斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究 被引量：12

1

作者 孔繁德 黄印尧 +3 位作者 王生育 张春安 林开正 陆承平 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期36-40,共5页

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5... 应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。 展开更多

关键词 斑点免疫金渗滤法 猪生殖与呼吸综合征 抗体 检测

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抗人DcR3单克隆抗体的制备、鉴定及应用 被引量：8

2

作者 刘瑞振 张长弓 +4 位作者 何琼 苏金华 陈彩霞 陈福 庄国洪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期34-38,共5页

目的制备抗DcR3单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性,并应用于ELISA、Western blot、Flowcytometry(FCM)检测。方法以纯化的可溶性DcR3(sDcR3)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DcR3 mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DcR3mAb的亚类。用E... 目的制备抗DcR3单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性,并应用于ELISA、Western blot、Flowcytometry(FCM)检测。方法以纯化的可溶性DcR3(sDcR3)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DcR3 mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DcR3mAb的亚类。用ELISA方法测定抗DcR3 mAb与sDcR3结合的特性,SDS-PAGE鉴定抗DcR3 mAb与SW480细胞上清中DcR3结合的特性,以鉴定mAb的特性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。Western blot检测mAb的特异性及应用,并用所获抗DcR3单克隆抗体(mAb)通过流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结果获得4株可分泌DcR3 mAb的杂交瘤细胞系ZZ-393、ZZ-394、ZZ-151和ZZ-268。其中DcR3 mAb ZZ-268(下文简称为ZZ-268)的Ig亚类为IgG1(κ型);腹水效价为1×10-5;亲和常数为1.28×109水平;ZZ-268和ZZ-151可识别与其他2种抗体不同的抗原表位;Western blot证实,获得的ZZ-268可特异性地识别DcR3;通过流式细胞术可敏感地检测到不同肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结论获得4株抗DcR3的mAb,其中ZZ-268效价高、特异性强,将此抗体用于膜DcR3与sDcR3的检测分析。 展开更多

关键词 DCR3 单克隆抗体 制备

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检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制 被引量：4

3

作者 程龙飞 张长弓 +8 位作者 傅秋玲 何琼 贾志娟 陈慧敏 傅光华 万春和 林群群 刘荣昌 黄瑜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期722-726,共5页

为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯... 为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯化的MAb配对,制成检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条。特异性试验表明,鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的检测结果均为阳性,猪细小病毒、1型鸭甲肝病毒、坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒、H9N2亚型禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒等的检测结果均为阴性。该方法对鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的最低检出量分别为10^(4.7) ELD50/mL、10^(4.7)ELD50/mL和10^(5.7) ELD50/mL。重复性试验良好。对临床粪便样品的检测,该方法比PCR方法简单快速,但是存在漏检的情况。上述结果表明,本实验建立的方法可用于水禽源细小病毒病的初步快速筛查。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 新型番鸭细小病毒 胶体金试纸条 单克隆抗体

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沙门氏菌快速检测试纸条的研制与应用 被引量：5

4

作者 陈琼 孔繁德 +2 位作者 张长弓 彭海滨 徐淑菲 《福建畜牧兽医》 2006年第5期6-8,共3页

应用提纯的兔抗沙门氏菌IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线，羊抗兔IgG包被对照线，然后用胶体金标记纯化的兔抗沙门氏菌IgG-1建立了检测沙门氏菌的快速检测试纸条。该法通过胶体金标记兔抗沙门氏菌抗体直接显色，阳性者检测线出现红色线，... 应用提纯的兔抗沙门氏菌IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线，羊抗兔IgG包被对照线，然后用胶体金标记纯化的兔抗沙门氏菌IgG-1建立了检测沙门氏菌的快速检测试纸条。该法通过胶体金标记兔抗沙门氏菌抗体直接显色，阳性者检测线出现红色线，整个试验过程仅需10～15min即可判断结果．与大肠杆菌、枸橼酸杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌等常见肠道菌不发生交叉反应．与沙门氏菌的最低检测量为2．3×105cfu／ml。试纸条4℃或37℃存放9个月，检测结果稳定． 展开更多

关键词 免疫层析 胶体金 检测 沙门氏菌

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猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法的建立和应用 被引量：4

5

作者 黄印尧 孔繁德 +2 位作者 张长弓 颜江华 方莹 《检验检疫科学》 2004年第B12期50-52,共3页

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金标快速检测试纸法”,该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒同时对16份猪血液或血清进行抗体水平检测,符合率达... 应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金标快速检测试纸法”,该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒同时对16份猪血液或血清进行抗体水平检测,符合率达100%。同时对100份猪血液和对应血清进行检测,结果也相同。试验结果显示,本法与ELISA一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,而本方法不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 免疫金标 快速检测试纸法 急性传染病

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猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法 被引量：3

6

作者 黄印尧 张长弓 +2 位作者 孔繁德 方莹 颜江华 《福建畜牧兽医》 2004年第3期8-10,共3页

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合 ,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法” ,用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒 ,同时对 1 6份猪血液或血清进行抗体水平检测 ,... 应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合 ,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法” ,用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒 ,同时对 1 6份猪血液或血清进行抗体水平检测 ,符合率达 1 0 0 %。同时使用金标法对 1 0 0份猪血液和对应血清进行检测 ,结果也相同。试验结果显示 ,金标法与ELISA一样 ,具有微量、特异、准确等优点 ,且操作简易 ,而金标法不需要任何仪器 ,检测时间短 ,结果直观 ,容易判定 ,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病 抗体 免疫金标 检测试纸法

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TIPE2过表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎滑膜成纤维样细胞及分析 被引量：3

7

作者 石春燕 何琼 +1 位作者 杨晶晶 庄国洪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1240-1243,1253,共5页

目的:通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎(AA)成纤维样滑膜细胞(FLS),体外研究AA的发病中TIPE2对DR5介导细胞凋亡的作用。方法:应用MIGR1/TIPE2+/+表达质粒,经脂质体法导入AA-FLS细胞中,转染72小时后,荧光显微镜检测质粒自带GFP基... 目的:通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎(AA)成纤维样滑膜细胞(FLS),体外研究AA的发病中TIPE2对DR5介导细胞凋亡的作用。方法:应用MIGR1/TIPE2+/+表达质粒,经脂质体法导入AA-FLS细胞中,转染72小时后,荧光显微镜检测质粒自带GFP基因的表达情况确认转染效率,以未作处理的AA-FLS为对照组,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIPE2 mRNA的表达,用Western blot法检测TIPE2蛋白的表达变化,MTT法以及流式细胞术检测抗DR5功能性单链抗体ZF1对两组细胞生长的影响。结果:成功获得荧光强度90%的TIPE2过表达AA-FLS细胞,TIPE2 mRNA及蛋白表达显著提高。抗DR5单链抗体ZF1对TIPE2+/+的FLS组细胞具有明显生长抑制及凋亡诱导作用,与不作处理的FLS组相比差异显著。结论:TIPE2+/+表达质粒明显提升AA-FLS的TIPE2蛋白表达水平,TIPE2对DR5介导细胞凋亡有重要作用。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 佐剂型关节炎 成纤维样滑膜细胞 DR5 TIPE2

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禽流感抗原快速检测试纸条的研究 被引量：4

8

作者 沈浩龙 张长弓 +4 位作者 黄印尧 金颜辉 余谦 孔繁德 庄雪梅 《福建畜牧兽医》 2006年第6期11-13,共3页

应用胶体金标记技术(Immunogold Labelling Technique)与免疫层析技术,在玻璃纤维膜和硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金AIV单克隆抗体(Ab2)偶联物和AIV单克隆抗体(Ab2)-羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成禽流感抗原检测试纸条... 应用胶体金标记技术(Immunogold Labelling Technique)与免疫层析技术,在玻璃纤维膜和硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金AIV单克隆抗体(Ab2)偶联物和AIV单克隆抗体(Ab2)-羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成禽流感抗原检测试纸条。用该试纸检测“AIV琼扩抗原”、“AIV H5N1抗原”、“AIV H7N1抗原”、“AIV H9N1抗原”均显阳性,而对禽源性的其它病毒抗原均显阴性;本试纸与韩国产“禽流感检测试纸条”同时检测相同的样品,结果完全一致,且具有很好的线性(敏感度),是一种微量、特异、快速、简便和结果容易判定的新的检测方法,可作为检测机构和养禽场检测初筛禽流感时使用。 展开更多

关键词 禽流感 胶体金试纸 胶体金标记技术 免疫层析技术

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猪伪狂犬病血清抗体两种检测方法的比较 被引量：1

9

作者 王生育 张长弓 +1 位作者 孔繁德 黄印尧 《福建畜牧兽医》 2004年第4期7-8,共2页

应用酶联免疫吸附试验和免疫金标检测试纸两种方法 ,同时对 64头份猪血清样品进行猪伪狂犬病血清抗体检测 ,试验结果显示 :两种方法检测的 64头份猪血清中伪狂犬病抗体阳性率均为 62 5 % (40 / 64) ,符合率达到 1 0 0 %。两种方法都具... 应用酶联免疫吸附试验和免疫金标检测试纸两种方法 ,同时对 64头份猪血清样品进行猪伪狂犬病血清抗体检测 ,试验结果显示 :两种方法检测的 64头份猪血清中伪狂犬病抗体阳性率均为 62 5 % (40 / 64) ,符合率达到 1 0 0 %。两种方法都具有微量、特异、准确的优点。前者需要用酶标仪等仪器 ,试验时间相对较长 ,成本高 ,但能用准确的数字表达抗体水平 ;后者不需要任何仪器设备 ,试验时间短 ,成本低 ,适用于基层兽医站、养殖场使用 ,以及大面积开展猪伪狂犬病抗体检测的使用。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病 血清抗体 检测方法 症状

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克伦特罗的CLIA分析试剂盒的研制

10

作者 沈浩龙 张长弓 +5 位作者 陈巧钦 江良振 庄晓勇 黄江山 郭书林 黄印尧 《福建农业学报》 CAS 2013年第10期1039-1044,共6页

通过制备克伦特罗（Clenbuterol，CL）人工抗原获得高活性抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记CL抗原，以鲁米诺（luminol）为发光底物，建立直接竞争法检测分析盐酸克伦特罗，并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数... 通过制备克伦特罗（Clenbuterol，CL）人工抗原获得高活性抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记CL抗原，以鲁米诺（luminol）为发光底物，建立直接竞争法检测分析盐酸克伦特罗，并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数进行优化，成功研制出化学发光法检测CL试剂盒。该方法的线性检测范围0.1~8.1 ng·mL-1，线性相关系数r=0.996，IC50值为0.607 ng·mL-1；理论检测限小于0.1 ng·mL-1；批内变异系数6.76%~8.31%；批间变异系数7.4%；回收率（90±15）%，与莱克多巴胺等其他β-激动剂不发生交叉反应。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 CLIA 试剂盒

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莱克多巴胺CLIA分析试剂盒的研制

11

作者 陈巧钦 江良振 +6 位作者 庄晓勇 沈浩龙 张长弓 何琼 张志刚 郭书林 黄印尧 《福建畜牧兽医》 2014年第2期1-5,共5页

通过制备莱克多巴胺-牛血清白蛋白偶联物（Ractopamine-BSA, RAC-BSA）人工抗原，制备并获得高活性单克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记RAC抗原，以鲁米诺（luminol）为发光底物，建立直接竞争法检测分析莱克多巴胺，并对包被液、... 通过制备莱克多巴胺-牛血清白蛋白偶联物（Ractopamine-BSA, RAC-BSA）人工抗原，制备并获得高活性单克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记RAC抗原，以鲁米诺（luminol）为发光底物，建立直接竞争法检测分析莱克多巴胺，并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数进行优化，成功研制出化学发光法检测RAC试剂盒。该方法的线性检测范围可达0.1～10.0 ng/mL，线性相关系数r=0.998，IC50值为0.763 ng/mL；理论检测限小于0.1 ng/mL；批内变异系数7.62%~8.65%；批间变异系数8.15%；回收率在85%±15%，与常见的克伦特罗等其他β-激动剂不发生交叉反应。 展开更多

关键词 莱克多巴胺CLIA试剂盒

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乙型肝炎病毒表面抗原化学发光免疫诊断试剂的研制

12

作者 徐恩良 张长弓 +4 位作者 江良振 张伟 吴凤霞 刘萍 郑惠红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期370-372,共3页

目的 研制高敏感度、宽线性,且能定量的HBsAg化学发光免疫诊断试剂。方法 将碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)用改良过碘酸钠法标记抗-HBs单抗、山羊抗-HBs多抗,经亲和层析纯化用于制备固相包被板;国家标准品标定HBsAg校准品,优化... 目的 研制高敏感度、宽线性,且能定量的HBsAg化学发光免疫诊断试剂。方法 将碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)用改良过碘酸钠法标记抗-HBs单抗、山羊抗-HBs多抗,经亲和层析纯化用于制备固相包被板;国家标准品标定HBsAg校准品,优化反应条件,建立HBsAg双抗体夹心一步法检测试剂。结果 试剂灵敏度adr<0.2ng/ml,adw<0.5ng/ml,ay<0.5ng/ml,23份HBsAg阴性Pannel符合率100％;批内CV3％～4.04％,批间CV9.47％～12.5％;准确率91,9％～110.4％;检测限0.023ng/ml;0.1～200ng/ml范围线性相关系数r=0.999 1;与EIA试剂对比分析相对灵敏度100％,相对特异性99.03％;37℃放置12d稳定性与2～8℃存放无异。结论 该HBsAg化学发光免疫诊断试剂适合于临床诊断应用。 展开更多

关键词 化学发光免疫分析 乙型肝炎病毒 表面抗原 诊断试剂

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