建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法。根据副溶血弧菌的Vpara（16S-23SrDNAIGS）基因、沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157：H7的rfbO157基因和志贺菌的ipaH基因序列设计了4对特异性引物，对上述致病菌进行四重PCR...建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法。根据副溶血弧菌的Vpara（16S-23SrDNAIGS）基因、沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157：H7的rfbO157基因和志贺菌的ipaH基因序列设计了4对特异性引物，对上述致病菌进行四重PCR扩增，采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重PCR扩增产物。优化了多重PCR扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件。当芯片电泳的筛分介质HPMC-50浓度为2．2％、溴乙锭（EB）含量为3．75μmol／L、电场强度为120V／cm时，pUC Mix DNA Marker8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离，600S内即可完成上述4种致病菌的同时检测，迁移时间的日内相对标准偏差为0．74％～2．09％。本方法能够检出1×10^2cfu／mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌O157：H7和志贺菌。方法特异性高，所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段。将本法应用于食品中上述致病菌的测定，获得了满意的结果，为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段，对保障食品安全具有重要的现实意义。展开更多
文摘建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法。根据副溶血弧菌的Vpara（16S-23SrDNAIGS）基因、沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157：H7的rfbO157基因和志贺菌的ipaH基因序列设计了4对特异性引物，对上述致病菌进行四重PCR扩增，采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重PCR扩增产物。优化了多重PCR扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件。当芯片电泳的筛分介质HPMC-50浓度为2．2％、溴乙锭（EB）含量为3．75μmol／L、电场强度为120V／cm时，pUC Mix DNA Marker8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离，600S内即可完成上述4种致病菌的同时检测，迁移时间的日内相对标准偏差为0．74％～2．09％。本方法能够检出1×10^2cfu／mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌O157：H7和志贺菌。方法特异性高，所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段。将本法应用于食品中上述致病菌的测定，获得了满意的结果，为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段，对保障食品安全具有重要的现实意义。
