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新型CD47阻断型单克隆抗体的筛选及其抗结直肠癌活性观察
1
作者 卢杨 袁向飞 +2 位作者 张砚君 范冬梅 熊冬生 《山东医药》 2025年第4期37-41,共5页
目的筛选靶向人CD47蛋白的新型阻断型单克隆抗体并观察其抗结直肠癌活性,为靶向人CD47靶点的免疫治疗提供新选择。方法利用单克隆抗体筛选技术获得能够稳定分泌CD47抗体的鼠源杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水,纯化获得抗体纯品47-F。采用流... 目的筛选靶向人CD47蛋白的新型阻断型单克隆抗体并观察其抗结直肠癌活性,为靶向人CD47靶点的免疫治疗提供新选择。方法利用单克隆抗体筛选技术获得能够稳定分泌CD47抗体的鼠源杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水,纯化获得抗体纯品47-F。采用流式细胞术检测47-F抗体与CD47蛋白的亲和力,观察47-F抗体与商品CD47抗体B6H12.2对靶细胞结合的竞争性;采用红细胞凝集实验检测47-F抗体的红细胞毒性。分离人外周血单核细胞来源的巨噬细胞,采用细胞吞噬实验观察47-F抗体、B6H12.2抗体及同型对照抗体对人巨噬细胞吞噬结肠癌细胞HCT116和SW620能力的体外促进作用。建立小鼠皮下结肠癌移植瘤模型,采用分层随机分组法将小鼠分为抗体给药组和PBS对照组,观察47-F抗体对小鼠结肠癌移植瘤生长的体内抑制作用。结果47-F抗体能够有效结合CD47蛋白,具有较高亲和力;47-F抗体能有效竞争商品抗体B6H12.2对人CD47蛋白的结合,且具有浓度梯度依赖性。红细胞凝集实验结果显示,47-F抗体未引起红细胞凝集,红细胞毒性较低。与对照抗体比较,47-F抗体、B6H12.2抗体均提高了人巨噬细胞对SW620、hCT116细胞的吞噬率,且47-F抗体的促吞噬作用高于B6H12.2抗体(P均<0.05)。47-F抗体给药第19天,抗体给药组肿瘤体积小于PBS对照组(P<0.05),肿瘤抑制率为80.6%。结论成功筛选获得了一株新型CD47阻断型单克隆抗体47-F;该抗体具有亲和力强、促吞噬活性强、低红细胞毒性的特点,抗结直肠癌活性较强。 展开更多
关键词 CD47 单克隆抗体 结直肠癌 肿瘤相关巨噬细胞 红细胞毒性
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抗人BCMA抗体的人源化设计及其体外活性鉴定
2
作者 刘若琦 范冬梅 +3 位作者 雷晓敏 卢杨 袁向飞 熊梦裳 《生命的化学》 CAS 2022年第4期788-796,共9页
BCMA高特异地表达于多发性骨髓瘤细胞表面,是多发性骨髓瘤的理想治疗靶点。为了降低鼠源抗体的人抗鼠抗体反应,使其在临床得到更好的应用,本文基于鼠源抗人BCMA抗体序列,获得了靶向人BCMA的人源化抗体,并在体外验证人源化是否影响该抗... BCMA高特异地表达于多发性骨髓瘤细胞表面,是多发性骨髓瘤的理想治疗靶点。为了降低鼠源抗体的人抗鼠抗体反应,使其在临床得到更好的应用,本文基于鼠源抗人BCMA抗体序列,获得了靶向人BCMA的人源化抗体,并在体外验证人源化是否影响该抗体的亲和性和特异性。本文将抗人BCMA抗体69G8的可变区序列与人源抗体序列库进行比对,确定人源化抗体模板。利用Discovery Studio软件对抗人BCMA抗体69G8进行人源化设计,获得人源化抗体h69G8,随后利用293T真核表达系统对人源化前后的69G8进行scFv形式的表达并进行亲和力测定。人源化的69G8全抗被合成出来后,对其进行亲和常数、内化特性以及结合特异性等方面的比较,发现其亲和力等特性并无改变。在此基础上,对人源化全抗进行合成,结果亦证明其保留了鼠源抗体的高亲和力、高特异性以及内化特性。本实验对鼠源抗人BCMA抗体69G8进行了人源化,人源化不影响其体外结合活性和亲和力,为69G8未来在临床更好地应用打下了基础。 展开更多
关键词 BCMA 多发性骨髓瘤 抗体人源化 亲和力
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