人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究 被引量：28

1

作者 曹阳 高华颖 +4 位作者 于黎 袁晓东 李庆伟 汤敏谦 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期9-14,共6页

通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G... 通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞 ,增殖后 ,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养 ,经激素诱导 ,培养液上清通过Western印记检测证明 ,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白 ,分子质量为34kDa;ELISA法测出 ,每升培养基 (含 10 5个细胞 )重组蛋白最高表达量为 6 5mg ;抗菌实验表明 ,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用 ,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 展开更多

关键词 人乳铁蛋白 脂质体 固定化 细胞表达 基因克隆

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应用于染色体步移的PCR扩增技术的研究进展 被引量：33

2

作者 刘博 苏乔 +2 位作者 汤敏谦 袁晓东 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期587-595,共9页

各种建立在PCR基础上染色体步移的方法能够根据已知的基因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T-DNA或转座子的插入位点、染色体测序工作中的空隙填补,从而获得完整... 各种建立在PCR基础上染色体步移的方法能够根据已知的基因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T-DNA或转座子的插入位点、染色体测序工作中的空隙填补,从而获得完整的基因组序列等方面。其方法主要有3种:反向PCR的方法,连接法介导的PCR的方法以及特异引物PCR的方法。文章就各种方法进行举例说明并加以分析比较。 展开更多

关键词 染色体步移 反向PCR 连接法PCR 特异引物PCR

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日本七鳃鳗(Lampetrs japonica)唾液腺cDNA文库的构建 被引量：11

3

作者 李旭霞 逄越 +3 位作者 肖蓉 袁晓东 汤敏谦 李庆伟 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第1期73-75,共3页

以水生动物日本七鳃鳗唾液腺为材料,应用Gubler和Hoffman技术方法,构建以pBluescriptⅡSK(+)载体为基础的日本七鳃鳗唾液腺cDNA筛选文库.通过对文库的鉴定,文库的库容量为1.5×106转化子/μgcDNA,插入片段的平均长度为1.0kb.该文库... 以水生动物日本七鳃鳗唾液腺为材料,应用Gubler和Hoffman技术方法,构建以pBluescriptⅡSK(+)载体为基础的日本七鳃鳗唾液腺cDNA筛选文库.通过对文库的鉴定,文库的库容量为1.5×106转化子/μgcDNA,插入片段的平均长度为1.0kb.该文库保留了日本七鳃鳗唾液腺中蛋白质的分子信息,为进一步研究其组分和作用机理奠定了基础. 展开更多

关键词 日本七鳃鳗 唾液腺 CDNA文库 原口纲

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鸟类线粒体DNA研究概述 被引量：12

4

作者 陈晓芳 李爽 +3 位作者 王黎 袁晓东 汤敏谦 李庆伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期371-375,共5页

线粒体DNA作为理想的分子标记已被广泛用于鸟类种群遗传学和进化遗传学的研究 ,并取得了许多有意义的结果。本文介绍鸟类线粒体DNA的组成、结构特点及多态性的研究 ,综述近年来有关鸟类分子进化研究的进展情况 ,对今后的发展进行了初步... 线粒体DNA作为理想的分子标记已被广泛用于鸟类种群遗传学和进化遗传学的研究 ,并取得了许多有意义的结果。本文介绍鸟类线粒体DNA的组成、结构特点及多态性的研究 ,综述近年来有关鸟类分子进化研究的进展情况 ,对今后的发展进行了初步的探讨。 展开更多

关键词 鸟类 线粒体DNA 多态性 分子进化

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人乳铁蛋白基因克隆及表达载体构建 被引量：9

5

作者 曹阳 李庆伟 +2 位作者 袁晓东 汤敏谦 安利佳 《大连理工大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期696-701,共6页

通过 PCR法扩增出 2 366bp的人乳铁蛋白 c DNA、80 0 bp的山羊β -乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,经 PCR反应连接后 ,克隆到表达载体 p LNCX中 .测序结果表明 :与 Gene Bank中登录的序列相比 ,所获人乳铁蛋白 c DNA序列的同源性为 99.74 ... 通过 PCR法扩增出 2 366bp的人乳铁蛋白 c DNA、80 0 bp的山羊β -乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,经 PCR反应连接后 ,克隆到表达载体 p LNCX中 .测序结果表明 :与 Gene Bank中登录的序列相比 ,所获人乳铁蛋白 c DNA序列的同源性为 99.74 % ,山羊β -乳球蛋白基因 5′端调控序列的同源性为 99.75% .酶切结果证明得到了正确的重组载体 ,可用于乳腺生物反应器的研究 .利用 PCR反应直接克隆目的片段 ,并通过同源序列进行 PCR连接 ,极大提高了克隆的速度和准确性 ,为基因克隆及其表达研究带来了方便 . 展开更多

关键词 基因/乳铁蛋白 Β-乳球蛋白 PCR 同源序列连接

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猛禽类15种鸟类线粒体tRNA基因序列及二级结构的比较研究 被引量：8

6

作者 王翔 孙毅 +4 位作者 袁晓东 汤敏谦 王黎 于业飞 李庆伟 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第4期411-419,共9页

利用PCR方法扩增 13个猛禽类物种线粒体基因组中 3个主要的tRNA基因簇 :IQM (tRNAIle tRNAGln tRNAMet)、WANCY (tRNATrp tRNAAla tRNAAsn tRNACys tRNATyr)和HSL (tRNAHis tRNASer(AGY) tRNALeu(CUN) ) ,测序后结合GenBank已登陆的游... 利用PCR方法扩增 13个猛禽类物种线粒体基因组中 3个主要的tRNA基因簇 :IQM (tRNAIle tRNAGln tRNAMet)、WANCY (tRNATrp tRNAAla tRNAAsn tRNACys tRNATyr)和HSL (tRNAHis tRNASer(AGY) tRNALeu(CUN) ) ,测序后结合GenBank已登陆的游隼和普通相应序列探讨猛禽类共 15种鸟类的分子系统进化。 3个目的片段长度分别为2 12～ 2 14bp、35 3～ 36 2bp、2 0 5～ 2 0 8bp ,通过比较这些tRNA基因序列和二级结构差异 ,发现可变核苷酸位点占47% ,这些变异中 6 7%出现在环区 ,且存在插入和 (或 )缺失。茎区相对保守 ,其中一些变异如双链的互补性碱基突变、G U配对等对于维系tRNA二级结构的稳定性非常重要。以夜鹰为外群分别构建了 15个猛禽类物种共 11个线粒体tRNA基因全序列和茎区序列的NJ树和MP树 ,其中基于全序列的系统发育树分支具有较高的自引导值 ,因此该数据集所反映的猛禽类系统发育关系可能更接近真实水平。系统发育分析显示 ,隼形目鹰科更接近于鸱科而不是隼科 ,而草科的分类地位也与传统的形态学和DNA DNA杂交数据的结论存在分歧。比较物种间tRNA基因二级结构发现 ,部分tRNA基因中的核苷酸插入和缺失特征在科水平具有共同衍征 ,提示这些特征对于猛禽类科间系统发育关系具有较高的参考价值。 展开更多

关键词 猛禽类 tRNA基因簇 二级结构 系统发育

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双齿围沙蚕CYP4基因的克隆及序列分析 被引量：4

7

作者 周一兵 陈雪 +4 位作者 杨大佐 万良 王斌 王丽丽 孙静波 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期507-513,共7页

根据已知的绿沙蚕Nereis virens细胞色素氧化酶CYP342A1保守区设计引物,采用RACE技术首次从双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis体壁肌肉中克隆出细胞色素氧化酶CYP4基因全长序列。分析结果表明,该序列全长为1 857 bp,5'端非翻译区为... 根据已知的绿沙蚕Nereis virens细胞色素氧化酶CYP342A1保守区设计引物,采用RACE技术首次从双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis体壁肌肉中克隆出细胞色素氧化酶CYP4基因全长序列。分析结果表明,该序列全长为1 857 bp,5'端非翻译区为186 bp,3'端非翻译区为225 bp,阅读框为1 446 bp,编码为481个氨基酸。第422～431氨基酸序列符合P450所具有的结构保守共有序列FxxGxxxCxG,第319～322氨基酸序列为K螺旋特征基序ExxR区,第282～294氨基酸序列含有CYP4家族特征序列EVDTFMFEGHDTT。经Blast与GenBank中已知物种的氨基酸序列进行同源性比对,CYP4与多毛类绿沙蚕Nereis virens CYP4BB1、CYP342A1(AY453408)氨基酸同源性为73%、36%,与多毛类小头虫Capitella capitata CYP4AT1(AY574044)同源性为39%。据此推断,双齿围沙蚕CYP4基因属于CYP4B亚家族。 展开更多

关键词 双齿围沙蚕 CYP4 RACE 生物信息学分析

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实时荧光定量聚合酶链反应检测复发性阿弗他溃疡患者中人类疱疹病毒5型和8型的潜伏 被引量：4

8

作者 顾杨 李晶泉 +4 位作者 尚巍 徐昊 李文颜 张虹 陈政翰 《国际口腔医学杂志》 CAS 2008年第2期103-106,共4页

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区... 目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区脱落细胞、病变区组织块及外周血。然后用实时荧光定量PCR检测4种样本中HHV-5和HHV-8的DNA。结果HHV-5仅在试验组患者病损区组织块样本中能检测到,而在对照组的组织块样本中没有检测到。试验组和对照组的血液和唾液样本中均有HHV-5阳性检出,但两组比较其差异无统计学意义(P>0.05);试验组和对照组的脱落细胞样本中均无HHV-5阳性检出。试验组和对照组的4种样本中HHV-8均检出阴性。结论HHV-5在RAU患者的溃疡区可能有潜伏。 展开更多

关键词 复发性阿弗他溃疡 实时荧光定量聚合酶链反应 人类疱疹病毒5型 人类疱疹病毒8型

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碱性内切蛋白酶水解大豆蛋白的研究 被引量：14

9

作者 钱方 邓岩 +3 位作者 王凤翼 周晶 刘海波 季瑛 《大连轻工业学院学报》 2000年第1期40-44,共5页

以大豆分离蛋白为底物 ,通过单因素分析、正交试验以及对水解蛋白曲线分析 ,确定了Al calase碱性内切蛋白酶水解大豆蛋白的最佳水解条件 :底物质量浓度为 60 g/L ,pH值为 7.5,水解温度为 60℃ ,酶 底物比为 4.0mL/kg ,反应时间为 1 0h。

关键词 碱性内切蛋白酶 大豆分离蛋白 酶解条件 水解

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蛋白酶及其大豆蛋白水解物苦味的研究 被引量：29

10

作者 钱方 邓岩 +2 位作者 王凤翼 季瑛 马英侠 《大连轻工业学院学报》 2000年第3期182-186,共5页

为了研究酶解大豆蛋白之苦味 ,在相同条件下将 5种不同的蛋白酶分别作用于大豆分离蛋白。结果发现HAP低温高碱碱性蛋白酶、1 398中性蛋白酶、Flavourzyme复合风味蛋白酶不易产生苦味 ,而胃蛋白酶和Alcalase碱性内切酶较易产生苦味。

关键词 蛋白酶 大豆蛋白 酶解苦味 水解物 食品

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可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建 被引量：2

11

作者 胡学军 李晶泉 +2 位作者 袁晓东 徐红梅 赵东利 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期177-178,共2页

本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体 pUC118为骨架载体 ,在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam110 5I酶切位点上 ,以点突变的方式封闭Eam110 5I酶切位点。经转化大肠杆菌JM10 9证实 ,该改造过的pUC118质粒 ... 本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体 pUC118为骨架载体 ,在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam110 5I酶切位点上 ,以点突变的方式封闭Eam110 5I酶切位点。经转化大肠杆菌JM10 9证实 ,该改造过的pUC118质粒 ,可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam110 5I酶切位点的互补寡聚核苷酸链 (两端具有BamHI接头 )插入已封闭Eam110 5I酶切位点的 pUC118 载体的BamHI位点 ,构成新的克隆载体 ,此质粒命名为 pUC118E。该载体经Eam110 5I酶切后 ,可产生 3′末端突出一个T碱基的T -载体 。 展开更多

关键词 T-载体 pUC118 PCR产物 限制酶Eam1105I 构建

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鸡卵清蛋白基因转录起始点的确定及表达载体的构建 被引量：3

12

作者 逄越 袁晓东 +1 位作者 汤敏谦 李庆伟 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期151-158,共8页

采用 5′RACE方法确定鸡卵清蛋白基因转录起始点的位置 ,通过序列分析得出转录起始点为G ,从而确定出核心启动子及上游调控区的位置。应用PCR技术分别扩增两段卵清蛋白基因上游调控序列的两个片段 ,长度分别为 1 5kb和 2 9kb。经PCR测... 采用 5′RACE方法确定鸡卵清蛋白基因转录起始点的位置 ,通过序列分析得出转录起始点为G ,从而确定出核心启动子及上游调控区的位置。应用PCR技术分别扩增两段卵清蛋白基因上游调控序列的两个片段 ,长度分别为 1 5kb和 2 9kb。经PCR测序和克隆测序后 ,针对突变的碱基进行修复 ,并将修复的两片段分别连接在带有绿色荧光蛋白报告基因pGFP N2载体上 ,为使pGFP N2载体本身的CMV启动子不影响对鸡卵清蛋白启动子的研究 ,将其切去 ,构建了P1.5koval GFP和P2 .9koval GFP两种表达载体 ,经酶切鉴定这两种表达载体构建正确。 展开更多

关键词 转录起始点 鸡卵清蛋白基因 启动子 绿色荧光蛋白(GFP)

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PTEN基因的克隆及其在HepG2细胞中的表达 被引量：1

13

作者 吴园园 张利 +4 位作者 肖继贤 朱晓钰 纪军 孙喜琢 张众 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期473-476,共4页

目的克隆人抑癌基因PTEN全长cDNA,构建其真核表达载体并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法采用RT-PCR法从人正常肝组织中扩增PTEN全长cDNA,将之与pMD18-T Simple Vector连接、测序,获得PTEN基因。将该基因与pcDNA3·1(+)载体连... 目的克隆人抑癌基因PTEN全长cDNA,构建其真核表达载体并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法采用RT-PCR法从人正常肝组织中扩增PTEN全长cDNA,将之与pMD18-T Simple Vector连接、测序,获得PTEN基因。将该基因与pcDNA3·1(+)载体连接,构建pcDNA3.1-PTEN真核表达载体。用该载体转染HepG2细胞,RT-PCR检测PTEN的表达。结果酶切和测序证实PTEN基因克隆和真核表达载体构建成功。HepG2-PTEN细胞中PTEN mRNA的表达显著高于未转染的HepG2细胞。结论人抑癌基因PTEN在人肝癌细胞系HepG2细胞中能够高效、稳定地表达,为其在肝癌基因治疗研究中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤抑制基因 PTEN基因 分子克隆 真核表达载体 转染

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聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验 被引量：1

14

作者 王莹 戴晓冬 +4 位作者 田晓光 崔昱 李杰 袁晓东 孙德建 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期103-106,共4页

目的　建立一种特异、灵敏和简捷的聚合酶链反应 (PCR)检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。方法　在应用一种新的模板纯化处理技术 (Microcon 10 0 )基础上 ,采用适应于检测我国马来丝虫的两套DNA扩增引物(P1、P2与P3、P4) ,对实验感染马来... 目的　建立一种特异、灵敏和简捷的聚合酶链反应 (PCR)检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。方法　在应用一种新的模板纯化处理技术 (Microcon 10 0 )基础上 ,采用适应于检测我国马来丝虫的两套DNA扩增引物(P1、P2与P3、P4) ,对实验感染马来丝虫的中华按蚊进行扩增检测。结果　两套引物均可检出蚊体内不同发育期幼丝虫 (L1、L2 和L3) ,其灵敏度达 1只蚊体内 1/ 6 4条L1和 2 0 0只群体蚊中含有 1只感染蚊 (体内有 1条L3)的水平 ,而对犬恶丝虫及未感染蚊却不能扩增出特异条带。结论　初步建立特异、灵敏和简捷的PCR检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。 展开更多

关键词 马来丝虫 蚊媒 DNA 聚合酶链反应

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小麦醇溶蛋白盒结合因子基因启动子序列(英文) 被引量：1

15

作者 陈占宽 袁晓东 +3 位作者 陈新建 JOY Fleming 郅玉宝 易明林 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2002年第1期79-80,共2页

关键词 小麦 醇溶蛋白盒结合因子 启动子 基因序列

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双齿围沙蚕金属结合蛋白(MPⅡ)基因克隆与表达

16

作者 杨大佐 周一兵 +4 位作者 陈雪 周笑孝 王斌 袁秀堂 孙静波 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期983-991,共9页

根据已知杂色沙蚕(Nereis diversicolor)金属结合蛋白Ⅱ(MPⅡ)部分基因序列设计引物,应用RACE技术从双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)中克隆得到MPⅡcDNA序列全长为904 bp,其中,开放阅读框为357 bp,编码119个氨基酸。Blast比对结果... 根据已知杂色沙蚕(Nereis diversicolor)金属结合蛋白Ⅱ(MPⅡ)部分基因序列设计引物,应用RACE技术从双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)中克隆得到MPⅡcDNA序列全长为904 bp,其中,开放阅读框为357 bp,编码119个氨基酸。Blast比对结果显示,由双齿围沙蚕MPⅡcDNA序列推导的氨基酸序列与多毛类Periserrula leucophryna蚯蚓血红蛋白(Hr)、杂色沙蚕(Nereis diversicolor)蚯蚓肌血红蛋白(MHr)及星虫类Themiste zostericola Hr氨基酸序列的同源性分别为81.51%、77.12%和61.02%,由此推断该cDNA序列可能属于血红蛋白家族。应用Real-time PCR方法,分别研究了沙蚕暴露于Cd2+质量浓度为40 mg/L的环境中12、24、48和72 h后MPⅡ基因表达水平的变化,以及3种质量浓度5、10和20 mg/L Cd2+暴露15 d后MPⅡ基因的表达水平。实验结果表明:(1)沙蚕暴露于40 mg/LCd2+72 h后,MPⅡmRNA表达量显著增加,为空白对照组的12.6倍,表现出极显著差异(P<0.01);(2)不同质量浓度Cd2+诱导15 d后,各组MPⅡmRNA表达量均呈显著升高(P<0.05),达到空白对照组的4.8倍以上,且随Cd2+浓度增大,MPⅡmRNA表达量增加。据此认为,MPⅡ对Cd2+的应激调控发生于转录水平。本研究为海洋沉积环境早期污染的生态风险预测提供了分子生物学依据。 展开更多

关键词 双齿围沙蚕 MPⅡcDNA RACE Cd2+ real-time PCR

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预处理对大豆蛋白酶解的影响 被引量：13

17

作者 钱方 邓岩 +1 位作者 周晶 刘海波 《饮料工业》 1999年第6期33-35,共3页

以Alcalase碱性内切酶为例 ,研究了不同热处理温度、时间对大豆蛋白酶解率的影响 ,实验表明大豆蛋白经 10 0℃ ,2 0min热处理 ,其相对酶解率达 10 0 %。

关键词 预处理 大豆蛋白 酶解 ALCALASE 碱性内切酶

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Arthrobacter sp. W1苯酚降解特性及其羟化酶基因获取 被引量：5

18

作者 谭东徽 曲媛媛 +2 位作者 马放 周集体 袁晓东 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1977-1980,共4页

为获得适应高盐环境的苯酚降解菌及其相关降解基因,从活性污泥中筛选得到一株耐盐苯酚降解菌W1.利用16S rRNA基因序列鉴定该菌株,并考察了其降解特性;同时,采用Tail-PCR方法对菌株苯酚羟化酶基因进行侧翼调取.结果表明:菌株W1为节杆菌(A... 为获得适应高盐环境的苯酚降解菌及其相关降解基因,从活性污泥中筛选得到一株耐盐苯酚降解菌W1.利用16S rRNA基因序列鉴定该菌株,并考察了其降解特性;同时,采用Tail-PCR方法对菌株苯酚羟化酶基因进行侧翼调取.结果表明:菌株W1为节杆菌(Arthrobacter sp.),能在质量分数为1%～10%的NaCl溶液中以苯酚为唯一碳源及能源生长,并能降解对甲基酚、水杨酸、对苯二酚等多种芳香化合物.在质量分数为5%的NaCl溶液中,菌株W1对质量浓度为1 000 mg.L-1的苯酚降解率高达90%以上.侧翼获取的基因全长约为6 kb,其中,编码苯酚羟化酶大亚基基因的全长序列与Alcaligenes sp.相应序列具有较高的同源性,约为93%. 展开更多

关键词 苯酚 羟化酶 TAIL-PCR 生物降解 耐盐菌

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人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的cDNA 5′末端的快速扩增 被引量：2

19

作者 杨菲 汤敏谦 +2 位作者 袁晓东 金凤燮 鱼红闪 《大连轻工业学院学报》 2007年第4期306-309,共4页

根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物,应用"去帽法"原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA 5′端未知序列.测序结果表明,扩增出的5′端未知序列长度为421 bp.通过与已知的CDS区序列比对,确定扩增出... 根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物,应用"去帽法"原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA 5′端未知序列.测序结果表明,扩增出的5′端未知序列长度为421 bp.通过与已知的CDS区序列比对,确定扩增出的5′端未知序列就是目的序列,其5′端非编码区长度为61 bp. 展开更多

关键词 人参皂苷 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶 RNA提取 扩增

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细菌人工染色体文库的构建及应用 被引量：10

20

作者 王晓虹 金黎明 《生物技术通讯》 CAS 2005年第6期668-671,共4页

细菌人工染色体(BAC)是第二代大片段DNA的克隆载体系统,具有容量大、嵌合率低、遗传特性稳定、转化效率高、插入片段易回收、操作简便等优点,因而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究中,并发挥着前所未有的重要作用。本文综述了... 细菌人工染色体(BAC)是第二代大片段DNA的克隆载体系统,具有容量大、嵌合率低、遗传特性稳定、转化效率高、插入片段易回收、操作简便等优点,因而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究中,并发挥着前所未有的重要作用。本文综述了BAC的发展,利用此载体构建基因组文库的程序和鉴定方法,及其在物理图谱构建、图位克隆、基因组测序、转基因技术等研究中的应用。 展开更多

关键词 细菌人工染色体 文库构建 鉴定 应用

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