将含人巨细胞病毒(HCMV)DNA大片段的重组cos质粒转化入大肠杆菌DH5α。采用碱裂解法、煮沸法和SDS法提取纯化该大DNA重组cos质粒,并进行比较。通过限制性内切酶酶切分析,以HCMV DNA EcoRⅠ-Y片段作为探针,进行DNA印迹鉴定,并与33例19天...将含人巨细胞病毒(HCMV)DNA大片段的重组cos质粒转化入大肠杆菌DH5α。采用碱裂解法、煮沸法和SDS法提取纯化该大DNA重组cos质粒,并进行比较。通过限制性内切酶酶切分析,以HCMV DNA EcoRⅠ-Y片段作为探针,进行DNA印迹鉴定,并与33例19天～3月婴儿肝炎综合征患儿外周血白细胞DNA进行斑点杂交。结果提示:重组cos质粒转化效率为5.9×10~5转化子/μg DNA,碱裂解法可用于大质粒DNA提取,产量和纯度高,并省时。EcoRⅠ-Y片段与人白细胞DNA及其它疱疹病毒DNA无同源性,适宜予早期诊断HCMV感染,具有较血清学诊断及病毒分离培养特异性高、敏感性强和快速等优点。展开更多
文摘将含人巨细胞病毒(HCMV)DNA大片段的重组cos质粒转化入大肠杆菌DH5α。采用碱裂解法、煮沸法和SDS法提取纯化该大DNA重组cos质粒,并进行比较。通过限制性内切酶酶切分析,以HCMV DNA EcoRⅠ-Y片段作为探针,进行DNA印迹鉴定,并与33例19天～3月婴儿肝炎综合征患儿外周血白细胞DNA进行斑点杂交。结果提示:重组cos质粒转化效率为5.9×10~5转化子/μg DNA,碱裂解法可用于大质粒DNA提取,产量和纯度高,并省时。EcoRⅠ-Y片段与人白细胞DNA及其它疱疹病毒DNA无同源性,适宜予早期诊断HCMV感染,具有较血清学诊断及病毒分离培养特异性高、敏感性强和快速等优点。
