C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织 被引量：4

1

作者 王齐 廖华 +4 位作者 秦建强 余磊 艾鹤英 汪海仪 邱小忠 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期606-610,共5页

目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀... 目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。 展开更多

关键词 Sylgard 184 铸型 MATRIGEL 肌组织 反转录-聚合酶链式反应 免疫荧光 C2C12细胞

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五羟色胺-N-乙酰转移酶基因真核表达载体的构建表达及活性检测 被引量：1

2

作者 廖华 曹永英 +2 位作者 徐达传 邱小忠 余磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期656-659,共4页

目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导... 目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导入L6成肌细胞。倒置显微镜观察转化细胞体外存活、RT-PCR及Western blotting技术检测pTARGETTM-AANAT的基因表达产物及转化细胞的功能表达。结果酶切分析、DNA测序及凝胶电泳检测结果证实,pTARGETTM-AANAT真核表达载体构建成功。RT-PCR及Western blotting检测表明,转化后的L6细胞表达AANAT mRNA,细胞具备AANAT蛋白的表达能力。结论成功构建pTARGETTM-AANAT的真核表达载体,转化的L6细胞株能表达AANAT蛋白活性。 展开更多

关键词 五羟色胺-N-乙酰转移酶 L6细胞 pTARGET^TM载体 RT-PCR

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失神经萎缩肌组织成分对成肌细胞性能影响的实验研究 被引量：1

3

作者 廖华 徐达传 +2 位作者 邱小忠 余磊 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2008年第2期154-157,共4页

目的:探讨长期失神经萎缩骨骼肌组织成分对体外培养成肌细胞的性能影响。方法:①获取长期失神经支配肌萎缩模型大鼠的腓肠肌,无菌条件下清洗、剪碎、匀浆、过滤,收集上清液;②收集Schwann细胞的体外培养基;③体外培养C2C12成肌细胞系,... 目的:探讨长期失神经萎缩骨骼肌组织成分对体外培养成肌细胞的性能影响。方法:①获取长期失神经支配肌萎缩模型大鼠的腓肠肌,无菌条件下清洗、剪碎、匀浆、过滤,收集上清液;②收集Schwann细胞的体外培养基;③体外培养C2C12成肌细胞系,扩增传代并分组:A.对照组,常规培养,无任何处理因素;B.添加Schwann细胞培养基;C.添加萎缩肌匀浆液。倒置显微镜观察3组细胞的形态特征,免疫荧光检测C2C12细胞MyoD和Myogenin的差异表达。结果:倒置显微镜下,各组细胞贴壁良好,A、C组形态无差异,未见分化肌管;B组于培养48h后细胞变纤细,可见肌管形成。荧光染色证实,培养24h后,3组均出现MyoD阳性细胞,C组阳性细胞数量明显多于A、B组;72h时,3组均可见Myogenin阳性细胞,B组阳性细胞数量明显多于A组,C组阳性细胞数量稀少。结论:长期失神经萎缩肌组织成分能够促进成肌细胞的增殖与活化,但抑制活化成肌细胞的进一步分化成熟。 展开更多

关键词 失神经肌萎缩 C2C12成肌细胞 MYOD MYOGENIN

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松果体细胞微囊的组织相容性研究

4

作者 廖华 徐达传 +3 位作者 余磊 邱小忠 刘小静 黄美贤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期2027-2031,共5页

目的:制备松果体细胞微囊并进行动物移植实验,探讨松果体微囊与宿主体的组织相容性。方法: 游离并摘取乳鼠松果体,胰酶、胶原酶消化分离获取松果体细胞悬液,体外培养后进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海 藻酸钠(APA)微囊化处理,将囊化细胞与... 目的:制备松果体细胞微囊并进行动物移植实验,探讨松果体微囊与宿主体的组织相容性。方法: 游离并摘取乳鼠松果体,胰酶、胶原酶消化分离获取松果体细胞悬液,体外培养后进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海 藻酸钠(APA)微囊化处理,将囊化细胞与空囊植入大鼠体内(腹膜腔、肌间隙)。术后15、30 d回收微囊,采用形态学 观察、HE染色、细胞计数、高效液相色谱(HPLC)技术检测并分析回收囊的形态、囊内细胞活性、囊壁炎性浸润及纤维 化程度,从而判断APA囊膜在体内的组织相容性及其对松果体细胞的免疫保护效应。结果:微囊的腹腔回收率约为 85％,15 d回收囊大多囊壁完整,少数有破损,囊外粘附巨噬细胞。随植入时间的延长,炎性浸润逐渐加重,囊壁增 厚,同一时段微囊与空囊的回收率、囊壁纤维化程度无显著差异。检测证实,15 d回收微囊仍有褪黑素(MT)分泌功 能,但细胞功能迅速下降,30 d回收囊的MT检测呈阴性。结论:APA微囊有一定的组织相容性,对松果体细胞具备 免疫保护作用,囊内细胞生存期约为20 d左右,该时段内细胞能维持生物活性和MT分泌功能。 展开更多

关键词 松果体 APA微囊 移植 褪黑激素

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MC3T3-HA复合培养后的细胞凋亡检测

5

作者 宋辰刚 邱小忠 +3 位作者 吴刚 余磊 赖桂华 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2007年第5期567-570,共4页

目的:探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)压片材料对小鼠MC3T3成骨细胞凋亡的影响,提供一种方便可行的组压片材料的生物相容性检测方法。方法:小鼠MC3T3成骨细胞株接种在HA压片材料上,应用光学显微镜和PI-Hoechst33342双染色荧光显微镜... 目的:探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)压片材料对小鼠MC3T3成骨细胞凋亡的影响,提供一种方便可行的组压片材料的生物相容性检测方法。方法:小鼠MC3T3成骨细胞株接种在HA压片材料上,应用光学显微镜和PI-Hoechst33342双染色荧光显微镜观察细胞,采用RT-PCR方法分析HA对Id2(Inhibitor of differentiation 2,分化抑制因子2)和OPN(osteopontin,骨桥蛋白)等基因表达的影响。结果:HA压片材料组MC3T3细胞凋亡率(78.7%)显著高于正常对照组(24.6%)(t’=28.1,P=0.000)。HA压片材料双荧光染色可以直接检测种子细胞的凋亡。结论:HA压片可促进小鼠MC3T3成骨细胞凋亡。 展开更多

关键词 羟基磷灰石 小鼠MC3T3成骨细胞 凋亡

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Notch信号通路在骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的动态表达特征 被引量：13

6

作者 柳柯 刘桂英 +2 位作者 杨洋 吴章林 黄文华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期308-313,317,共7页

目的探寻Notch信号通路对BM-MSCs向肝细胞分化的影响机制。方法诱导BM-MSCs分化成肝细胞。当BM-MSCs分化至第0、7、11、21天时,反向斑点杂交实验检测Notch信号通路中的关键基因的mRNA表达水平。建立加入Jagged1上调信号通路的对照组RT-... 目的探寻Notch信号通路对BM-MSCs向肝细胞分化的影响机制。方法诱导BM-MSCs分化成肝细胞。当BM-MSCs分化至第0、7、11、21天时,反向斑点杂交实验检测Notch信号通路中的关键基因的mRNA表达水平。建立加入Jagged1上调信号通路的对照组RT-PCR技术绘制出BM-MSCs分化状态分子表达谱与正常情况下对比。结果 BM-MSCs分化进行至第21天,反向斑点杂交检测到的关键基因的mRNA表达水平低于第0、7、11天。加入Jagged1后Notch信号通路被激活,导致下游基因Hes1和Hey1的被表达。BM-MSCs分化过程中Albumin未被检测到。结论本研究的结果表明Notch信号通路在BMMSCs分化成肝细胞过程进行调控是必需的,但是分化必须在信号通路下调的情况下才能进行下去。 展开更多

关键词 成体干细胞 间充在干细胞 定向分化 肝细胞 NOTCH信号通路

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钙调蛋白对骨骼肌炎症的干扰效应 被引量：4

7

作者 史丹丹 曹永英 +8 位作者 曹标 刘幸卉 术蓉 谷瑞彩 肖将尉 丁茂超 黄涛 郭梦霞 廖华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期756-761,共6页

目的探讨钙调蛋白(Calmodulin,CaM)对急性骨骼肌炎症反应的影响。方法心毒素(Cardiotoxin,CTX)肌内注射,诱导C57BL/6小鼠胫骨前肌(tibialis anterior,TA)急性损伤。肌损伤小鼠腹腔注射钙调蛋白抑制剂R24571或激动剂CALP1。分别检测TA肌... 目的探讨钙调蛋白(Calmodulin,CaM)对急性骨骼肌炎症反应的影响。方法心毒素(Cardiotoxin,CTX)肌内注射,诱导C57BL/6小鼠胫骨前肌(tibialis anterior,TA)急性损伤。肌损伤小鼠腹腔注射钙调蛋白抑制剂R24571或激动剂CALP1。分别检测TA肌组织自身抗原和TLRs表达以及单核/巨噬细胞的肌内浸润程度。结果 CTX注射导致急性肌损伤,TA肌内出现大量的炎性渗出,并伴随肌纤维坏死。损伤肌组织内CaM、自身抗原(Mi-2,HRS和Ku70)以及TLR3表达上调。较之CTX损伤组,CALP1处理导致损伤TA肌内单核/巨噬细胞数量增多,肌内自身抗原和TLR3 mRNA和蛋白水平上调,R24571则减少肌内炎性浸润并下调上述炎性介质。结论 CaM信号参与介导急性骨骼肌炎症反应。 展开更多

关键词 钙调蛋白 肌损伤 炎症 自身抗原

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不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性 被引量：3

8

作者 王齐 廖华 +4 位作者 秦建强 余磊 邱小忠 于巧莲 艾鹤英 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期235-239,共5页

目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处... 目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理：I型胶原包被（B组）、层黏连蛋白包被（C组）、多聚赖氨酸包被（D组）;未经包被（E组）,每组共6个样本。在不同基质材料修饰的Sylgard184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术（FCM）检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达。结果Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Sylagard184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组（P〈0.05）。结论经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达。 展开更多

关键词 细胞基质 Sylgard184 相容性 流术细胞术 C2C12细胞

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急性肌损伤炎症反应及其转录分析 被引量：3

9

作者 杨同群 张谦 +4 位作者 耿喜林 胡旭昌 丁明聪 黄美贤 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期171-175,共5页

目的 RNA芯片转录分析骨骼肌损伤前后炎症/免疫相关基因的表达改变,为肌损伤治疗、肌组织炎性肿胀的预防和处理提供相关的分子信息。方法机械挤压法制备B6小鼠腓肠肌损伤模型,组化及免疫荧光检测肌损伤的程度和过程。RNA芯片转录检测、... 目的 RNA芯片转录分析骨骼肌损伤前后炎症/免疫相关基因的表达改变,为肌损伤治疗、肌组织炎性肿胀的预防和处理提供相关的分子信息。方法机械挤压法制备B6小鼠腓肠肌损伤模型,组化及免疫荧光检测肌损伤的程度和过程。RNA芯片转录检测、对比分析肌损伤前后炎症/免疫相关基因的表达改变。结果持续2次的挤压处理导致严重的腓肠肌损伤,肌组织肿胀、炎性渗出明显、肌纤维坏死（2-4 d）并逐渐出现再生的中央核细胞（7-10 d）。芯片检测发现在39429个检测探针中,3494个基因因骨骼肌损伤而呈现显著的表达水平改变（P〈0.01）,319个基因的表达改变超过10倍。富集率最高的gene ontology（GO）主要涉及免疫过程、防御反应和免疫反应。大部分基因在损伤后7-10 d趋于正常水平,41个基因在肌损伤后期仍持续上调,于伤后7 d或10 d达最高水平。结论急性肌损伤炎症反应具有瞬时性,属于自限性炎症。再生期持续上调的基因可能参与肌损伤后期的抗炎效应,以避免持续、反复、破环性的骨骼肌炎症。 展开更多

关键词 骨骼肌损伤 转录 基因 炎症

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体外炎性环境下小鼠成肌细胞/分化肌管的免疫特性研究 被引量：2

10

作者 术蓉 曹永英 +6 位作者 史丹丹 谷瑞彩 肖将尉 丁茂超 黄涛 郭梦霞 廖华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期501-506,共6页

目的对体外炎性环境下小鼠成肌细胞/分化肌管的免疫学特性进行检测,分析其是否具备抗原呈递功能。方法用IFN-γ刺激小鼠成肌细胞(C_2C_(12))及马血清诱导分化后的肌管,通过免疫荧光染色、q-PCR、Western blot、流式细胞术检测细胞表面H-... 目的对体外炎性环境下小鼠成肌细胞/分化肌管的免疫学特性进行检测,分析其是否具备抗原呈递功能。方法用IFN-γ刺激小鼠成肌细胞(C_2C_(12))及马血清诱导分化后的肌管,通过免疫荧光染色、q-PCR、Western blot、流式细胞术检测细胞表面H-2k^b、MHC-II、TLR3及相关细胞因子水平的改变。结果 IFN-γ刺激后,免疫荧光染色、q-PCR、Western blot均检测到成肌细胞/分化肌管表面MHC分子表达上调,Western blot检测到TLR3表达上调,q-PCR检测到细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-18、MCP-1及TGF-β表达上调。结论在炎性条件下,成肌细胞/分化肌管具备炎性细胞表征,具备抗原呈递功能。 展开更多

关键词 C2C(12) 肌管 IFN-Γ 抗原呈递

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离子硅对成骨细胞NF-kappa B核内转录因子活性的影响 被引量：2

11

作者 邱小忠 王永魁 +2 位作者 王乐禹 余磊 王国保 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第1期84-86,90,共4页

目的研究离子硅对体外培养的成骨细胞NF-kappa B核转录因子活性的影响。方法分别用终浓度为1 mmol/L和2 mmol/L离子硅(SiO32)-处理MC3T3-E1成骨细胞,处理时间分别为6、12、24和48 h,设置对照组(不加处理因素);采用流式细胞术检测细胞周... 目的研究离子硅对体外培养的成骨细胞NF-kappa B核转录因子活性的影响。方法分别用终浓度为1 mmol/L和2 mmol/L离子硅(SiO32)-处理MC3T3-E1成骨细胞,处理时间分别为6、12、24和48 h,设置对照组(不加处理因素);采用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞的增殖指数;Westernblotting方法检测NF-kappa B信号通路的相关蛋白表达量及其变化。结果流式细胞术结果显示,与对照组相比,1 mmol/L浓度的离子硅处理24 h组和48 h组,MC3T3-E1细胞增殖明显;Western blot结果显示,1 mmol/L浓度的离子硅促进成骨细胞增殖与p-NF-kappa B表达上升密切相关。结论骨材料中释放的微量的硅不会引起成骨细胞损伤,相反,微量的硅酸盐可能通过激活NF-kappa B诱导成骨细胞增殖。 展开更多

关键词 硅 生物材料 骨修复 成骨细胞 NF-KAPPA B

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IL-1β促进Schwann细胞增殖及分泌NGF的研究 被引量：1

12

作者 于巧莲 秦建强 +4 位作者 余磊 邱小忠 廖华 王齐 朴英杰 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期319-324,共6页

为观察白介素-1β(IL-1β)对Schwann细胞增殖及分泌神经生长因子(NGF)的影响,本研究取3d龄的大鼠坐骨神经纯化培养Schwann细胞,然后分4组进行处理。处理方法为:A组加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,B组仅在纯化后第1d向培养基中加入2.... 为观察白介素-1β(IL-1β)对Schwann细胞增殖及分泌神经生长因子(NGF)的影响,本研究取3d龄的大鼠坐骨神经纯化培养Schwann细胞,然后分4组进行处理。处理方法为:A组加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,B组仅在纯化后第1d向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,C组每天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,D组隔天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,分别培养5d。倒置显微镜下观察Schwann细胞的形态,用抗S-100蛋白免疫组化鉴定Schwann细胞,经流式细胞仪(FCM)检测细胞的分裂增殖情况,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测NGFmRNA表达的变化,酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基中NGF蛋白的表达量。结果显示:D组Schwann细胞增殖率、NGFmRNA合成量和NGF蛋白表达量均显著高于其他三组(P<0.05)。此结果说明IL-1β能够促进Schwann细胞的分裂增殖,并且促进胞内NGFmRNA的合成及胞外NGF的分泌,其作用持续时间大约为2d。 展开更多

关键词 白介素-1Β SCHWANN细胞 神经生长因子 周围神经 大鼠

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PNIPAM温敏水凝胶诱导小鼠骨骼肌慢性炎症 被引量：1

13

作者 术蓉 张任飞 +5 位作者 史丹丹 谷瑞彩 肖将尉 刘幸卉 曹标 廖华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期935-940,共6页

目的探讨肌内注射PNIPAM温敏水凝胶诱导小鼠骨骼肌慢性炎症的可行性。方法将PNIPAM或其与重组人骨骼肌C蛋白的混合物注入C57BL/6小鼠胫骨前肌(TA),于注射后15、30及60 d分别检测TA肌内单核/巨嗜细胞渗出、肌肉自身抗原表达、MHC-I表达... 目的探讨肌内注射PNIPAM温敏水凝胶诱导小鼠骨骼肌慢性炎症的可行性。方法将PNIPAM或其与重组人骨骼肌C蛋白的混合物注入C57BL/6小鼠胫骨前肌(TA),于注射后15、30及60 d分别检测TA肌内单核/巨嗜细胞渗出、肌肉自身抗原表达、MHC-I表达及肌内CD8+T细胞浸润。结果 PNIPAM温敏水凝胶可诱导TA肌内炎症持续达60 d,炎症反应的高峰出现于注射后30 d,随后逐渐减退。PNIPAM水凝胶与C蛋白混合液注射所诱发的肌内炎症较单纯的PNIPAM或C蛋白注射诱发的炎症反应更持久。免疫荧光分析证实,PNIPAM水凝胶注射后可见TA肌内出现CD8+T细胞浸润,部分新生肌纤维表达MHC-I。结论 PNIPAM温敏水凝胶肌内注射可诱导小鼠慢性骨骼肌损伤及炎症反应。 展开更多

关键词 PNIPAM水凝胶 骨骼肌 炎症 小鼠

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壳聚糖/二氧化硅/羟基磷灰石杂化材料的体内反应性研究 被引量：2

14

作者 郭梦霞 马永能 +3 位作者 董怡帆 肖将尉 赵娜茹 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期33-37,共5页

目的分析壳聚糖/二氧化硅（CS-SiO2）及壳聚糖/二氧化硅/羟基磷灰石（CS-SiO2-HA）杂化材料的体内反应性。方法分别将CS-SiO2和CS-SiO2-HA杂化材料植入C57BL/6小鼠腓肠肌内,设置对照组（腓肠肌钝性分离后直接缝合）,分别于植入术后14、2... 目的分析壳聚糖/二氧化硅（CS-SiO2）及壳聚糖/二氧化硅/羟基磷灰石（CS-SiO2-HA）杂化材料的体内反应性。方法分别将CS-SiO2和CS-SiO2-HA杂化材料植入C57BL/6小鼠腓肠肌内,设置对照组（腓肠肌钝性分离后直接缝合）,分别于植入术后14、28、42、56 d摘取包含植入物的腓肠肌,冰冻切片,HE染色及免疫荧光观察材料诱发的局部炎症、肌纤维性坏死与再生。结果组织学观察可见,肌内植入初期（14 d）,CS-SiO2及CS-SiO2-HA杂化物均诱发炎症细胞渗出,以CS-SiO2-HA组的炎性渗出更为显著。28 d后渗出细胞数量开始下降;56 d时,CS-SiO2组的肌内炎症反应几乎消失,但CS-SiO2-HA仍可见少量渗出。免疫荧光的检测进一步证实,CS-SiO2-HA杂化物较CS-SiO2导致更为严重的肌纤维坏死,所触发的单核/巨噬细胞等炎性渗出范围更广、持续时间久。CS-SiO2及CS-SiO2-HA杂化物移植2月后,肌内炎症基本消失,肌纤维修复完成。结论 CS-SiO2-HA和CS-SiO2杂化材料在体内均可诱发短期、局部的炎症反应,CS-SiO2的体内相容性优于CS-SiO2-HA杂化物。 展开更多

关键词 壳聚糖 二氧化硅 羟基磷灰石 炎症 杂化

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骨骼肌成肌干细胞体外三维与平面培养的比较研究 被引量：1

15

作者 艾鹤英 秦建强 +1 位作者 余磊 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2010年第2期198-202,共5页

目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,R... 目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,RT-PCR和免疫荧光检测。结果Sylgard 184铸槽表面的C2C12细胞诱导分化5d出现多核、极性肌管,17d时肌管增粗成熟、极性平行,融合形成肌组织类似物,厚0.15mm,有自主收缩性;扫描电镜见肌管之间排列紧密、重叠,具有三维性;而平面培养肌管小而排列紊乱。RT-PCR表明三维培养的MyoD、Myogenin mRNA表达更为显著;Myogenin、Desmin、F-actin、MHC和nAChR蛋白检测显示,极性肌管内荧光蛋白的表达更密集。结论三维培养更有利于成肌细胞的体外极性分化和肌管间细胞连接的形成,分化肌管的存活时间较长,有利于成肌分化因子和收缩蛋白的表达,是骨骼肌的发生发育、应力加载和骨骼肌肌病良好的体外研究模型。 展开更多

关键词 C2C12细胞 Sylgard184 三维培养 平面培养

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NO抑制体外IFN-γ刺激成肌细胞/肌管NLRP3炎性小体活化 被引量：1

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作者 刘幸卉 张任飞 +5 位作者 史丹丹 曹标 术蓉 谷瑞彩 肖将尉 廖华 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第3期331-336,共6页

目的观察一氧化氮供体硝普钠(SNP)、一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对体外炎性培养(IFN-γ刺激)成肌细胞/肌管NLRP3炎症小体活化的影响。方法利用IFN-γ刺激小鼠C2C12成肌细胞/肌管,q PCR和Western blot分析炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1... 目的观察一氧化氮供体硝普钠(SNP)、一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对体外炎性培养(IFN-γ刺激)成肌细胞/肌管NLRP3炎症小体活化的影响。方法利用IFN-γ刺激小鼠C2C12成肌细胞/肌管,q PCR和Western blot分析炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)的形成及活化、ELISA检测细胞培养上清IL-1β的分泌。进一步利用L-NAME和SNP处理IFN-γ诱导的C2C12细胞/肌管,分析炎性小体的形成、活化及IL-1β的分泌。结果 IFN-γ刺激培养后,成肌细胞/肌管中NLRP3、ASC和mature-caspase-1表达水平上调(P<0.01)。较之未刺激的细胞,IFN-γ诱导会显著上调成肌细胞/肌管培养基中的IL-1β浓度(P<0.01)。SNP处理后6 h,分化肌管(IFN-γ刺激48 h)内炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)mRNA和蛋白水平较单纯刺激细胞显著下调(P<0.01),L-NAME则上调ASC、NLRP3、caspase-1表达水平(P<0.05)。与上述结果一致,SNP和L-NAME处理同时分别下调或上调培养基中IL-1β浓度(P<0.05)。结论在炎性条件下,成肌细胞/肌管具备合成并活化NLRP3炎性小体的能力。NO对炎性小体的形成及活化有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 NO C2C12细胞 炎性小体

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周围神经修复中Schwann细胞与轴突间作用的分子机制 被引量：1

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作者 于巧莲 秦建强 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期103-107,共5页

关键词 SCHWANN细胞 轴突生长 修复过程 分子机制 周围神经 间作 神经营养因子 分裂增殖

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炎性因子对C_2C_(12)细胞、MC-3T3-E1细胞成骨、成肌相关基因表达的影响 被引量：2

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作者 张翔 王玉筵 +1 位作者 邱小忠 欧阳钧 《广州医学院学报》 2008年第5期5-9,共5页

目的:探讨炎性因子对成肌和成骨细胞成肌、成骨相关基因表达的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞上清液及白介素(IL)1β处理C2C12细胞及MC-3T3-E1细胞,观察炎性因子对两种细胞成骨、成肌相关基因的表达的影响。结果:小鼠腹腔巨噬细胞上清液促... 目的:探讨炎性因子对成肌和成骨细胞成肌、成骨相关基因表达的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞上清液及白介素(IL)1β处理C2C12细胞及MC-3T3-E1细胞,观察炎性因子对两种细胞成骨、成肌相关基因的表达的影响。结果:小鼠腹腔巨噬细胞上清液促进C2C12细胞MyoD、Myogenin的表达,差别均有统计学意义(P<0.001);促进MC-3T3-E1细胞碱性磷酸酶(ALP)的表达,吸光度比值上升为原来的3倍多,差别有统计学意义(P<0.001)。IL-1β单独对C2C12细胞和MC-3T3-E1细胞的成肌、成骨因子的表达影响无统计学意义(P>0.05)。结论:巨噬细胞上清液可上调MC-3T3-E1细胞的成骨相关基因表达;上调C2C12细胞的成肌相关基因表达。IL-1β单独不能对C2C12细胞和MC-3T3-E1细胞的成肌、成骨基因的表达产生影响。 展开更多

关键词 肌炎 骨化性 炎症趋化因子类 成肌细胞 成骨细胞 碱性磷酸酶 MYOD MYOGENIN

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丹参诱导骨髓基质细胞神经元样细胞分化的microRNA-128路径

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作者 黄涛 张志强 +4 位作者 余磊 谢才军 祝栋安 彭子壮 陈捷晗 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期427-431,共5页

目的研究microRNA-128在丹参制剂诱导大鼠骨髓基质细胞（bone marrow strowal cells，BMSCs）向神经元样细胞分化过程中的调控作用。方法培养鉴定大鼠BMSCs，应用反义寡居核苷酸转染技术（Lipofectamin 2000）转染microRNA-128 inhibit... 目的研究microRNA-128在丹参制剂诱导大鼠骨髓基质细胞（bone marrow strowal cells，BMSCs）向神经元样细胞分化过程中的调控作用。方法培养鉴定大鼠BMSCs，应用反义寡居核苷酸转染技术（Lipofectamin 2000）转染microRNA-128 inhibitors于BMSCs；取转染和未转染的BMSCs，待细胞增殖到60％～70％融合时进行预诱导分化，预诱导24h后，进行诱导分化；根据处理方式不同分为4组：未诱导组（A组），丹参制剂诱导组（B组），转染未诱导组（C组），转染诱导组（D组）。流式细胞术鉴定BMSCs；qPCR检测microRNA-128及神经元特异性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）、微管蛋白（β3-tubulin）的mRNA表达；Westernblot检测NSE、Nestin和β3-tubulin的蛋白表达。结果BMSCs流式细胞检测CD29和CD90双阳性率达99．17％，CD11b和CD45双阴性率达99．21％；丹参制剂诱导及microRNA-128 inhibitors转染后，细胞microRNA-128表达量显著降低（P〈0．05）；诱导与未诱导组，转染与未转染组比较，NSE、Nestin和β3-tubulin的mRNA和蛋白表达均显著升高（P〈0．05）。结论丹参制剂能够抑制BMSCs的microRNA-128表达，进而影响BMSCs神经分化相关蛋白的表达，促进BMSCs向神经元样细胞分化。 展开更多

关键词 丹参制剂 骨髓基质细胞 microRNA-128 神经元 细胞分化

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羟基磷灰石形貌对RAW264.7细胞破骨分化影响研究

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作者 曾慧君 曹标 +5 位作者 刘幸卉 陈荣 史丹丹 术蓉 欧阳钧 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第2期170-173,共4页

目的分析羟基磷灰石(HAp)不同形貌对小鼠单核RAW264.7细胞破骨分化性能的影响。方法采用水热合成及pH调节的方法获得不同形貌羟基磷灰石微米颗粒,通过扫描电子显微镜(SEM)表征材料形貌。将不同形貌HAp与RAW264.7细胞共培养,通过Live/Dea... 目的分析羟基磷灰石(HAp)不同形貌对小鼠单核RAW264.7细胞破骨分化性能的影响。方法采用水热合成及pH调节的方法获得不同形貌羟基磷灰石微米颗粒,通过扫描电子显微镜(SEM)表征材料形貌。将不同形貌HAp与RAW264.7细胞共培养,通过Live/Dead活性染色检测HAp对细胞活性有无影响;并在RANKL破骨诱导因子的作用下通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、实时荧光定量(qRT-PCR)分析不同形貌HAp对RAW264.7细胞破骨分化的影响。结果 24h Live/Dead活性染色证实微棒与微球HAp均具有良好的生物相容性。qRT-PCR结果表明,两种形貌HAp均抑制RAW264.7细胞的破骨分化,而相对于微球HAp,微棒HAp抑制作用较显著。结论羟基磷灰石形貌的差异能够引起RAW264.7破骨分化性能的差异表达。 展开更多

关键词 羟基磷灰石 形貌 RAW264 7 破骨分化

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