目的探讨新霉素对脑胶质瘤细胞增殖及PDGF、VEGF和血管生成素表达的影响。方法采用人脑胶质瘤细胞U251,DMEM培养基添加10%胎牛血清培养。MTT细胞活性实验检测细胞增殖,Real Time PCR检测mRNA表达情况,酶联免疫吸附实验检测蛋白表达。结...目的探讨新霉素对脑胶质瘤细胞增殖及PDGF、VEGF和血管生成素表达的影响。方法采用人脑胶质瘤细胞U251,DMEM培养基添加10%胎牛血清培养。MTT细胞活性实验检测细胞增殖,Real Time PCR检测mRNA表达情况,酶联免疫吸附实验检测蛋白表达。结果 MTT结果表明,新霉素对U251细胞增殖存在抑制作用,并以剂量依赖的方式进行,并发现新霉素的抑制作用随时间增强。Real Time PCR结果显示,新霉素作用后U251细胞中PDGF、VEGF和血管生成素mRNA的表达都受到不同程度的抑制,分别降低了26.75%、38.23%和43.87%。ELISA分析表明新霉素能够降低PDGF、VEGF和血管生成素蛋白水平的表达。结论新霉素能够抑制脑胶质瘤细胞U251中PDGF、VEGF和血管生成素的表达并抑制脑胶质瘤细胞增殖。展开更多
文摘目的探讨新霉素对脑胶质瘤细胞增殖及PDGF、VEGF和血管生成素表达的影响。方法采用人脑胶质瘤细胞U251,DMEM培养基添加10%胎牛血清培养。MTT细胞活性实验检测细胞增殖,Real Time PCR检测mRNA表达情况,酶联免疫吸附实验检测蛋白表达。结果 MTT结果表明,新霉素对U251细胞增殖存在抑制作用,并以剂量依赖的方式进行,并发现新霉素的抑制作用随时间增强。Real Time PCR结果显示,新霉素作用后U251细胞中PDGF、VEGF和血管生成素mRNA的表达都受到不同程度的抑制,分别降低了26.75%、38.23%和43.87%。ELISA分析表明新霉素能够降低PDGF、VEGF和血管生成素蛋白水平的表达。结论新霉素能够抑制脑胶质瘤细胞U251中PDGF、VEGF和血管生成素的表达并抑制脑胶质瘤细胞增殖。
文摘目的:建立具有分化成γ-氨基丁酸能神经元潜能的神经干细胞模型,为γ-氨基丁酸能神经元退行性疾病的研究提供适宜的研究载体。方法:应用双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),分为0mmol·L-1 dbcAMP组(对照组)和0.3、0.6、1.0及2.0dbcAMP组,观察诱导后各组SH-SY5Y细胞的形态变化;采用Imge-Pro Plus 5.0软件测量神经元样细胞神经突起长度,计算神经突起>30μm细胞所占细胞总数的百分率;采用免疫荧光细胞化学技术检测γ-氨基丁酸能神经元标志性蛋白——谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的表达,并计算其免疫反应阳性率。结果:形态学观察,对照组SH-SY5Y细胞呈多边形、圆形或梭型,胞膜光滑,边界清晰;各浓度dbcAMP组随着dbcAMP浓度的增加和诱导时间的延长,SH-SY5Y细胞胞体变小、突起变长;1.0mmol·L-1 dbcAMP组细胞互相交织,表现出成熟神经元的表型。SH-SY5Y细胞诱导培养72h后,与对照组(31.4%±4.2%)比较,0.3、0.6、1.0和2.0dbcAMP组神经突起>30μm细胞所占细胞总数的百分率(40.1%±5.7%、47.5%±6.2%、73.1%±3.2%和74.3%±6.1%)明显升高(P<0.05或P<0.01)。SH-SY5Y细胞诱导培养72h后,与对照组(10.2%±2.1%)比较,0.3、0.6、1.0和2.0dbcAMP组GAD65阳性细胞表达率(22.1%±2.4%、46.9%±3.2%、70.7%±3.4%和72.3%±3.7%)明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:SH-SY5Y细胞具有分化为γ-氨基丁酸能神经元样细胞的潜能,1.0mmol·L-1是dbcAMP的最佳诱导浓度。
