道亦道,非故道——试论固有免疫中的抗原和免疫原的定义 被引量：4

1

作者 熊思东 周光炎 +2 位作者 金伯泉 龚非力 于永利 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期441-443,共3页

关键词 免疫原 抗原 固有免疫 特异性免疫应答 免疫学教学 适用性

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AG490阻断肝癌细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的实验研究 被引量：4

2

作者 王艳春 黄进明 +1 位作者 朱明光 常雅萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1170-1171,共2页

目的:检测Stat3mRNA在肿瘤细胞中的表达,研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响,探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性。方法:RT-PCR法检测Stat3mRNA表达;动态检测AG490作用前后... 目的:检测Stat3mRNA在肿瘤细胞中的表达,研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响,探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性。方法:RT-PCR法检测Stat3mRNA表达;动态检测AG490作用前后肝癌细胞Stat3mRNA表达以及VEGF、TGF-β和IL-10等免疫抑制因子基因的表达情况。结果:在所检测的人肿瘤细胞中5种有Stat3mRNA的表达;AG490阻断肝癌细胞Stat3通路后,免疫抑制因子VEGF、TGF-β和IL-10等的mRNA表达减弱甚至消失。结论:AG490可通过阻断Stat3信号转导通路逆转免疫抑制,发挥抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 STAT3 肿瘤细胞 AG490 免疫抑制因子

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一种B型CpG ODN对乙肝疫苗的免疫佐剂作用 被引量：2

3

作者 董博翰 王莉 +3 位作者 卫红飞 张培因 于永利 王丽颖 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期52-55,共4页

目的研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺入法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HB... 目的研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺入法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HBsAb水平。结果BW006的纯度和完整性符合实验要求,并能显著的刺激小鼠脾细胞的增生,同乙肝疫苗联用后能够明显增强乙肝疫苗的免疫效果。结论BW006对乙肝疫苗有较强的免疫佐剂作用。 展开更多

关键词 CPG ODN 乙型肝炎肝疫苗 佐剂 HBSAG

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肿瘤免疫治疗的研究进展和发展趋势 被引量：9

4

作者 台桂香 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期427-430,共4页

随着免疫学技术的进步,大量肿瘤抗原不断被发现。DC摄取肿瘤抗原诱导免疫激活还是抑制,取决于肿瘤细胞释放危险信号(GM-CSF、单核趋化蛋白1、MCP1及热休克蛋白等)还是抑制性信号(TGF-β、IDO和iNOS等)。在危险信号的调节下,激活Th1细胞... 随着免疫学技术的进步,大量肿瘤抗原不断被发现。DC摄取肿瘤抗原诱导免疫激活还是抑制,取决于肿瘤细胞释放危险信号(GM-CSF、单核趋化蛋白1、MCP1及热休克蛋白等)还是抑制性信号(TGF-β、IDO和iNOS等)。在危险信号的调节下,激活Th1细胞免疫应答清除肿瘤;而在抑制性信号的作用下,激活Th2应答,不能有效清除肿瘤。肿瘤免疫治疗方面的进展主要表现在抗体疗法、T细胞疗法及肿瘤疫苗。目前至少有7种抗体与化疗药物合用的临床效果已经被证实;尽管抗不同种癌症的抗体种类在逐渐增加,但还需进一步探讨用于抗体治疗的新靶点、开发新抗体及扩大抗体应用的抗肿瘤范围。而T细胞疗法治疗效果不十分理想。大多数肿瘤疫苗处于Ⅰ期和Ⅱ临床试验,但为数不多的Ⅲ期临床试验结果不理想,尚需进一步完善。抗体在免疫监视中的重要作用被逐渐认识,肿瘤免疫预防最终可能成为现实。 展开更多

关键词 肿瘤抗原 抗体 肿瘤疫苗 免疫治疗 免疫预防

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卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响

5

作者 李贺 王华 +6 位作者 吴秀丽 卫红飞 孙陆果 张永胜 于永利 王丽颖 万敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期68-71,I0002,共5页

目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠... 目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL。于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数(SI)。结果:应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分。与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组(P=0.00)、B16TCL免疫组(P=0.01)和BCGHSP70免疫组(P=0.00)。结论:BCGHSP70能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究。 展开更多

关键词 卡介苗 热休克蛋白质类 肿瘤细胞裂解物 免疫原性 免疫佐剂

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一种AsiaⅠ型口蹄疫重组表位蛋白的表达及免疫活性

6

作者 曹昭 卫红飞 +7 位作者 张培因 张永胜 徐海飞 胡小平 万敏 于永利 王丽颖 王华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期234-236,共3页

目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为&quo... 目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为"CZ-1"。通过PCR及基因克隆等方法构建了其表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过镍亲和层析和G-25凝胶过滤层析纯化及复性,获得具有免疫学活性的重组蛋白CZ-1。免疫豚鼠获得含针对AsiaⅠ型FMDV中和抗体的血清,通过细胞中和试验及乳鼠中和试验,检测豚鼠血清中抗FMDV的保护性中和抗体滴度。结果该基因工程重组蛋白能够在动物体内诱导产生抗AsiaⅠ型FDMV具有保护性的中和性抗体。结论该基因工程重组蛋白有望开发成预防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗。 展开更多

关键词 基因工程疫苗 FDMV 重组蛋白 活性检测

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博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化造模方式的选择 被引量：26

7

作者 李丽娜 王华 +4 位作者 周蕾 张永胜 于永利 王丽颖 孙陆果 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期254-257,共4页

目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg ... 目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg 1次或气管内滴入生理盐水50μl。分别于14、28、40天处死,②小鼠随机分为4组,分别经腹腔注射BLM 40mg/kg3、4、5次或经腹腔给予生理盐水200μl。分别于28、40天处死。观察小鼠体重、咳嗽、挠鼻症状、肺系数及肺组织病理改变。结果:给予博莱霉素后①小鼠的体重均下降并出现咳嗽及挠鼻等呼吸障碍症状;处置后第14、28及40天处死小鼠,计算肺系数,P组较I组肺系数高;处死小鼠后,P组和I组小鼠均形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,P组主要分布在胸膜下及血管周围,而I组主要分布在肺门和支气管周围。P组较I组肺纤维化病理评分高。②不同腹腔给药次数模型小鼠体重变化以5次给药对体重影响最大;计算肺系数以给药5次肺系数变化最大。上述模型均成功建立。通过比较生存率、呼吸困难症状、组织病理变化等指标,选出腹腔给药5次相对于给药3次及4次为更好的造模方式。结论:利用BLM腹腔注射和气管内滴入制备了肺间质纤维化动物模型,纤维化形成的部位存在着一定的差异,腹腔给药5次方法制备肺间质纤维化模型的成功率更佳。 展开更多

关键词 ICR小鼠 博莱霉素 肺间质纤维化

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激活素A对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的促进作用 被引量：10

8

作者 霍德胜 柳忠辉 +5 位作者 王世瑶 台桂香 冯野 张宸豪 张鹏宇 刘海岩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期759-761,共3页

目的探讨激活素A对巨噬细胞吞噬活性的促进作用及其机制。方法分别通过中性红试验、鸡红细胞法和流式细胞术,检测激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞饮活性、吞噬活性以及对MHCⅠ、Ⅱ类分子和CD68表达的影响。结果激活素A可明显促进RA... 目的探讨激活素A对巨噬细胞吞噬活性的促进作用及其机制。方法分别通过中性红试验、鸡红细胞法和流式细胞术,检测激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞饮活性、吞噬活性以及对MHCⅠ、Ⅱ类分子和CD68表达的影响。结果激活素A可明显促进RAW264.7细胞的吞饮及吞噬活性,对MHCI、II类分子表达没有影响,但可明显上调巨噬细胞表面分子CD68的表达。结论激活素A可促进巨噬细胞系RAW264.7细胞吞噬活性,这与其促进巨噬细胞成熟有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 RAW264.7 激活素A 吞噬

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激活素结合蛋白在ConA诱导小鼠肝损伤时的表达及作用 被引量：5

9

作者 王轶楠 马迪 +3 位作者 闫枫 于昉 台桂香 柳忠辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期684-686,691,共4页

目的:探讨激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在刀豆蛋白A(ConcanavalinA,Con A)诱导肝损伤中的表达及作用。方法:尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,实时定量PCR检测FSmRNA表达,ELISA法检测FS及激活素A(Activin A)蛋白水平。结果:注射Con... 目的:探讨激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在刀豆蛋白A(ConcanavalinA,Con A)诱导肝损伤中的表达及作用。方法:尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,实时定量PCR检测FSmRNA表达,ELISA法检测FS及激活素A(Activin A)蛋白水平。结果:注射ConA后肝脏组织中FSmRNA表达水平在第三天明显下降,FS蛋白水平在第三天也呈下降趋势;而Activin A水平明显增高。注射FS中和内源性激活素A作用后,肝脏病理损伤程度明显减轻,血清转氨酶水平也显著低于ConA单纯诱导组。结论:在ConA诱导的急性肝损伤过程中激活素A-FS系统失平衡,应用FS阻断内源激活素A可以减轻ConA诱导的肝脏损伤,因此FS有可能成为治疗肝损伤性疾病的有效药物。 展开更多

关键词 激活素A 激活素结合蛋白 刀豆蛋白A 肝损伤

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黏蛋白1多肽对T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制及其机制 被引量：4

10

作者 马吉春 赵小霞 +5 位作者 高航 方芳 周静 宋献美 柳忠辉 台桂香 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期29-33,共5页

目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制作用及其机制。方法:将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Anne... 目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制作用及其机制。方法:将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Annexin V/PI双标记法检测Jurkat细胞的凋亡;应用抗体封闭实验检测MUC1多肽在Jurkat细胞表面作用的位点。结果:10、20、40μg/ml MUC1多肽作用使Jurkat细胞生长抑制分别达(32±4)%、(37±2)%、(46±5)%,未见凋亡细胞。流式细胞术检测结果表明MUC1多肽可诱导Jurkat细胞周期阻滞在G0/G1期,在Jurkat细胞表面有MUC1蛋白的表达。采用5μg/ml和25μg/ml抗MUC1抗体封闭Jurkat细胞表面MUC1表位后,MUC1多肽对细胞生长的抑制效应几乎全部消失。结论:MUC1多肽能明显抑制Jurkat细胞生长,其机制与该多肽通过和Jurkat细胞表面MUC1蛋白相互作用导致细胞周期阻滞在G0/G1期有关。 展开更多

关键词 黏蛋白1多肽 JURKAT细胞 生长抑制 细胞周期

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WWOX基因转染抑瘤效应的实验研究 被引量：5

11

作者 杨巍 袁红艳 +1 位作者 郑旸 常雅萍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期128-130,共3页

目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体,观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4/myc-His中;采用脂质体介导法... 目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体,观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4/myc-His中;采用脂质体介导法体外瞬时转染人肺腺癌A549细胞;RT-PCR法和Western印迹法分别检测WWOX基因mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成试验观察肿瘤细胞克隆形成能力的变化。结果成功构建了WWOX的真核表达载体,体外转染的A549细胞凋亡率明显高于未转染和空载体转染细胞,且细胞克隆形成能力下降,形成率为35.43%,明显低于未转染细胞和空载体转染细胞。结论所构建的pcDNA4/myc-WWOX真核表达载体转染肿瘤细胞能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 WWOX 基因转染 抑瘤效应

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Lewis肺癌细胞通过TLR9对CD4＋CD25＋Treg细胞影响的研究 被引量：4

12

作者 李欣 付海英 +1 位作者 张佳伦 李一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期124-128,共5页

目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9... 目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9mRNA表达的影响;采用TLR9受体阻断剂氯喹阻断Lewis肺癌TLR9的表达。结果:与对照组相比,共培养组CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养后可影响多种TLRs表达,其中TLR9 mRNA表达与对照组相比明显增高(P<0.05),阻断Lewis肺癌细胞TLR9可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达(P<0.05)。结论:Lewis肺癌细胞可通过TLR9促进CD4+CD25+Treg细胞产生及功能增强,参与诱导肿瘤的免疫耐受,从而促进肿瘤的发生和发展。 展开更多

关键词 CD4+CD25+TREG细胞 FOXP3 TLRS 肿瘤免疫

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血清卵泡抑素水平检测用于卵巢癌诊断的研究 被引量：8

13

作者 陈芳芳 王轶楠 +3 位作者 汪丽 孟小丹 孙洋 柳忠辉 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第2期207-209,共3页

目的探讨卵泡抑素在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测肿瘤患者及健康对照者血清FS水平;免疫组织化学染色观察卵巢癌组织FS表达情况。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P<... 目的探讨卵泡抑素在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测肿瘤患者及健康对照者血清FS水平;免疫组织化学染色观察卵巢癌组织FS表达情况。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P<0.01;乳腺癌和肺癌患者血清FS水平也高于健康对照组,P<0.05;胃癌和肾癌患者血清FS水平与健康对照组比较无显著性差异,P>0.05。肿瘤诊断阳性率依次为卵巢癌(60%)>乳腺癌(40%)>肺癌(30%)>胃癌(20%)>肾癌(0%)。免疫组织化学染色显示,卵巢癌组织表达FS与肿瘤类型有关,染色强度依次为粘液性癌>子宫内膜样癌>透明细胞癌>鳞癌>浆液性癌。结论卵巢癌患者血清FS水平升高,其诊断阳性率与卵巢肿瘤类型有关;血清FS检测对卵巢癌诊断具有重要价值。 展开更多

关键词 卵泡抑素 酶联免疫吸附试验 卵巢癌 诊断

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新型CpG ODN对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量：2

14

作者 杨光 杨亮 +5 位作者 包木胜 刘旭 王俪波 徐海飞 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期487-490,共4页

目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW00... 目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW001刺激人PBMC的上清与HepG2.2.15细胞共孵育12天后收集培养上清,用放射免疫法检测该培养上清液中HBsAg及HBeAg的含量,用点杂交法检测HBV DNA的含量。结果:CpG BW001刺激人PBMC产生以IFNα-为主的抗病毒物质;CpG BW001刺激人PBMC的培养上清作用于HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量明显减少,且细胞内HBV DNA的含量也显著降低。结论:CpG BW001能通过刺激细胞产生抗病毒物质如IFNα-等,从而在体外抑制HBsAg和HBeAg的表达及HBV的复制。 展开更多

关键词 CPG ODN 乙型肝炎病毒 人外周血单个核细胞 干扰素

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两种尿素浓度测定方法的比较 被引量：4

15

作者 曹昭 万敏 +4 位作者 孙陆果 胡小平 于永利 王丽颖 张培因 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第1期135-136,共2页

关键词 血清尿素 测定方 二甲基氨基苯甲醛 肾小球滤过功能 流动注射分析法 二乙酰一肟 浓度 临床检测

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HMGA1基因转染诱导NIH3T3细胞恶性转化实验研究 被引量：2

16

作者 张鑫 朱明光 +2 位作者 袁红艳 杨巍 常雅萍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期390-393,共4页

目的:通过建立稳定转染外源HMGA1基因的NIH3T3细胞,探讨HMGA1基因表达与肿瘤发生、发展的相关性。方法:脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3·0-HMGA1稳定转染NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆;RT-PCR法及基因测序技术,确定外源HM... 目的:通过建立稳定转染外源HMGA1基因的NIH3T3细胞,探讨HMGA1基因表达与肿瘤发生、发展的相关性。方法:脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3·0-HMGA1稳定转染NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆;RT-PCR法及基因测序技术,确定外源HMGA1基因在阳性细胞克隆转录水平的表达;MTT法绘制细胞生长曲线以及流式细胞术测定细胞周期观察细胞增殖能力的变化;软琼脂集落形成实验判断转染细胞的非锚定依赖性生长能力;RT-PCR法检测转染细胞免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA表达。结果:筛选获得稳定转染HMGA1基因的NIH3T3细胞克隆,与对照细胞相比稳定转染HMGA1基因,细胞生长增殖速度加快,在软琼脂中形成细胞集落,并表达免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA。结论:HMGA1基因转染可诱导正常NIH3T3细胞恶性转化,并参与调控免疫抑制因子mRNA表达,揭示HMGA1是肿瘤发生发展、转移以及免疫逃逸的关键分子。 展开更多

关键词 HMGA1 NIH3T3 基因转染 细胞转化

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FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡影响的研究 被引量：5

17

作者 张淑芳 刘大程 +1 位作者 孙吉凤 台桂香 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第1期48-50,共3页

目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的... 目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响。结果当FTY720浓度为6 400 ng/ml时,体外培养MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,抑制率为62.0%(P<0.05),而且抑制率呈浓度依赖性;镜下可见细胞出现凋亡的形态;流式细胞仪检测分析显示FTY720可将MCF-7细胞阻滞于G1期,并促进其发生凋亡,凋亡率呈浓度依赖性。结论在体外培养的MCF-7细胞培养液中加入一定浓度的FTY720,能明显抑制该细胞的增殖,调节该细胞周期并诱导其凋亡。 展开更多

关键词 FTY720 MCF-7细胞 凋亡 抗肿瘤作用

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体内稳定表达HER2多表位基因B16细胞系的建立 被引量：2

18

作者 李贺 向泽敏 +5 位作者 吴秀丽 王莉 卫红飞 万敏 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期13-15,共3页

目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性... 目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性细胞群,对该群细胞进行无G418条件下的单克隆筛选并进行体内稳定性检测。结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pcDNA3-GFP-HER2构建正确;最终建立的表达HER2基因B16细胞系体内传代后GFP-HER2阳性率高于90%。结论:成功建立了体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤细胞系,为其他体内稳定表达外源基因的转染细胞的建立提供了借鉴。 展开更多

关键词 小鼠黑色素瘤细胞 HER2 阳离子脂质体

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一种C型CpGODN对柯萨奇病毒感染小鼠的作用初探 被引量：2

19

作者 杨亮 孙晚晴 +4 位作者 王莉 吴秀丽 万敏 于永利 王丽颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-117,共3页

目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心... 目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心肌病变的影响。结果:D-SL01刺激的人PBMC培养上清不仅能抵抗VSV感染VeroE6细胞,也能明显抵抗柯萨奇病毒对HeLa细胞的感染,其作用强度与A-型CpGODN2216相似。然而,当腹腔内连续给药6d后,D-SL01使柯萨奇病毒感染小鼠的质量下降及心肌病变程度与对照组小鼠相比加重。结论:研究结果提示:体内应用CpGODN的机制特别是用于病毒感染性疾病时,应该充分注意给药时机、途径及剂量。 展开更多

关键词 CPG ODN 柯萨奇病毒 心肌炎

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siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡 被引量：1

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作者 谢淑丽 王广义 +1 位作者 吕国悦 朱明光 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期290-295,共6页

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting... 目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。 展开更多

关键词 RHOC基因 SIRNA 肝肿瘤 凋亡

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