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代谢综合征相关新基因MSRG实时荧光PCR检测方法的建立
1
作者 陈瑾歆 方定志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期489-492,共4页
目的建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础。方法根据MSRGcDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性... 目的建立测定MSRG mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测方法,为新基因的功能研究奠定基础。方法根据MSRGcDNA序列设计荧光PCR适用的引物和探针,构建质粒标准品,建立标准曲线用于荧光PCR相对定量,检测荧光PCR方法的灵敏性、特异性和重复性。荧光PCR检测不同浓度葡萄糖[5.6mmol/L(G5.6)、22mmol/L(G22)、33.3mmol/L(G33.3)]刺激人肝癌细胞株HepG2细胞MSRG的表达并与半定量RT-PCR方法进行比较。结果建立了MSRG mRNA表达的实时荧光PCR检测方法。荧光PCR检测显示G33.3、G22和G5.6组HepG2细胞MSRG表达均有显著差异,半定量RT-PCR方法检测G33.3组MSRG表达显著增加,但不能检测出G22和G5.6组间有差异。结论本实验建立的MSRG mRNA表达实时荧光PCR检测方法灵敏性、特异性和重复性较好,为MSRG功能的研究提供了一种重要手段。 展开更多
关键词 代谢综合征 实时荧光定量PCR 半定量RT-PCR HEPG2
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组织脂质的分离及分类测定
2
作者 黄鑫 方定志 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 CAS 2005年第7期F003-F004,共2页
脂质的分离及分类测定,是研究脂代谢、阐明脂代谢紊乱相关疾病的发病机理和脂代谢调节药物作用机理的重要手段。尽管目前出现了不少先进的分离、分析技术和相关仪器,但脂质的分离和分类测定采用最多的仍然是较传统的薄层层析法。该方法... 脂质的分离及分类测定,是研究脂代谢、阐明脂代谢紊乱相关疾病的发病机理和脂代谢调节药物作用机理的重要手段。尽管目前出现了不少先进的分离、分析技术和相关仪器,但脂质的分离和分类测定采用最多的仍然是较传统的薄层层析法。该方法具有简单、快捷、花费少、灵敏度高等优点,应用十分广泛。同时,由于高效液相色谱法和棒状薄层层析拥有自己的特点和优势,近年来也越来越多地应用于组织脂质的分离和分类测定。 展开更多
关键词 组织脂质 分离 分类 测定 脂代谢紊乱 发病机理
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脱氧核酶抑制近日基因period1表达的实验研究
3
作者 周薇 王跃锜 +4 位作者 刘延友 彭文珍 肖静 朱彬 王正荣 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2005年第2期98-103,共6页
研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外... 研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外切割反应,地高辛酶联免疫及酶催化显色法检测脱氧核酶的体外切割效率.将pcDNA3-per1和DRz164或DRz256在脂质体的介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测脱氧核酶对近日基因表达的影响.于37℃孵育2h后,DRz164对底物的剪切百分率为63%,DRz256为50.5%.RT-PCR半定量检测per1mRNA表达水平明显下降,FCM结果显示细胞内Per1蛋白的合成受到抑制.脱氧核酶DRz164,DRz256体外具有定点切割近日钟基因per1mRNA组分的活性,使转染细胞per1mRNA和Per1蛋白表达下降. 展开更多
关键词 实验研究 酶抑制 NIH3T3细胞 脱氧核酶 聚合酶链反应 mRNA表达 RT-PCR 流式细胞术 半定量检测 设计合成 基因疗法 近日节律 体外转录 转录产物 切割反应 反应条件 切割效率 酶联免疫 基因表达 蛋白表达 转染细胞 钟基因
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