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抗基质金属蛋白酶-2单克隆抗体的制备、鉴定及其应用 被引量：1
1
作者 游牧 刘文 +1 位作者 徐振山 宋礼华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1177-1181,共5页
目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达。方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛... 目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达。方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化mAb。以ELISA、Western blot法对抗体进行鉴定。通过免疫组织化学法与商品化多抗进行对比,并联合CA125将自制抗体应用于临床人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤的检测。结果:人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH合成成功。获取3株稳定分泌抗MMP-2的杂交瘤细胞株(3G10、4D12、1E8),抗体亚型均为IgG1。其中3G10反应性最强。经间接ELISA法检测纯化后抗体的效价达1∶1×106。自制mAb应用于人卵巢癌组织切片和裸鼠模型检测,卵巢癌组织与正常组织之间表达差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢癌患者CA125和MMP-2联合检测阳性率较单一检测高(P<0.01)。自制mAb的染色特性与商品化抗体相似,且检出率较商品化多抗高(P<0.01)。结论:采用人工合成多肽作为免疫原成功制备了与卵巢癌相关的特异性抗MMP-2 mAb。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-2 单克隆抗体 卵巢癌 裸鼠 联合检测
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