题名 葡萄座腔菌原生质体的制备及gfp的转化(英文)
被引量：4
1
作者
陈亮 孙庚午 王洪凯 吴树敬 林福呈 刘会香
机构
山东农业大学植物保护学院、山东省林业有害生物防控工程技术研究中心 浙江大学 生物 技术 研究 所 山东农业大学 园艺科学与工程 学院、 作物生物 学国家重点实验室、国家苹果工程技术 研究 中心
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期131-137,共7页
基金
Ministry of Science and Technology of the People’s Republic of China Project(2009FY210100) World Bank Loans ProjectShandong Ecology Afforestation Program(SEAP-JC-2) Natural Science Foundation of Zhejiang Province(Y3110028)
文摘
葡萄座腔菌是木本植物溃疡类病害的重要病原,研究该病菌的侵染和致病过程有助于揭示病原与寄主的互作机制。携带gfp基因并高效表达的病菌可有效地实时检测和分析病菌的侵染过程,但由于该病菌在致病和室内培养过程中均不易产孢,因此,制备高质量的原生质体是进行gfp基因转化和表达的首要步骤。通过对酶的种类、酶解液浓度、菌丝年龄、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂6个可能影响原生质体制备效率的参数进行分析,结果表明:原生质体最大产量产生的条件是菌龄42 h,以1.5%崩溃酶、1.5%葡聚糖在0.7 mol·L-1NaCl的渗透压稳定剂中酶解3.5 h,最适酶解温度31℃,制备的原生质体在酵母蛋白胨蔗糖培养基(YPS)上再生率最高可达48.33%;通过PEG-CaCl2介导原生质体的遗传转化、gfp基因PCR检测、稳定性检测和荧光显微观察,实现了报告基因gfp在葡萄座腔菌转化子内的稳定遗传和高效表达。
关键词
葡萄座腔菌 原生质体制备 再生 转化 GFP
Keywords
Botryosphaeria dothidea protoplast preparation regeneration transformants gfp
分类号
S718.81
[农业科学—林学]
