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枯草芽孢杆菌bgIS基因在酵母染色体上整合 被引量：1
1
作者 张绍松 陈永青 +2 位作者 郑伟军 黄兴奇 韩英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期266-271,共6页
将枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglS)2.7kbEcoRI片段和酵母染色体rDNA片段克隆到整合型不含酵母自主复制序列(Autonomusly replicating sequence)的大肠杆菌/酵母菌穿梭质粒YIP5上,构建成YIP5-bglS-rDNA的杂种质粒PCZH,转化S.cerev... 将枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglS)2.7kbEcoRI片段和酵母染色体rDNA片段克隆到整合型不含酵母自主复制序列(Autonomusly replicating sequence)的大肠杆菌/酵母菌穿梭质粒YIP5上,构建成YIP5-bglS-rDNA的杂种质粒PCZH,转化S.cerevisiae并得到表达。稳定性测定表明,Y33(PCZH101)和Y33(PCZH104)在无选择压力的YEPD培养基中繁殖70代以上,两个转化子90％以上的酵母细胞仍含有质粒并且遗传特征与染色体行为相似。以bglS基因作探针,与酵母染色体DNA的Southern bloot分子杂交证实bglS基因已整合到酵母菌染色体上。 展开更多
关键词 bgIS基因 整合 枯草芽孢杆菌
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松质骨骨折愈合方式的实验研究 被引量：1
2
作者 陈永强 史定伟 +2 位作者 裘世静 戴克戎 朱乃硕 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第2期103-106,共4页
目的研究兔股骨髁间截骨后松质骨骨折愈合方式。方法采用成年新西兰兔30只。在兔股骨髁间作完全性截骨后，分别采用皮质骨和松质骨螺钉内固定。术后3d，1、2、3和6周截取标本进行光镜观察和核酸原位杂交分析。结果采用皮质骨螺钉固定时... 目的研究兔股骨髁间截骨后松质骨骨折愈合方式。方法采用成年新西兰兔30只。在兔股骨髁间作完全性截骨后，分别采用皮质骨和松质骨螺钉内固定。术后3d，1、2、3和6周截取标本进行光镜观察和核酸原位杂交分析。结果采用皮质骨螺钉固定时，其愈合方式主要通过编织骨修复骨小梁。采用松质骨螺钉固定，其愈合方式主要通过板层骨重建骨小梁。结论兔股骨髁间截骨后，松质骨骨折愈合存在着直接骨形成和间接骨形成两种愈合方式。 展开更多
关键词 松质骨骨折 骨折愈合 光镜观察 核酸原位杂交
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用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件 被引量：11
3
作者 刘志学 张旭 +4 位作者 徐亚南 何艺园 马向前 沈大棱 唐克轩 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期439-443,共5页
用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条... 用带有ｇｕｓ报告基因的农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＣＡＭＢＩＡ１３０１ 转化水稻品种鄂宜１０５ 成熟胚诱导的愈伤组织，以ｇｕｓ基因瞬间表达活性为指标测定转化频率，对于利用ｐＣＡＭＢＩＡ 表达载体系列进行水稻遗传转化的最佳条件进行了初步的研究．结果表明：最适菌液浓度值为Ｄ（６００）＝ １．０；最适共培养温度为２２～２８ ℃；共培养培养基的ｐＨ 值在５．２～６．２ 这一较宽的范围内均可．共培养时间以不超过３ ｄ 为宜；在共培养培养基中加入乙酰丁香酮对提高转化效率非常重要，而在菌液中加入乙酰丁香酮处理对提高转化效率作用不大．但不同品种，甚至不同转化受体之间存在一定的差别，其最佳转化条件应视具体情况在此基础上加以摸索． 展开更多
关键词 pCAMBIA载体 农杆菌 水稻 遗传转化 LBA4404
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猪口蹄疫病毒基因工程疫苗的工程菌的发酵研究 被引量：1
4
作者 江培 郭杰炎 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期496-500,共5页
在猪口蹄疫病毒（FMDV）活性肽VP1融合蛋白基因工程菌E．coliC500构建成功的基础上，研究了C500的质粒稳定性，C500在4种不同培养基中的生长曲线，以及不同种龄、接种量、装液量、碳源、氮源对菌体生长的影响，确定了最适基本培养条件... 在猪口蹄疫病毒（FMDV）活性肽VP1融合蛋白基因工程菌E．coliC500构建成功的基础上，研究了C500的质粒稳定性，C500在4种不同培养基中的生长曲线，以及不同种龄、接种量、装液量、碳源、氮源对菌体生长的影响，确定了最适基本培养条件．在此基础上，进行了5L自控罐的发酵研究，通过发酵条件的改变，菌体浓度的D（600）值由4．5提高到30左右． 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 猪病 发酵 基因工程 疫苗
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同种异体皮质骨修复过程中胶原基因的表达及其应力适应性 被引量：5
5
作者 汤亭亭 戴克戎 朱乃硕 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期9-11,共3页
目的探讨同种异体皮质骨修复过程中胶原基因的表达情况及其应力适应性。方法制造兔双侧尺骨缺损１．０ｃｍ，并行骨移植。后一侧承受正常生理载荷，另侧承受低载荷的动物模型；利用核酸分子原位杂交技术，分阶段比较同种异体皮质骨修复... 目的探讨同种异体皮质骨修复过程中胶原基因的表达情况及其应力适应性。方法制造兔双侧尺骨缺损１．０ｃｍ，并行骨移植。后一侧承受正常生理载荷，另侧承受低载荷的动物模型；利用核酸分子原位杂交技术，分阶段比较同种异体皮质骨修复过程中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原基因的表达情况。结果同种异体皮质骨植入后，植入骨一宿主骨界面间连接的方式是在纤维骨痴的基础上直接成骨。愈合过程中只有Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。移植骨内部修复是先出现大量吸收腔，继而在吸收腔内出现大量表达１型胶原基因的细胞。从第４周开始，在移植骨内部的骨吸收陷窝内，正常载荷侧１型胶原的基因表达比低载荷侧更为明显。结论不同载荷可以影响移植骨修复过程中胶原基因的表达方式。 展开更多
关键词 骨移植 骨修复 胶原 皮质骨 同种异体骨
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气味沙雷氏菌蛋白组分分离及其体外抗癌活性 被引量：1
6
作者 王旭 彭武林 +2 位作者 刘启鼎 王洪海 陈永青 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期507-511,共5页
用SDS－PAGE（聚丙稀酰胺凝胶电泳）对经超声波处理的气味沙雷氏菌（Serratiaodorifera）全菌体进行分离，切胶分别洗脱．经丙酮沉淀、脱盐处理后得到九个蛋白组分．将九个组分分别用L929，QGY肿瘤细胞为靶细胞进行细胞毒性试验（MTT）... 用SDS－PAGE（聚丙稀酰胺凝胶电泳）对经超声波处理的气味沙雷氏菌（Serratiaodorifera）全菌体进行分离，切胶分别洗脱．经丙酮沉淀、脱盐处理后得到九个蛋白组分．将九个组分分别用L929，QGY肿瘤细胞为靶细胞进行细胞毒性试验（MTT），经初步鉴定其中两个组分具有抗癌细胞活性．组分F6相对分子质量范围为28000～33000．其抑制50％细胞生长的蛋白浓度（IC(50)）：对L929细胞为0．04610mg／ml，对QGY细胞为0．01250mg／ml．活性组分F9相对分子质量范围在15500～17000之间，其IC(50)对L929细胞为0．02790mg／ml，对QGY细胞为0．04307mg／ml．而F6、F9对WISH细胞却没有抑制作用，表明F6、F9能够体外直接抑制癌细胞生长． 展开更多
关键词 抗肿瘤蛋白 细胞毒性 气味沙雷氏菌 微生态制剂
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核酶转基因载体的构建及在烟草原生质体中对TMV感染的抑制作用 被引量：3
7
作者 杨建华 王华林 +1 位作者 于善谦 章道道 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期547-550,共4页
设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酸Rz－2，分别以pKyLx7和pBin19为载体，构建含Rz－2基因及核酸和底物连接的RzSb－2基因的重组质粒，通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒．重组Ti质粒通过PEG法转化烟草原生质体，同时... 设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酸Rz－2，分别以pKyLx7和pBin19为载体，构建含Rz－2基因及核酸和底物连接的RzSb－2基因的重组质粒，通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒．重组Ti质粒通过PEG法转化烟草原生质体，同时对转化的原生质体接种TMVc一定时间后以半叶法检测原生质体中病毒的侵染性．结果表明转基因原生质体中TMV侵染性明显低于未转基因的对照，推测病毒在转基因的原生质体中复制受到干扰；且核酸Rz－2（正向）表达后作用最为明显，核酸连底物RzSb－2（正向）与RzSb～2（反向）之间有明显差别． 展开更多
关键词 核酶 烟草花叶病毒 原生质体 转基因载体
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人染色体17q12区雨330kb范围内表达顺序的筛选
8
作者 朱光旦 余龙 +3 位作者 黄昕 黄浩杰 郑其平 赵寿元 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期234-238,共5页
用定位于人染色体17q12区带的长约330kbYAC克隆500D09（取自法国人类多态性研究中心YAC库）作为杂交探针，筛选人骨髓、胎脑、胎肾、骨骼肌和睾丸等五种组织的cDNA库（2×105～3×105pfu／库），从中获得102个初级阳性克隆．初... 用定位于人染色体17q12区带的长约330kbYAC克隆500D09（取自法国人类多态性研究中心YAC库）作为杂交探针，筛选人骨髓、胎脑、胎肾、骨骼肌和睾丸等五种组织的cDNA库（2×105～3×105pfu／库），从中获得102个初级阳性克隆．初级克隆经PCR扩增，分别与人基因组DNA、酵母基因组DNA和人rDNA探针作dotblot杂交分析，排除其中假阳性克隆后，复筛得到32个候选克隆．对其中2个候选克隆B4511和S5511分别测定143bp和147bp序列．经查新和同源性分析，这两个片段与已知基因的同源性均小于50％，提示它们可能是来自于新基因的表达顺序． 展开更多
关键词 17q12区带 基因表达 遗传性疾病 染色体
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猪口蹄病毒VP1活性肽融合蛋自的纯化
9
作者 江培 郭杰炎 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期501-504,共4页
在猪口蹄疫病毒（FMDV）活性肽VP1融合蛋白基因工程菌E．coliC500构建成功的基础上，确定了融合蛋白的分子质量约为71．0ku．对于融合蛋白的提纯，确定了超声波破壁，尿素分级纯化，葡聚糖G－100柱层析，DEAE纤维素DE－52柱层析的方法... 在猪口蹄疫病毒（FMDV）活性肽VP1融合蛋白基因工程菌E．coliC500构建成功的基础上，确定了融合蛋白的分子质量约为71．0ku．对于融合蛋白的提纯，确定了超声波破壁，尿素分级纯化，葡聚糖G－100柱层析，DEAE纤维素DE－52柱层析的方法，将目的蛋白提纯了6．75倍，SDS－PAGE呈一条带．并比较了融合蛋白的半乳糖苷酶反应（ONPG）和酶的温度敏感性等性质的变化． 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 融合蛋白 猪病 活性肽
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