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京尼平的微生物转化及其交联特性的测定分析 被引量：2
1
作者 赵东 荆玮 +2 位作者 姚盟成 董逸楠 李玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期146-151,共6页
从土壤中富集筛选获得一株产β-葡萄糖苷酶的菌株,经菌落的形态和18S rDNA鉴定确定为黑曲霉。将筛选出的黑曲霉菌株接种于发酵培养基,利用含有京尼平苷的栀子粉作为底物发酵,通过对发酵条件优化,得到在装液量50/250 mL,栀子粉浓度为10%... 从土壤中富集筛选获得一株产β-葡萄糖苷酶的菌株,经菌落的形态和18S rDNA鉴定确定为黑曲霉。将筛选出的黑曲霉菌株接种于发酵培养基,利用含有京尼平苷的栀子粉作为底物发酵,通过对发酵条件优化,得到在装液量50/250 mL,栀子粉浓度为10%,转速为180 r/min,发酵时间为96 h时,京尼平的微生物转化率达到最大22%。这种微生物转化法简化了京尼平的生产工艺,大大降低了生产成本。利用微生物转化获得的京尼平交联胶原蛋白材料,研究表明其具有较好的交联特性,是一种在食品、医药等领域都具有应用前景的生物交联剂。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 黑曲霉 京尼平 微生物转化 交联
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碱性木聚糖酶产生菌的筛选、XynG1-3基因克隆表达及酶学性质研究 被引量：7
2
作者 郑宏臣 刘逸寒 +3 位作者 刘晓光 韩杨 王建玲 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期106-113,共8页
从造纸厂周边碱性土壤中分离、筛选到一株产碱性木聚糖酶的细菌G1-3,根据形态和生理、生化特性并结合16SrDNA序列分析,鉴定菌株G1-3为短小芽孢杆菌,命名为Bacillus pumilusG1-3。利用克隆表达载体pET-22b(+),实现了Bacillus pumilusG1-... 从造纸厂周边碱性土壤中分离、筛选到一株产碱性木聚糖酶的细菌G1-3,根据形态和生理、生化特性并结合16SrDNA序列分析,鉴定菌株G1-3为短小芽孢杆菌,命名为Bacillus pumilusG1-3。利用克隆表达载体pET-22b(+),实现了Bacillus pumilusG1-3碱性木聚糖酶基因XynG1-3在E.coliBL21中的表达。经氨基酸序列分析,木聚糖酶XynG1-3属于GH11家族的小分子木聚糖酶。重组木聚糖酶XynG1-3经镍离子亲和层析一步纯化后,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测其分子量为24 kD。对酶学性质进行分析,重组酶XynG1-3最适作用温度为55℃,最适作用pH为8.0;该酶在60℃保温1 h,残余酶活保持为原来的56%,pH作用范围较广,在pH10.0下保存1 h,残余酶活仍能保持75%,为耐碱性木聚糖酶。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 碱性木聚糖酶 筛选 鉴定 克隆 表达 酶学性质
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赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化 被引量：1
3
作者 黄云雁 黎明 +3 位作者 刘萌 孙昕 周丽颖 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期94-100,共7页
旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,... 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。 展开更多
关键词 尸胺 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白CadB 谷氨酸棒杆菌 赖氨酸脱羧酶 共表达
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高产γ-氨基丁酸的棉子糖肠球菌的筛选、鉴定及其摇瓶发酵条件的优化 被引量：3
4
作者 陈慧敏 高强 +4 位作者 苏喆 王梦晓 段强 张云泽 司晓光 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1642-1652,共11页
【目的】在中国传统发酵泡菜中分离出高产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌。【方法】对分离自泡菜中的菌株M1进行形态观察、生理生化特性鉴定及其16S rDNA序列分析,实验采用单因素和正交设计对以MRS培养基为基础的GABA... 【目的】在中国传统发酵泡菜中分离出高产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌。【方法】对分离自泡菜中的菌株M1进行形态观察、生理生化特性鉴定及其16S rDNA序列分析,实验采用单因素和正交设计对以MRS培养基为基础的GABA发酵培养基与摇瓶发酵条件进行了优化。【结果】菌株M1的形态培养和生理生化特征均符合肠球菌属(Enterococcus)特征,其16S rDNA序列与Enterococcus raffinosusSS1278 16S rDNA序列同源性达99%,鉴定为棉子糖肠球菌(Enterococcus raffinosus)。优化该菌株产GABA的发酵培养基的实验发现,最佳摇瓶发酵条件为:接种量10%,发酵温度30°C,培养初始pH 5.5,发酵周期60 h,谷氨酸一钠底物浓度10%,GABA产量提高了1.22倍。【结论】棉子糖肠球菌(E.raffinosus)M1菌株具有工业化发酵生产GABA的潜力。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 棉子糖肠球菌 泡菜 分离鉴定 培养基与发酵优化
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产异丁醇关键基因在大肠杆菌中表达的研究 被引量：2
5
作者 潘超强 高强 +3 位作者 郑春阳 孟庆艳 段强 冯少龙 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期912-920,共9页
【目的】改造大肠杆菌缬氨酸合成途径,使其能够代谢合成异丁醇。【方法】将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)1.2829的2-酮异戊酸脱羧酶基因(kivD)和醇脱氢酶基因(adhA)串联克隆到大肠杆菌DH5α宿主中表达。【结果】经过改造的宿主菌发酵2... 【目的】改造大肠杆菌缬氨酸合成途径,使其能够代谢合成异丁醇。【方法】将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)1.2829的2-酮异戊酸脱羧酶基因(kivD)和醇脱氢酶基因(adhA)串联克隆到大肠杆菌DH5α宿主中表达。【结果】经过改造的宿主菌发酵24 h后异丁醇产量为0.12 g/L。酶活测定实验发现,kivD和adhA基因在宿主菌中均得到表达,但由于KivD的低表达量导致宿主菌最终的异丁醇合成能力偏低。通过研究温度和pH对KivD和AdhA酶活的影响,最终选定二者的最适温度为30°C,最适pH为6.5。【结论】通过向宿主菌导入外源异丁醇合成基因能够改造其自身代谢途径,从而合成异丁醇。 展开更多
关键词 2-酮异戊酸脱羧酶 醇脱氢酶 大肠杆菌DH5α 异丁醇
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