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不同商品化病毒DNA提取试剂盒对非洲猪瘟病毒检测效果的比较研究
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作者 杨云龙 冯永智 +3 位作者 高琦 吴小仪 龚浪 张桂红 《广东畜牧兽医科技》 2023年第1期39-43,共5页
为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV ... 为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV DNA检测效率进行了评价,为ASFV的高效检测提供数据参考。结果表明:构建的ASFV晚期p72基因的标准品质粒和标准曲线中,p72标准品质粒的检测效率与灵敏度较优。通过使用OIE、CADC分别提供的引物、探针和多种DNA提取试剂盒进行ASFV荧光定量PCR检测,发现CADC提供的引物和探针对于ASFV的检测更加灵敏,Axygen品牌的DNA提取试剂盒对ASFV的检测性价比更高。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72 标准曲线 DNA提取试剂盒
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基于B646L、EP402R、MGF360/505基因的非洲猪瘟病毒ERA检测方法的建立 被引量:11
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作者 曾宇晨 龚浪 +5 位作者 王京煜 潘昊鸣 梁杏玲 马俊 张桂红 王衡 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期33-40,共8页
【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序... 【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序列,设计特异性的ERA探针和引物,经过反应条件的优化,建立42℃等温条件下检测ASFV DNA的ERA方法。【结果】ERA-ASFV-B646L、ERA-ASFV-EP402R和ERA-ASFV-MGF3个检测方法分别在16、7和13 min内即可得出检测结果;特异性强,对阳性样品拷贝数的检测下限均为102μL-1;与我国非洲猪瘟诊断技术标准中的方法对比,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的ERA检测方法可以用于ASFV的快速检测,为流行病学调查和现场检测提供了一种快速有效的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 酶促重组酶扩增 等温扩增 快速检测
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非洲猪瘟病毒诱导猪红细胞凋亡并促进猪外周血单核细胞的吞噬作用
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作者 杨云龙 冯永智 +4 位作者 高琦 郑佳琛 王衡 张桂红 龚浪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3948-3955,共8页
本研究旨在探讨非洲猪瘟病毒(ASFV)对猪红细胞(RBCs)的作用以及对猪外周血单核细胞(PBMs)吞噬能力的影响。试验采用流式细胞术检测ASFV侵染猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)和猪红细胞(RBCs)的能力,并检测ASFV诱导RBCs发生凋亡的百分比;同时采... 本研究旨在探讨非洲猪瘟病毒(ASFV)对猪红细胞(RBCs)的作用以及对猪外周血单核细胞(PBMs)吞噬能力的影响。试验采用流式细胞术检测ASFV侵染猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)和猪红细胞(RBCs)的能力,并检测ASFV诱导RBCs发生凋亡的百分比;同时采用激光共聚焦试验(Confocal)观察ASFV诱导RBCs发生凋亡是否影响PBMs的吞噬能力。结果显示,ASFV不能入侵RBCs,但以时间和剂量依赖性方式诱导RBCs发生凋亡。0.1 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导1.27%、3.23%、7.39%和8.56%的RBCs发生凋亡;1 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导1.54%、3.73%、8.46%和10.74%的RBCs发生凋亡;3 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导2.65%、5.01%、12.44%和18.61%的RBCs发生凋亡。同时,凋亡的RBCs可以增加PBMs对黄绿色荧光微球的吞噬数量,ASFV诱导RBCs凋亡的百分比越高,PBMs吞噬黄绿色荧光微球的数量越多。综上所述,ASFV不能侵染猪RBCs,但可以以时间和剂量依赖性方式诱导RBCs发生凋亡并增强PBMs的吞噬功能。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 猪红细胞 细胞凋亡 吞噬
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