期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到4篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：3
1
作者 刘东海 张更荣 +2 位作者 张乐鸣 张顺 董虹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-489,共4页
目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C... 目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C端成熟肽部分 ,并克隆到PG5中 ,转化大肠杆菌BL2 1用异丙基 - β -D -半乳糖苷(IPTG)诱导培养。表达产物提纯、复性后 ,进行活性测定。结果 :NGFβcDNA全序列为 10 4 7bp ,所克隆的蛋白编码部分为 6 36bp ,由 2 12个氨基酸组成 ,序列分析结果与Genebank完全一致 ,成熟肽部分表达后 ,经SDS -PAGE电泳在 14kD左右有 1条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并Western印迹证实 ,rNGF约占菌体蛋白 10 %左右。结论 :通过序列分析证实 ,重组NGFβ在大肠杆菌中获得较高水平的表达 。 展开更多
关键词 人神经生长因子β亚基 CDNA 克隆 大肠杆菌 重组 序列分析 基因表达
下载PDF
人绒毛膜促性腺激素β亚基在大肠杆菌中的表达 被引量：2
2
作者 张乐鸣 刘东海 +1 位作者 董虹 张顺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期415-417,共3页
目的 :以该室克隆的PCRⅡ hCGβ载体为模板 ,亚克隆到表达载体PG5中使hCGβ基因在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :改变部分hCGβ序列 ,得到重组PG5 hCGβ载体 ,经序列分析证明 ,再转化到表达菌BL2 1中表达 ,所得包涵体经过柱纯化 ,复... 目的 :以该室克隆的PCRⅡ hCGβ载体为模板 ,亚克隆到表达载体PG5中使hCGβ基因在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :改变部分hCGβ序列 ,得到重组PG5 hCGβ载体 ,经序列分析证明 ,再转化到表达菌BL2 1中表达 ,所得包涵体经过柱纯化 ,复性 ,免疫发光分析和动物试验测定其活性。结果 :经SDS PAGE电泳在 18kD左右有一条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并用Western印迹证实 ,rhCGβ约占菌体总蛋白的 10 % ,活性为 7.8U mg。 结论 :重组hCGβ在大肠杆菌中获得了较高水平的表达。且经复性后有较高的免疫活性和生物活性。 展开更多
关键词 人绒毛膜促性腺激素β亚基 序列分析 大肠杆菌
下载PDF
RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用 被引量：1
3
作者 毛联钢 李克强 +4 位作者 卓文莹 戴晓宇 余永明 冯伟云 乐东海 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期502-507,共6页
目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率... 目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。 展开更多
关键词 RON基因 HT-29细胞 RNAI 侵袭 耐药
原文传递
慢病毒载体介导RNA干扰抑制大肠癌细胞HT29的酪氨酸激酶受体RON基因的表达
4
作者 毛联钢 李克强 +4 位作者 卓文莹 戴晓宇 余永明 乐东海 冯伟云 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期935-939,I0003,共6页
目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足R... 目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29。根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞。应用实时PCR检测各组HT29细胞RONmRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA。结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞。阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)%,RONshRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)%,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)%,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均<0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)%。结论慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的"基因沉默"的手段。 展开更多
关键词 RON HT29细胞 RNA干扰 慢病毒载体
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部