具抗肿瘤活性的海洋微生物菌株的初步筛选 被引量：4

1

作者 李根 陈瑞川 林昱 《台湾海峡》 CAS CSCD 2002年第1期18-22,共5页

本研究采用MTT法对海洋放线菌、细菌、霉菌及极地和大洋细菌进行细胞毒活性物质的筛选 ,结果有 1 0 %放线菌及一株极地细菌具有细胞毒活性 .此外利用DNA修复特性在E .coli 3 4 3 /591和E .coli 3 4 3 /63 6之间的差异性 ,对前面筛得的... 本研究采用MTT法对海洋放线菌、细菌、霉菌及极地和大洋细菌进行细胞毒活性物质的筛选 ,结果有 1 0 %放线菌及一株极地细菌具有细胞毒活性 .此外利用DNA修复特性在E .coli 3 4 3 /591和E .coli 3 4 3 /63 6之间的差异性 ,对前面筛得的菌株进行DNA损伤的筛选 ,结果得到两株活性菌株 .采用荧光染色观察得到 3株具有诱导肿瘤细胞凋亡的菌株 ,这些具抗肿瘤活性的菌株可供进一步研究 . 展开更多

关键词 MTT分析法 DDRT法 细胞毒活性物质 细胞凋亡 海洋微生物 海洋药物 抗肿瘤活性

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极端微生物产碱性蛋白酶菌株的筛选及发酵条件研究 被引量：28

2

作者 张锐 曾润颖 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期5-9,共5页

从深海的 3 8份水样和泥样中筛选到一株产蛋白酶的菌株DY A ,其最适生长温度为1 0℃ ,能适应较大范围的pH值和盐度。此菌株只在酵母膏存在的情况下产酶 ,不利用单一氮源 ,最适产酶条件为 :pH1 0 0 ,1 0℃ ,接种量 0 5 % ,2 0 0r/min... 从深海的 3 8份水样和泥样中筛选到一株产蛋白酶的菌株DY A ,其最适生长温度为1 0℃ ,能适应较大范围的pH值和盐度。此菌株只在酵母膏存在的情况下产酶 ,不利用单一氮源 ,最适产酶条件为 :pH1 0 0 ,1 0℃ ,接种量 0 5 % ,2 0 0r/min摇床培养 48～ 72h。粗酶液的最适作用温度为 40℃ ,最适pH值为 1 0 ,在pH9～ 1 2内稳定 ,是一碱性蛋白酶。 展开更多

关键词 极端微生物 嗜冷菌 碱性低温蛋白酶 发酵条件 菌株筛选

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交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆 被引量：15

3

作者 熊鹏钧 文建军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期233-237,共5页

从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚... 从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长 14 79bp ,编码一个 492AA的蛋白质。酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonashaloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有 95%的相似性 ,包括一个糖基水解酶家族 5的催化结构域 ,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域。对酶性质的初步研究发现 ,CelX的最适温度为 40℃ ,酶的最适pH在 6～ 展开更多

关键词 交替假单胞菌 DY3菌株 16SrDNA序列分析 内切葡聚糖酶 基因 纤维素酶 克隆

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极端酶的研究进展 被引量：1

4

作者 张锐 曾润颖 《台湾海峡》 CAS CSCD 2001年第3期405-410,共6页

本文综述了近年来国内外关于极端酶研究的新进展 .介绍了最新发现的极端酶 ,从一些极端酶的三维构成、晶体结构和氨基酸序列等方面初步阐述了它们的作用机制 ,极端酶的定向突变 ,极端酶在普通微生物菌体内表达等基因工程进展和极端酶初... 本文综述了近年来国内外关于极端酶研究的新进展 .介绍了最新发现的极端酶 ,从一些极端酶的三维构成、晶体结构和氨基酸序列等方面初步阐述了它们的作用机制 ,极端酶的定向突变 ,极端酶在普通微生物菌体内表达等基因工程进展和极端酶初步应用的研究成果 . 展开更多

关键词 极端酶 极端生物 三维构成 晶体结构 氨基酸 作用机制

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伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因在杆状病毒载体系统中的表达研究

5

作者 陈新华 杨林 +4 位作者 龙綮新 王章 陈曲侯 洪文洲 陈焕春 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期415-419,共5页

克隆了伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因并进行了序列分析 ,与国际标准毒株Rice株相比 ,两者之间核苷酸序列同源性为 98% ,推导氨基酸序列同源性为 97% .利用杆状病毒GST融合载体系统对其进行了高效表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白... 克隆了伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因并进行了序列分析 ,与国际标准毒株Rice株相比 ,两者之间核苷酸序列同源性为 98% ,推导氨基酸序列同源性为 97% .利用杆状病毒GST融合载体系统对其进行了高效表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹均证明了表达产物为 71ku的GST gD融合蛋白 ,其产量占细胞不溶蛋白量的 2 0 %左右 .以GST gD融合蛋白作为抗原进行小鼠免疫保护实验 ,结果表明表达的GST gD融合蛋白具有较好的免疫原性 ,不仅能诱导小鼠产生血清抗体 (1∶12 8) 。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 鄂A株 囊膜蛋白gD基因 杆状病毒载体系统 表达 免疫原性

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豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶基因的克隆及其异源表达的全酶蛋白和酶片段的功能研究 被引量：4

6

作者 周樱 王风平 肖湘 《自然科学进展》 北大核心 2002年第8期852-856,T003,共6页

豚鼠气单胞菌 CB101(Aeromonas caviae)能产生多种分子量不同的几丁质酶,根据已知几了质酶基因DNA保守序列,利用人工合成的PCR引物和CB101总DNA,扩增出一个约2.6kb的片段并克隆到pBluescriptⅡ KS载体上。序列分析表明,这是目前已克隆... 豚鼠气单胞菌 CB101(Aeromonas caviae)能产生多种分子量不同的几丁质酶,根据已知几了质酶基因DNA保守序列,利用人工合成的PCR引物和CB101总DNA,扩增出一个约2.6kb的片段并克隆到pBluescriptⅡ KS载体上。序列分析表明,这是目前已克隆的最大的微生物几丁质酶基因之一,编码865个氨基酸,蛋白质分子质量为91.5ku,包括N-末端信号肽序列,PKD(Poly-cystic kidney disease,多囊肾)结构域,催化区,C-末端REJ(Receptor for Egg Jelly,卵胶膜受体)区域和两个几下结合区,该酶同时具有几丁质外切和内切功能,降解胶体几丁质成几丁二糖、三糖和N-乙酰葡萄糖胺,去除其C末端302个氨基酸后,位于N末端的PKD结构域和催化区同样具有较强活性,但其胶体几丁质降解产物为几丁二、三、四糖,进一步的实验证实全酶的最低分子量底物为几丁三糖,而去除C端的酶片段的最低分子量废物为几丁四糖。 展开更多

关键词 豚鼠气单胞菌CB101 几丁质酶基因 全酶蛋白 酶片段 序列分析 几丁结合区 空间结构 基因克隆 基因表达

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PAHs降解菌的分离、鉴定及降解能力测定 被引量：43

7

作者 徐虹 章军 +1 位作者 刘陈立 邵宗泽 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期61-64,共4页

以芴、菲、蒽、芘为碳源和能源筛选、分离PAHs降解菌。14株能降解利用PAHs的菌株被分离。通过HPLC分析,在含芴、菲、蒽、芘的混合培养基质中10号菌的降解能力最强。研究它的降解性能和生长情况,表明该菌在混合反应体系中培养30d后对芴... 以芴、菲、蒽、芘为碳源和能源筛选、分离PAHs降解菌。14株能降解利用PAHs的菌株被分离。通过HPLC分析,在含芴、菲、蒽、芘的混合培养基质中10号菌的降解能力最强。研究它的降解性能和生长情况,表明该菌在混合反应体系中培养30d后对芴、菲、蒽、芘的降解率分别为95.27、90.46、28和80%;在只含一种PAH的单反应体系中该菌对芴、菲、蒽的降解能力提高,降解率分别可达98.91、94.32和52.17%,而对芘的降解能力则降低,降解率仅为62.47%。与混合PAHs培养体系相比,在单一PAH培养体系中,细菌的对数生长期缩短1/3。经生理生化鉴定和16SrDNA序列对比分析,确定10号菌株属于假单胞菌,命名为PseudomonasspFAP10。 展开更多

关键词 生物降解 多环芳烃 假单胞菌

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一株具抗肿瘤活性的北极细菌的筛选及分子鉴定 被引量：14

8

作者 曾润颖 李根 林昱 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期800-803,共4页

在中国首次北极科学考察期间 ,从北极海域采集了水体 ,沉积物等样品 ,从中分离得到一批嗜冷细菌 ,采用MTT法对这些北极海洋细菌进行了细胞毒活性物质的筛选 ,得到一株具有细胞毒活性的菌株 .采用

关键词 抗肿瘤活性 北极细菌 MTT分析法 细胞毒活性物质 分子鉴定 菌株筛选 海洋微生物

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分子信标探针用于PCR检测对虾白斑杆状病毒 被引量：11

9

作者 章晓波 徐洵 +2 位作者 李庆阁 徐丽美 public.xm.fj.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期277-280,共4页

将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩... 将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针 ,用于该病毒的PCR检测 .温度与荧光强度之间的关系表明 ,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开 ,符合PCR对分子信标探针的要求 .结果表明 ,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增 ,分子信标探针只能与目的DNA杂交 ,具有较高的特异性 .随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数的增加 。 展开更多

关键词 对虾 白斑杆状病毒 PCR 分子信标探针

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鱼类虹彩病毒PCR快速检测试剂盒的准确度评价及其应用 被引量：3

10

作者 林端 董燕红 +3 位作者 袁茵 易斌 陈新华 吴玲玲 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期190-193,共4页

虹彩病毒对鱼类等水生动物有广泛的感染性,给世界水产养殖业造成了巨大的经济损失。针对已研制成功的一种鱼类虹彩病毒PCR快速检测试剂盒,本文对反映其检测准确程度的灵敏性和特异性两个指标进行了检测,并在多个待测鱼样本中进行了试用... 虹彩病毒对鱼类等水生动物有广泛的感染性,给世界水产养殖业造成了巨大的经济损失。针对已研制成功的一种鱼类虹彩病毒PCR快速检测试剂盒,本文对反映其检测准确程度的灵敏性和特异性两个指标进行了检测,并在多个待测鱼样本中进行了试用。结果表明,该试剂盒的检测灵敏度相当于30个病毒粒子,无非特异性扩增反应,适用于多鱼种虹彩病毒病的早期快速诊断、苗种检疫以及水质环境的监测。 展开更多

关键词 PCR 虹彩病毒 检测

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重组鲈鱼生长激素的分离纯化及抗体制备 被引量：3

11

作者 曾润颖 刘小青 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第5期13-16,共4页

用IPTG诱导鲈鱼生长激素基因工程菌E coli RV30 8,使重组鲈鱼生长激素得以表达并分泌到周质空间。利用渗透休克法从菌液中提取间质蛋白 ,经DEAE SepharoseCL 6B、聚丙烯酰胺凝胶电泳及SephadexG 75纯化后得到单一电泳纯的重组鲈鱼生长激... 用IPTG诱导鲈鱼生长激素基因工程菌E coli RV30 8,使重组鲈鱼生长激素得以表达并分泌到周质空间。利用渗透休克法从菌液中提取间质蛋白 ,经DEAE SepharoseCL 6B、聚丙烯酰胺凝胶电泳及SephadexG 75纯化后得到单一电泳纯的重组鲈鱼生长激素 ,并将此激素作为抗原制备抗体 ,可应用于鱼类血液中生长激素含量的测定。 展开更多

关键词 重组鲈鱼生长激素 纯化 抗体 分离 制备

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一种简便、快速从病毒感染鱼、虾组织中制备PCR模板的方法 被引量：7

12

作者 陈新华 王小文 吴文忠 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第8期66-68,共3页

以虹彩病毒 (iridovirus)感染大黄鱼的脾组织、对虾白斑杆状病毒 (whitespotsyndromebaculovirus,WSBV)感染中国对虾的肌肉组织为材料 ,采用一种简便、快速的方法获得了可满足病毒PCR检测的高质量模板DNA ,分别以针对虹彩病毒、WSBV的... 以虹彩病毒 (iridovirus)感染大黄鱼的脾组织、对虾白斑杆状病毒 (whitespotsyndromebaculovirus,WSBV)感染中国对虾的肌肉组织为材料 ,采用一种简便、快速的方法获得了可满足病毒PCR检测的高质量模板DNA ,分别以针对虹彩病毒、WSBV的特异性引物进行PCR扩增 ,均能有效扩增出预期的条带。与常规DNA病毒模板制备方法相比 ,具有简便、快速、提取率高、无污染等优点 ,尤其适用于水产动物病毒PCR检测试剂盒的商品化开发及生产实际应用。 展开更多

关键词 病毒 组织 制备 PCR模板 虹彩病毒 对虾白斑杆状病毒

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嗜热菌Thermus sp.YBJ-1的分离和淀粉酶基因的克隆 被引量：5

13

作者 熊鹏钧 文建军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期434-436,共3页

从西藏热泉水样分离得到一株嗜热菌 (YBJ 1) ,其 16SrDNA(15 11bp)序列与栖热菌 (ThermusscotoductusITI 2 5 2T)的同源性为 98%。通过PCR技术将Thermussp .YBJ 1的淀粉酶基因 (amyT)全长开放阅读框克隆到T载体。分析表明 ,amyT的ORF全... 从西藏热泉水样分离得到一株嗜热菌 (YBJ 1) ,其 16SrDNA(15 11bp)序列与栖热菌 (ThermusscotoductusITI 2 5 2T)的同源性为 98%。通过PCR技术将Thermussp .YBJ 1的淀粉酶基因 (amyT)全长开放阅读框克隆到T载体。分析表明 ,amyT的ORF全长为 176 7bp ,编码 5 88个氨基酸。推导的氨基酸序列与嗜热脂肪芽孢杆菌的阿尔法环糊精酶 (Bacillusstearothermophilusalpha cyclodextrinase)和栖热菌Thermussp .IM6 5 0 1的麦芽糖淀粉酶 (Thermussp .IM6 5 0 1maltogenicamylase)分别有 99%和 96 %的同源性 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌的新普鲁兰酶 (neopullulanase)的同源性为81%。 展开更多

关键词 嗜热菌 麦芽糖淀粉酶 环糊精酶 新普鲁兰酶

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日本囊对虾Kunitz型蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析 被引量：2

14

作者 陈丹丹 何南海 张名昌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期500-503,共4页

SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽,含有一个Kunitz型结构域,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用,为了... SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽,含有一个Kunitz型结构域,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用,为了了解SKPI在对虾天然免疫系统中的作用,首先对其进行了重组表达。从日本囊对虾肝胰腺中扩增skpi的cDNA片段,插入改造后的pPIC9K酵母表达载体,获得的重组质粒转化至毕赤酵母GS115进行表达。由于改造的pPIC9K载体加入了6-His标签,因此利用Ni Sepharose High Performance对SKPI进行了高效纯化。初步的活性研究表明,重组表达的SKPI能特异性地抑制胰蛋白酶的水解活性。 展开更多

关键词 日本囊对虾 Kunitz型蛋白酶抑制剂 毕赤酵母 胰蛋白酶

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对虾白斑杆状病毒基因中的小顺反子及其表达 被引量：1

15

作者 章晓波 徐洵 杨丰 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期73-78,共6页

通过对虾白斑杆状病毒ＤＮＡ文库和ｃＤＮＡ文库的碱基序列测定和分析，发现 对虾白斑杆状病毒的一个开放阅读框的前导序列中含有一个小顺反子，这个小顺反 子较多使用对虾基因和白斑杆状病毒基因的稀有密码子．试验表明在该基因的前导... 通过对虾白斑杆状病毒ＤＮＡ文库和ｃＤＮＡ文库的碱基序列测定和分析，发现 对虾白斑杆状病毒的一个开放阅读框的前导序列中含有一个小顺反子，这个小顺反 子较多使用对虾基因和白斑杆状病毒基因的稀有密码子．试验表明在该基因的前导 序列中存在或不存在小顺反子时，该基因都可在大肠杆菌中诱导表达，但两者的表达 量不同．小顺反子可能对基因的表达具有调控作用． 展开更多

关键词 对虾 白斑杆状病毒 小顺反子 密码子使用频率 基因

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对虾白斑杆状病毒对螯虾血淋巴原代细胞的感染 被引量：8

16

作者 李钫 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第12期74-77,共4页

应用螯虾血淋巴细胞的原代培养系统 ,作为对虾白斑杆状病毒 (whitespotbacilliformvirus ,WSBV )的替代宿主 ,进行体外感染实验。通过PCR及RNA点杂交的方法监测WSBV的DNA复制、转录情况。结果显示 ,来源于对虾的WSBV可以感染体外培养的... 应用螯虾血淋巴细胞的原代培养系统 ,作为对虾白斑杆状病毒 (whitespotbacilliformvirus ,WSBV )的替代宿主 ,进行体外感染实验。通过PCR及RNA点杂交的方法监测WSBV的DNA复制、转录情况。结果显示 ,来源于对虾的WSBV可以感染体外培养的螯虾原代血淋巴细胞 ,并在其中增殖 ;WSBV感染螯虾原代血淋巴细胞后 6h左右病毒开始大量复制 ,感染后的细胞可以存活数日。在目前虾细胞系尚未建立之前 ,螯虾血淋巴原代细胞可以作为研究WSBV感染、转录和复制等机理的替代系统。 展开更多

关键词 对虾白斑杆状病毒 WSBV 螯虾血淋巴细胞 原代培养 病毒感染

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斑节对虾肝胰腺全长cDNA表达文库的构建

17

作者 罗田 徐洵 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第S2期116-121,共6页

采用PolyATtract1000系统提取完整的斑节对虾肝胰腺mRNA,ZAPExpresscDNA合成试剂盒合成具有EcoRⅠ和XhoⅠ末端的双链cDNA.cDNA与经EcoRⅠ和XhoⅠ预消化的λZAPExpress载体连接,再经GigapackⅢGold蛋白体外包装和感染E.coli菌株XL1-Blue... 采用PolyATtract1000系统提取完整的斑节对虾肝胰腺mRNA,ZAPExpresscDNA合成试剂盒合成具有EcoRⅠ和XhoⅠ末端的双链cDNA.cDNA与经EcoRⅠ和XhoⅠ预消化的λZAPExpress载体连接,再经GigapackⅢGold蛋白体外包装和感染E.coli菌株XL1-BlueMRF′,成功构建了库容量为7 7×105,重组率高达99 1%的cDNA表达文库.将初级文库进行扩增,并在滴定扩增文库时随机挑取9个噬菌斑,在辅助噬菌体ExAssist的作用下通过体内切除形成phagemid,再用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切获得插入cDNA片段,其长度最长达1 6kb.我们还用PCR法从库中扩增出完整的肌动蛋白编码区cDNA(约1 2kb).以上结果说明此表达文库含有斑节对虾肝胰腺全长cDNA片段,因此本文库为对虾基因的克隆、表达及其结构和功能的研究奠定了基础. 展开更多

关键词 斑节对虾 CDNA表达文库 肝胰腺

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