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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立
被引量：
3
1
作者
孙琦
王湘雨
+3 位作者
陈诗琪
司徒莉芳
赵卫
万成松
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2015年第1期54-58,共5页
＂超级细菌＂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度...
＂超级细菌＂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×10^9CFU,最适建模浓度为每只1.4×10^9CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。
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关键词
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)
腹膜炎
小鼠模型
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职称材料
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株的构建及其生物学特性分析
被引量：
2
2
作者
韩朋
孙琦
+2 位作者
赵素慧
张其威
万成松
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期904-908,共5页
目的利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46...
目的利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46质粒的EHEC O157:H7 EDL933w感受态细菌,然后将该抗性基因片段电击转化入制备的感受态菌株中;利用pKD46介导的Red重组系统,通过同源重组替换EHEC O157:H7 EDL933w ppk基因,PCR和测序验证;通过革兰染色、测D600值、吉姆萨染色比较EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的形态结构、生长能力和黏附性。结果构建了ppk基因缺失并含有卡那霉素抗性的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株(EHEC O157:H7 EDL933wΔppk),初步探索了EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的生物学特性。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中ppk基因的调控机制奠定了基础。
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关键词
EHEC
O157
H7
ppk基因
RED重组系统
基因突变
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职称材料
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建
被引量：
1
3
作者
华颖
孙琦
+5 位作者
王湘雨
杜艳丽
邵娜
张其威
赵卫
万成松
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1546-1551,共6页
目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 4...
目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中esp F及其核苷酸片段是否转录。结果构建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株,且esp F基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中esp F基因的调控机制奠定了基础。
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关键词
大肠埃希菌
espF基因
同源重组
突变株
基因回补
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职称材料
A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体的制备及其效价评定
被引量：
1
4
作者
韦耀
韩朋
+3 位作者
周旋
孙琦
张宝
万成松
《中国卫生检验杂志》
北大核心
2013年第18期3510-3513,共4页
目的获得高效价A型肉毒毒素（BoNT／A）表位多肽单克隆抗体。方法利用DNASTAR分析软件，结合Expasy网络服务器，综合参考多参数预测B细胞抗原表位；以多肽作为抗原制备BoNT／AHc表位多肽单克隆抗体，并进行效价鉴定。结果以合成多肽（P1...
目的获得高效价A型肉毒毒素（BoNT／A）表位多肽单克隆抗体。方法利用DNASTAR分析软件，结合Expasy网络服务器，综合参考多参数预测B细胞抗原表位；以多肽作为抗原制备BoNT／AHc表位多肽单克隆抗体，并进行效价鉴定。结果以合成多肽（P1＆P2）分别免疫Balb／c小鼠，获得两株单克隆抗体，经鉴定分别是IgG和IgM，效价为10-5～10-6；检测抗体结果显示，纯度较高，特异性好。结论本研究制备出了特异性好、效价较高的A型肉毒毒素单克隆抗体，为获得抗A型肉毒毒素的快速现场检测提供技术支持。
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关键词
A型肉毒毒素
单克隆抗体
效价
原文传递
题名
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立
被引量：
3
1
作者
孙琦
王湘雨
陈诗琪
司徒莉芳
赵卫
万成松
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院bsl-
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2015年第1期54-58,共5页
基金
广东省自然科学基金项目(S2013010014393)
文摘
＂超级细菌＂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×10^9CFU,最适建模浓度为每只1.4×10^9CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。
关键词
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)
腹膜炎
小鼠模型
Keywords
methicillin resistant Staphylococcus aureus（MRSA）
peritonitis
mouse model
分类号
R-33 [医药卫生]
下载PDF
职称材料
题名
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株的构建及其生物学特性分析
被引量：
2
2
作者
韩朋
孙琦
赵素慧
张其威
万成松
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院bsl-
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期904-908,共5页
基金
国家自然科学基金(81371765)
广东省自然科学基金(S2013010014393)~~
文摘
目的利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46质粒的EHEC O157:H7 EDL933w感受态细菌,然后将该抗性基因片段电击转化入制备的感受态菌株中;利用pKD46介导的Red重组系统,通过同源重组替换EHEC O157:H7 EDL933w ppk基因,PCR和测序验证;通过革兰染色、测D600值、吉姆萨染色比较EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的形态结构、生长能力和黏附性。结果构建了ppk基因缺失并含有卡那霉素抗性的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株(EHEC O157:H7 EDL933wΔppk),初步探索了EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的生物学特性。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中ppk基因的调控机制奠定了基础。
关键词
EHEC
O157
H7
ppk基因
RED重组系统
基因突变
Keywords
enterohemorrhagic Escherichia coli O157：H7
ppk gene
Red recombination system
gene mutation
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建
被引量：
1
3
作者
华颖
孙琦
王湘雨
杜艳丽
邵娜
张其威
赵卫
万成松
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院bsl-
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1546-1551,共6页
基金
国家自然科学基金(81371765)
广东省自然科学基金(S2013010014393)~~
文摘
目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中esp F及其核苷酸片段是否转录。结果构建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株,且esp F基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中esp F基因的调控机制奠定了基础。
关键词
大肠埃希菌
espF基因
同源重组
突变株
基因回补
Keywords
EHEC espF gene
homologous recombination
mutant strain
gene complementation
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体的制备及其效价评定
被引量：
1
4
作者
韦耀
韩朋
周旋
孙琦
张宝
万成松
机构
南方医科大学公共卫生与热带医学学院bsl-
西双版纳傣族自治州疾病预防控制中心性艾防治科
出处
《中国卫生检验杂志》
北大核心
2013年第18期3510-3513,共4页
基金
广东省社会发展领域科技计划项目(2010B031000005)
文摘
目的获得高效价A型肉毒毒素（BoNT／A）表位多肽单克隆抗体。方法利用DNASTAR分析软件，结合Expasy网络服务器，综合参考多参数预测B细胞抗原表位；以多肽作为抗原制备BoNT／AHc表位多肽单克隆抗体，并进行效价鉴定。结果以合成多肽（P1＆P2）分别免疫Balb／c小鼠，获得两株单克隆抗体，经鉴定分别是IgG和IgM，效价为10-5～10-6；检测抗体结果显示，纯度较高，特异性好。结论本研究制备出了特异性好、效价较高的A型肉毒毒素单克隆抗体，为获得抗A型肉毒毒素的快速现场检测提供技术支持。
关键词
A型肉毒毒素
单克隆抗体
效价
Keywords
BoNT/A
Monoclonal antibody
Titer
分类号
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立
孙琦
王湘雨
陈诗琪
司徒莉芳
赵卫
万成松
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2015
3
下载PDF
职称材料
2
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株的构建及其生物学特性分析
韩朋
孙琦
赵素慧
张其威
万成松
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
下载PDF
职称材料
3
肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建
华颖
孙琦
王湘雨
杜艳丽
邵娜
张其威
赵卫
万成松
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
下载PDF
职称材料
4
A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体的制备及其效价评定
韦耀
韩朋
周旋
孙琦
张宝
万成松
《中国卫生检验杂志》
北大核心
2013
1
原文传递
已选择
0
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