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超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究 被引量：7
1
作者 陈钰 钟江 +4 位作者 徐健 陈中才 郭业磊 金婷 张继慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期943-946,共4页
目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激... 目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞,3d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力。用MTT染色方法记录细胞增殖的A值。以ConA活化的淋巴细胞做参照,用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性。结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比,SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低,细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04(P<0.01,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应,尤其抑制ConA活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+/NK1.1+NKT细胞亚群显著增加(P<0.05和P<0.01,n=4)。ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+NKT细胞亚群有关,它们由T细胞分化而来。CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞没有参与耐受性调节。 展开更多
关键词 NKT细胞亚群 超抗原 SEB 免疫耐受
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超抗原SEB诱导的免疫耐受与细胞因子无关 被引量：4
2
作者 陈钰 郭业磊 +1 位作者 钟江 陈中才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期393-396,共4页
目的研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)诱导的耐受效应和耐受调节机制。方法收集SEB活化10天的细胞,充分洗涤后做为效应细胞,分别与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养,用MTT方法... 目的研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)诱导的耐受效应和耐受调节机制。方法收集SEB活化10天的细胞,充分洗涤后做为效应细胞,分别与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养,用MTT方法测定细胞的耐受性应答反应。正常淋巴细胞在与ConA、LPS、IL-2共同培养的同时添加效应细胞,用MTT方法测定效应细胞的抑制性应答反应功能。流式细胞技术解析耐受性效应细胞类型。结果效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低(P<0.01,n=3),但保持对ConA的应答反应能力。效应细胞抑制正常淋巴细胞与ConA、LPS和IL-2的应答反应(P<0.01,n=3),尤其抑制ConA和IL-2诱导的细胞增殖。SEB活化的效应细胞中CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+和CD4+NK1.1+NKT细胞以及TcRVβ8+T、CD8+T细胞数量明显增加(P<0.01和P<0.05,n=4)。结论超抗原SEB诱导的耐受性应答反应是效应细胞的直接作用,与细胞因子无关;这些效应细胞能抑制T淋巴细胞增殖,并保存识别ConA的受体功能。 展开更多
关键词 超抗原SEB 免疫耐受 细胞因子 NKT细胞
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超抗原SEB活化的NKT细胞亚群及耐受功能的研究 被引量：4
3
作者 陈钰 钟江 +3 位作者 徐健 陈中才 张继慧 金婷 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期23-26,共4页
目的研究多肽类抗原-超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)活化的NKT细胞亚群及耐受特征。方法小鼠脾细胞分别与SEB和ConA体外培养,MTT方法测定细胞增殖;特异性耐受特征的研究使用体外活化第3天的细胞,吸出... 目的研究多肽类抗原-超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)活化的NKT细胞亚群及耐受特征。方法小鼠脾细胞分别与SEB和ConA体外培养,MTT方法测定细胞增殖;特异性耐受特征的研究使用体外活化第3天的细胞,吸出上清后添加二次抗原ConA、LPS、IL-2,继续培养3 d,MTT方法测定细胞对二次抗原的应答反应能力。用流式细胞测定法解析SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、5、10和15天时的T和NKT淋巴细胞亚群。结果SEB和ConA均诱导了小鼠淋巴细胞在体外增殖;SEB活化的淋巴细胞对ConA、LPS和IL-2的二次应答反应能力消失,细胞增殖的OD570nm值由一次应答反应的0.433±0.07分别下降到0.19±0.01、0.14±0.02和0.15±0.04(P<0.01)。ConA活化的淋巴细胞的二次应答反应依然存在并依赖IL-2。SEB活化的淋巴细胞是CD4+NK1.1+和CD8+NK1.1+NKT细胞,而不是CD4-CD8-NKT细胞。ConA活化的淋巴细胞是CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞并包括了CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论除了α-Calcer脂多糖类抗原能够活化NKT细胞,多肽类超抗原SEB也能活化NKT细胞并具有特异性免疫耐受功能。能够介导免疫耐受的NKT细胞亚群可能是SEB活化的CD4+、CD8+NKT细胞而不是CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。 展开更多
关键词 NKT细胞亚群 超抗原SEB 免疫耐受
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超抗原SEB活化的NKT细胞亚群形态和分化途径的研究 被引量：4
4
作者 陈钰 郭业磊 钟江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期596-599,共4页
目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大... 目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大淋巴细胞群表面CD69的表达、NKT细胞亚群百分数和不同NKT细胞亚群的分化途径。倒置显微镜400倍下比较大淋巴细胞的形态。结果:SEB活化的淋巴细胞和大淋巴细胞表面CD69分子表达由正常值的0.11%分别提高到55.00%和68.95%。大细胞群中CD8+和TCRVB8+NKT细胞亚群的百分数由原始的0.36%和0.81%分别提高到30.29%和31.48%。这些细胞位于流式细胞图的上部,是大体积细胞群。显微镜下显示SEB活化的大淋巴细胞体积不仅大于ConA活化的T淋巴细胞,而且比正常巨噬细胞大5倍以上,是非黏附性细胞。胞内质粒松散、胞质与核之比>1。SEB活化的CD8+和TCRVβ8+NKT细胞亚群均由T细胞直接分化而来。结论:SEB活化10d的NKT细胞亚群主要是CD8+NK1.1+和TCRVβ8+NK1.1+的NKT细胞。这些细胞是大体积淋巴细胞,应属于T细胞的亚群。 展开更多
关键词 NKT细胞亚群 超抗原 细胞形态 细胞分化
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体外活化CD8^+ NKT细胞的肿瘤杀伤作用 被引量：2
5
作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期947-949,共3页
目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。经荧光抗体染色、流式细胞术(FCM)解析效应细胞表面CD69分子的表达率和NKT细胞亚群百分数。结果:在效靶比20∶1时,效应细胞杀伤K562和A549细胞的百分率分别达到75.4%和67.2%(P<0.05,n=3)。效应细胞的上清液未显示杀伤作用。效应细胞表面CD69分子的表达率随培养时间延长而增加,由0 d的0.11%增加到30 d的98.23%(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD8+ NKT细胞亚群随扩增时间延长而增加,由正常值(0 d)的0.36%增加到30 d的41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+ NKT细胞在杀伤肿瘤细胞中起了重要作用。杀伤肿瘤细胞的作用机制是效应细胞的直接作用,与游离的细胞因子无关。 展开更多
关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 肿瘤免疫
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耐受性CD8^+ NKT细胞体外增殖能力的鉴定
6
作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期170-172,共3页
目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子... 目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子的表达率和增殖能力。CFSE标记的鼠脾细胞与SEB共培养5d和10d后,荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69的百分数和增殖能力。SEB活化的第10天细胞经CFSE标记后在IL-2的协同作用下继续培养10d,荧光染色,FCM解析这群细胞的增殖能力、活性分子CD69的表达率和NKT细胞亚群的变化情况。结果:ConA、LPS和SEB三者均可以刺激小鼠脾细胞增殖。ConA和LPS在3d内可以使细胞增殖3代,且CD69的表达率为74.19%和41.56%;SEB在5d和10d内分别可以使细胞增殖5代和7代,细胞表面CD69的表达率为32.09%和48.66%。SEB活化的10d细胞可以在IL-2的协同下继续传代培养10d,可以增殖7代;这群细胞中CD8+ NKT细胞亚群,由原始的0.36%增加到38.58%;细胞表面CD69分子由正常值的0.11%提高到83.74%。结论:超抗原SEB活化的CD8+ NKT细胞可以在体外进行增殖培养,且这些细胞是活性化的细胞。利用CFSE标记细胞,FCM可以检测耐受性CD8+ NKT细胞在体外的增殖水平。 展开更多
关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 流式细胞术 CFSE
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耐受调节性CD8^+NKT细胞体外稳定性的研究
7
作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期852-855,共4页
目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力。体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况。效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群。结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P<0.05,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P<0.05,n=3)。效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20 d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P<0.05,n=3)。在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在。 展开更多
关键词 CD8+NKT细胞 免疫耐受 超抗原 SEB
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体外扩增小鼠CD8^+NK1.1^+NKT细胞的研究
8
作者 陈钰 郭业磊 +1 位作者 钟江 张世仑 《军医进修学院学报》 CAS 2010年第10期1019-1022,共4页
目的研究体外扩增小鼠CD8+NK1.1+NKT细胞的表面分子标志、分化途径及细胞属性。方法获取超抗原SEB活化后体外扩增的小鼠效应细胞,用抗CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、NK1.1-APC、TcRVβ8-FITC和CD69-FITC荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FCM... 目的研究体外扩增小鼠CD8+NK1.1+NKT细胞的表面分子标志、分化途径及细胞属性。方法获取超抗原SEB活化后体外扩增的小鼠效应细胞,用抗CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、NK1.1-APC、TcRVβ8-FITC和CD69-FITC荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FCMCalibueBD,USA)鉴定CD8+NK1.1+NKT细胞的表面分子标志和分化途径。用逆转录聚合酶链反应测定细胞内各种细胞因子和Foxp3基因转录水平。结果体外扩增的细胞中91.92%是CD8+T细胞,其中22.75%的细胞是CD8+NN1.1+NKT细胞,高于正常值(0.21±0.19,n=12)108倍以上。19.61%NKT细胞是TcRVβ8+NN1.1+NKT细胞。CD69分子的表达由原始0.11%增加到85.95%。CD4+T、CD3+T细胞亚群和CD4+NKT、CD3+NKT及CD4-CD8-NKT细胞亚群没有增加。扩增细胞TGF-β的mRNA表达呈阳性,不表达Foxp3和细胞因子IL-2、4、5、6、10及IFN-γ。CD8+NKT细胞直接由CD8+T细胞分化而来。结论 CD8+NK1.1+NKT细胞的分子特征为CD69+Foxp3-TcRVβ8+TGF-β+CD8+NK1.1+;它们既不是CD8+T调节细胞(Treg.),也不是CD4+NKT细胞,直接由CD8+T细胞分化而来,带有TCRVβ8受体,应属于T细胞亚群。 展开更多
关键词 CD8^+NKT细胞 小鼠 葡萄球菌肠毒素B 免疫耐受
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IL-2和GM-CSF免疫治疗耐多药结核病的研究 被引量：4
9
作者 张雍容 刘建 +4 位作者 王勇 鲜巧阳 邵凌云 杨忠 王小宁 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期801-808,共8页
本研究在结核病小鼠模型中评估了白细胞介素-2(IL-2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与抗菌药物异烟肼(INH)、利福平(RIF)联合使用治疗结核菌感染的治疗效果.首先,在药物敏感型结核杆菌H37Rv感染小鼠模型中,通过测定存活率、小... 本研究在结核病小鼠模型中评估了白细胞介素-2(IL-2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与抗菌药物异烟肼(INH)、利福平(RIF)联合使用治疗结核菌感染的治疗效果.首先,在药物敏感型结核杆菌H37Rv感染小鼠模型中,通过测定存活率、小鼠肺部和脾脏菌落数以及分析肺部组织病理情况评估IL-2和GM-CSF的治疗效果.然后,在耐多药结核菌株OB35感染小鼠模型中评估免疫治疗方案的治疗效果.在H37Rv感染模型中,与非治疗组小鼠相比,经IL-2或GM-CSF单细胞因子治疗后的小鼠肺部的菌落数分别减少了0.82lg CFU(P<0.01)和0.58lg CFU(P<0.05),而脾脏的菌落数分别减少了1.42lg CFU(P<0.01)和1.22lg CFU(P<0.01).虽然当单细胞因子与INH+RIF(HR)联合使用时,并未在抑菌率上表现出任何优势,但是肺部组织病理切片显示联合免疫治疗组小鼠肺部损伤明显减弱.在耐药结核杆菌OB35感染小鼠模型中,和未治疗组以及抗菌药物治疗组相比,免疫治疗能有效降低肺脾菌落数,同时减少肺部损伤.值得一提的是,相对于其他治疗组,两种细胞因子共同参与的免疫治疗能进一步提高小鼠存活率到30%;而且能比单一抗菌药物治疗更有效地减少肺脾菌落数(其中肺部减少1.02lg CFU,脾脏减少1.34lg CFU,P<0.01).该研究表明,IL-2和GM-CSF共同参与的免疫治疗可能是治疗耐药结核病(MDR-TB)的有效策略之一. 展开更多
关键词 结核病 耐多药结核 IL-2 GM-CSF 免疫治疗
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