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温补脾肾经验方治疗视神经脊髓炎谱系疾病作用机制的网络药理学分析
1
作者 宫玉霜 付业繁 +7 位作者 许会静 郭健 相琳 胡睿 樊睿 王捷 李淼 孙美艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期261-271,共11页
目的:通过网络药理学分析和动物实验探讨温补脾肾经验方(TSKEP)治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的潜在作用靶点和信号通路,为治疗NMOSD提供理论依据。方法:采用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)筛选TSKEP的化合物和靶点,通过Gend... 目的:通过网络药理学分析和动物实验探讨温补脾肾经验方(TSKEP)治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的潜在作用靶点和信号通路,为治疗NMOSD提供理论依据。方法:采用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)筛选TSKEP的化合物和靶点,通过GendCard等数据库确定NMOSD的相关靶点基因;构建化合物-靶点网络确定核心化合物;利用STRING数据库和Cytoscape 3.6.0软件中的Network Analyzer插件获得蛋白-蛋白互作(PPI)网络的拓扑参数并识别核心靶点;利用OmicShare平台对核心靶点进行基因本体论(GO)功能注释分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析并构建靶点-通路网络,以识别关键的生物过程和信号通路;基于AutoDock软件对核心化合物和核心靶点进行分子对接。18只小鼠分为对照组、NMOSD组和TSKEP组,每组6只,HE染色观察3组小鼠大脑组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清中相关细胞因子水平。结果:动物实验,TSKEP组小鼠神经功能缺损评分与NMOSD组比较明显降低(P<0.01),同时TSKEP组小鼠中枢神经系统炎性细胞浸润程度较轻。共筛选出304个活性化合物和655个药物靶点,其中与TSKEP治疗NMOSD相关的靶点有43个。槲皮素、木犀草素和豆甾醇等可能是核心化合物,白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等可能是潜在的核心靶点。KEGG通路富集分析及靶点-通路网络提示TSKEP主要通过14条信号通路发挥治疗NMOSD作用。分子对接验证结果表明核心化合物与核心靶点之间结合良好。与NMOSD组和对照组比较,TSKEP组小鼠血清中相关炎性细胞因子水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:基于网络药理学和动物实验验证,TSKEP可通过多靶点和多条信号通路调控血清中炎性细胞因子的表达并促进神经功能的修复再生,减轻中枢神经系统的炎症反应,从而发挥治疗作用。 展开更多
关键词 视神经脊髓炎谱系疾病 温补脾肾经验方 网络药理学 分子对接
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AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达
2
作者 许会静 刘晴 +7 位作者 闫冰 刘微 张磊 郭健 姜琳 李淼 孙美艳 李艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1193-1198,I0015,共7页
目的:构建水通道蛋白4(AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质... 目的:构建水通道蛋白4(AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞)。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P<0.05)。结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。 展开更多
关键词 视神经脊髓炎 水通道蛋白4 真核表达载体 基因转染 仓鼠
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水通道蛋白4小分子抑制剂的筛选和验证
3
作者 王楠 郭健 +5 位作者 闫冰 刘晴 张磊 许会静 李淼 孙美艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期511-518,共8页
目的:采用高通量筛选方法筛选出抑制视神经脊髓炎(NMO)-IgG与水通道蛋白4(AQP4)结合的小分子。方法:将FRT-AQP4细胞分为阴性对照组(不加小分子化合物)和筛选组,采用化学发光法检测辣根过氧化物酶(HRP)活性。将V79-AQP4细胞分为抑制剂组(... 目的:采用高通量筛选方法筛选出抑制视神经脊髓炎(NMO)-IgG与水通道蛋白4(AQP4)结合的小分子。方法:将FRT-AQP4细胞分为阴性对照组(不加小分子化合物)和筛选组,采用化学发光法检测辣根过氧化物酶(HRP)活性。将V79-AQP4细胞分为抑制剂组(neosutchuenenine)和二甲基亚砜(DMSO)组,采用免疫荧光法检测各组细胞荧光强度,荧光猝灭法检测各组细胞的水通透性,CellTiter-Glo~?发光法检测补体依赖的细胞毒性,水溶性四氮唑1(WST-1)法检测细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞凋亡情况。结果:与阴性对照组比较,筛选组HRP活性明显升高(P<0.01)。与DMSO组比较,抑制剂组红色荧光强度明显降低,而绿色荧光无明显变化;与DMSO组比较,抑制剂组水通透性无明显变化(P>0.05),补体依赖的细胞毒性明显降低(P<0.01),细胞活性和细胞凋亡无明显变化(P>0.05)。结论:成功建立高通量筛选AQP4小分子抑制剂的方法,并筛选出具有阻断作用的小分子抑制剂neosutchuenenine。 展开更多
关键词 水通道蛋白 视神经脊髓炎 小分子抑制剂 高通量筛选
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