胞增殖 瓦博格效应 TAp73
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不可分型流感嗜血杆菌诱导14-3-3ε表达负向调控肺部炎症反应
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作者 颜红霞 霍佳雯 +1 位作者 魏大飞 谭雄 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第9期1320-1330,共11页
该文旨在观察14-3-3ε在不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导人支气管上皮细胞分泌促炎细胞因子中的作用,并研究其作用机制。分别采用感染复数(MOI)为5、10和20的NTHi感染BEAS-2B细胞,实时定量PCR或Western blot检测感染前后细胞内14-3-3ε... 该文旨在观察14-3-3ε在不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导人支气管上皮细胞分泌促炎细胞因子中的作用,并研究其作用机制。分别采用感染复数(MOI)为5、10和20的NTHi感染BEAS-2B细胞,实时定量PCR或Western blot检测感染前后细胞内14-3-3ε的表达情况以及酪氨酸激酶c-Src在其中的作用。同时通过免疫共沉淀检测14-3-3ε与TLR2的结合水平。采用RNA干扰或使细胞内过表达14-3-3ε,免疫荧光和ELISA等方法测定其对NF-κB的活化以及培养上清中TNF-α和IL-6浓度的影响。最后通过动物实验观察抑制14-3-3ε的活性对NTHi感染后肺部炎症反应的影响。结果显示,NTHi感染上皮细胞后,14-3-3ε的蛋白和mRNA水平随着MOI的递增而增高,采用ActD和CHX预处理细胞后,14-3-3ε表达水平和对照组相比分别降低了71.05%和59.21%。NTHi感染15 min后BEAS-2B细胞中c-Src磷酸化水平增高了3.63倍,而抑制c-Src活性后14-3-3ε表达水平降低了50.60%。免疫共沉淀结果也显示不同MOI NTHi感染后,14-3-3ε与TLR2的结合分别增高了1.78、4.33和6.89倍。沉默14-3-3ε表达后,NF-κB的抑制因子IκB的含量降低了75.24%,其细胞核内p65亚基水平增加了36.9%,TNF-α和IL-6的分泌水平分别由(269.24±16.71)pg/mL和(116.08±5.61)pg/mL增高至(332.27±20.57)pg/mL和(172.32±9.78)pg/mL。而细胞内过表达14-3-3ε后,TNF-α和IL-1β水平分别降至(145.34±22.16)pg/mL和(65.22±11.74)pg/mL,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,NTHi感染C57BL/6小鼠后肺组织中14-3-3εmRNA表达水平也有所增高,预先采用14-3-3ε抑制剂R18腹腔注射后,小鼠肺组织病理评分由(6.42±1.52)增高至(11.86±1.63),肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的含量由(186.39±16.71)pg/mL和(76.21±12.63)pg/mL增高至(258.91±32.05)pg/mL和(151.25±23.87)pg/mL。以上结果表明,NTHi感染能诱导气道上皮细胞表达14-3-3ε,后者能下调TLR2/NF-κB通路活性,最终负向调控肺部炎症反应。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 14-3-3ε NF-ΚB 细胞因子
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