槲皮素对前列腺癌细胞增殖及转录因子Sp1功能的抑制作用 被引量：21

1

作者 苑辉卿 杨玲玲 +3 位作者 姜安丽 孔峰 张建业 Charles YF YOUNG 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期673-678,共6页

雄激素受体(androgenreceptor,AR)作为核转录因子,其高表达、基因突变以及AR辅激活因子的过表达等造成AR的异常激活与前列腺癌细胞的增殖、恶化转移、多药耐药等密切相关.天然黄酮槲皮素(quercetin),是一很有潜力的预防和治疗前列腺肿... 雄激素受体(androgenreceptor,AR)作为核转录因子,其高表达、基因突变以及AR辅激活因子的过表达等造成AR的异常激活与前列腺癌细胞的增殖、恶化转移、多药耐药等密切相关.天然黄酮槲皮素(quercetin),是一很有潜力的预防和治疗前列腺肿瘤的化合物.槲皮素不仅抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖,并呈剂量依赖性,而且下调前列腺癌中AR的表达、抑制AR的转录激活功能.GCbox是AR核心启动子的主要正调控元件,是转录因子Sp1的结合位点.细胞转染结果表明,槲皮素能抑制Sp1蛋白对AR启动子的激活作用,可能是槲皮素下调AR表达的机理之一.进一步研究显示,槲皮素还能明显抑制Sp1蛋白对AR转录激活功能的增强作用.Western印迹结果显示,槲皮素对Sp1蛋白表达无明显影响,但能够诱导c-Jun的高表达,而高表达的c-Jun蛋白能逆转Sp1蛋白对AR的转录激活作用,由此推测,槲皮素可能通过介导c-Jun与Sp1的蛋白质相互作用,抑制Sp1的功能,进而起到抑制AR表达和功能的作用.免疫沉淀结果又进一步证实了Sp1与c-Jun二者的相互作用.因此,槲皮素可能通过抑制前列腺癌细胞中AR的表达和功能抑制了细胞的增殖,其分子机理可能与槲皮素诱导的c-Jun与Sp1蛋白相互作用、降低Sp1对AR的转录激活作用有关. 展开更多

关键词 槲皮素 细胞增殖 SP1 前列腺癌细胞 抑制作用

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c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用 被引量：10

2

作者 苑辉卿 郭怀芳 +6 位作者 贺美兰 孔峰 胡晓燕 姜安丽 徐霞 张建业 Charles YF Young 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期819-824,共6页

目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind i... 目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。 展开更多

关键词 c—Jun CBP 槲皮素 雄激素受体 前列腺癌 细胞株

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没药倍半萜成分的分离鉴定及抗肿瘤活性 被引量：10

3

作者 吉恺 孔峰 +4 位作者 沈涛 王小玲 许爱辉 苑辉卿 张秀田 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第4期344-348,共5页

目的从没药提取物中分离纯化倍半萜单体成分,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖的生物活性。方法没药石油醚提取部分经硅胶柱层析分离得到二十多个倍半萜类化合物。其中化合物1和2的结晶分别经熔点测定、薄层层析1、H-NMR和13C-NMR数据分析以及... 目的从没药提取物中分离纯化倍半萜单体成分,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖的生物活性。方法没药石油醚提取部分经硅胶柱层析分离得到二十多个倍半萜类化合物。其中化合物1和2的结晶分别经熔点测定、薄层层析1、H-NMR和13C-NMR数据分析以及与已知化合物比较,确定其化学结构。利用MTT法检测化合物1和2对大肠癌细胞HT-29和激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3、PC-3M、DU-145及正常肝的永生化细胞LO2细胞增殖的影响。结果经理化性质鉴定、波谱分析,确定化合物1的结构为[1(10)E,2R,4R]-2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10),7,11-三烯-6-酮;化合物2的结构为2-甲氧基-5-乙酰基-4-呋喃吉玛-1(10)-烯-6-酮,二者同属没药吉玛烷型倍半萜类化合物。MTT结果表明,化合物1和2对大肠癌细胞增殖的抑制作用较弱。而对三种激素非依赖型前列腺癌细胞的增殖有非常显著的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。另外,化合物对正常肝永生化细胞的增殖无明显影响。结论经分离纯化、理化性质鉴定和波谱分析,确定了没药吉玛型倍半萜化合物1和2的结构,该化合物对前列腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 没药 吉玛烷型倍半萜 前列腺癌 细胞株

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Aβ和氧自由基诱导的培养神经元凋亡及维生素E的保护作用 被引量：6

4

作者 谢书阳 杨玲玲 +3 位作者 陈浩 郝建荣 姚俊英 崔行 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期436-438,共3页

目的研究β淀粉样肽(Aβ)、反应活性氧(ROS)对原代培养鼠脑皮层神经细胞凋亡的诱导及维生素E(VE)可能的保护作用。方法通过形态学观察、MTT法检测、流式细胞技术分析、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫细胞化学技术研究Aβ、ROS对培养皮层神经... 目的研究β淀粉样肽(Aβ)、反应活性氧(ROS)对原代培养鼠脑皮层神经细胞凋亡的诱导及维生素E(VE)可能的保护作用。方法通过形态学观察、MTT法检测、流式细胞技术分析、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫细胞化学技术研究Aβ、ROS对培养皮层神经细胞的损伤。结果经Aβ、活性氧的作用,神经细胞出现明显的凋亡特征,OD值降低,DNA电泳显示出现断裂DNA片段。凋亡细胞数增多。免疫细胞化学显示Bcl2表达下降,Bax表达增加(均P<0.05),而VE组可明显改变上述凋亡特征。结论Aβ、活性氧诱导培养皮层神经元凋亡机制可能与氧化损伤有关,维生素E能减缓这一作用。 展开更多

关键词 培养皮层神经细胞 凋亡 Β淀粉样肽 活性氧 维生素E

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没药倍半萜抑制前列腺癌细胞的增殖活性初探 被引量：5

5

作者 王小玲 孔峰 +4 位作者 许爱辉 吉恺 蔡捷 任凯 苑辉卿 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第12期1189-1192,共4页

目的初步探讨没药两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用倍半萜单体化合物处理人前列腺癌细胞株LNCaP后,MTT检测化合物对细胞增殖的影响;流式细胞术进一步分析细胞周期时相的变化;反转录PCR(RT-PCR)检测细胞周... 目的初步探讨没药两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用倍半萜单体化合物处理人前列腺癌细胞株LNCaP后,MTT检测化合物对细胞增殖的影响;流式细胞术进一步分析细胞周期时相的变化;反转录PCR(RT-PCR)检测细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclinD的表达水平。结果两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活性(P<0.001),使细胞停滞于G0/G1期;并且能在mRNA水平诱导p21的表达,同时降低cyclinD的表达。结论没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞增殖,可能是通过上调p21的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的。 展开更多

关键词 没药 倍半萜 前列腺癌 细胞株 蛋白 p21 细胞周期蛋白D

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没药倍半萜诱导的p21^(WAF/CIP1)蛋白参与抑制前列腺癌细胞增殖 被引量：5

6

作者 王小玲 孔峰 +5 位作者 吉恺 蔡捷 任凯 龚磊 胡志敏 苑辉卿 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期10-13,共4页

目的探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot... 目的探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot检测化合物对细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclin D表达的影响;利用细胞转染技术检测化合物对cyclin D启动子表达活力的影响。结果两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活力,使细胞停滞于G0/G1期;且能在蛋白水平诱导p21WAF/CIP1的表达,同时降低cyclinD的表达。结论没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞的增殖,可能是通过上调p21WAF/CIP1的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的。 展开更多

关键词 没药 倍半萜 前列腺癌 细胞株 P21 cyclin D

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酸性神经肽1对VD小鼠脑内SOD、MDA和NO的影响 被引量：4

7

作者 崔福爱 安玉会 +3 位作者 王秀利 张建业 胡晓燕 胡一平 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2003年第1期14-15,18,共3页

目的:探讨酸性神经肽1(BANP-1)对血管性痴呆(VD)小白鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的影响。方法:将小白鼠随机分为5组,每组12只,除正常对照组外,其余4组分别在高脂血症的基础上,用颈总动脉缺血再灌注法建立VD模... 目的:探讨酸性神经肽1(BANP-1)对血管性痴呆(VD)小白鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的影响。方法:将小白鼠随机分为5组,每组12只,除正常对照组外,其余4组分别在高脂血症的基础上,用颈总动脉缺血再灌注法建立VD模型,其中1组为VD模型组,其它3组在手术后分别给予BANP-11.5g/(kg·d)、0.75g/(kg·d)、0.3g/(kg·d),连续灌胃15d,每天1次,每次1ml。15d后将小白鼠断头处死并立即在冰盘中开颅取脑做组织匀浆,取上清液测MDA、NO含量和SOD活性。结果:VD模型组较正常对照组脑内SOD活性明显降低(P<0.01),MDA、NO含量明显升高(P<0.01)。BANP-1各治疗组较VD模型组脑内SOD活性明显升高(P<0.01),MDA、NO含量明显下降(P<0.01)。结论:BANP-1可明显升高VD小白鼠脑内SOD活性,降低MDA和NO含量。 展开更多

关键词 血管性痴呆 酸性神经肽1 超氧化物歧化酶 丙二醛 一氧化氮

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神经毒性物质导致的培养神经元凋亡及维生素E的神经保护作用 被引量：2

8

作者 谢书阳 崔行 +3 位作者 陈浩 郝建荣 杨玲玲 付振涛 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2004年第3期265-268,273,共5页

目的:研究神经毒性物质β-淀粉样肽(β-AP)?N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对原代培养鼠脑皮层神经细胞的致凋亡损伤和维生素E可能的神经保护作用?方法:通过形态学观察和MTT自动比色法检测存活细胞率;用DNA电泳和流式细胞技术分析细胞凋亡率;... 目的:研究神经毒性物质β-淀粉样肽(β-AP)?N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对原代培养鼠脑皮层神经细胞的致凋亡损伤和维生素E可能的神经保护作用?方法:通过形态学观察和MTT自动比色法检测存活细胞率;用DNA电泳和流式细胞技术分析细胞凋亡率;用免疫细胞化学技术分析细胞凋亡相关基因表达?结果:经β-AP?NMDA作用后,培养神经细胞出现明显的细胞凋亡特征:存活细胞减少,凋亡细胞数增多及特征性DNA断裂带,神经细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降?Bax表达上升(均P<0.05)?加维生素E组细胞则表现以上凋亡特征减弱?结论:神经毒性物质β-AP?NMDA可诱导培养神经细胞凋亡,细胞凋亡机制与氧化损伤相关,维生素E可减缓细胞凋亡? 展开更多

关键词 Β-淀粉样肽 N-甲基-D-天冬氨酸 维生素E 培养皮层神经细胞 细胞凋亡

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慢病毒介导的中性内肽酶对Aβ诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响 被引量：2

9

作者 任凯 崔云燕 +5 位作者 邵世滨 张亚伦 杨玲玲 段珊 丁岩 崔行 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2470-2474,共5页

目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western b... 目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western blotting方法检测NEP对Aβ的降解作用、MTT法检测细胞存活率、流式细胞术分析细胞凋亡情况、RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2及bax的表达及caspase-3活性检测。结果:胞内高表达的NEP能够显著降解Aβ,其降解程度与NEP的表达量有剂量依赖关系。细胞存活率及流式细胞术检测结果显示NEP高表达可减轻Aβ诱导的细胞凋亡,细胞存活率于感染病毒后48 h最强,为对照的170%(P<0.01),NEP活性组的凋亡率为3.86%,低于对照组的6.41%;RT-PCR结果显示NEP对Aβ诱导的细胞凋亡保护作用可能是通过减少bax的表达,抑制了caspase-3的激活程度来实现的。结论:NEP可以降解Aβ,可以保护由Aβ沉积所致的神经细胞凋亡。 展开更多

关键词 中性内肽酶 慢病毒载体 Β淀粉样肽 细胞凋亡 阿尔茨海默病

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tau蛋白与Alzheimer型老年痴呆 被引量：2

10

作者 崔行 郝建荣 +1 位作者 张月强 张群业 《老年医学与保健》 CAS 2001年第3期136-138,共3页

关键词 TAU蛋白 Alzheimer型老年痴呆 AO 神经元纤维缠结 发病机理

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前列腺组织特异性启动子介导的TAT-EGFP的靶向表达 被引量：1

11

作者 吉恺 王小玲 +2 位作者 许爱辉 胡志敏 苑辉卿 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第8期742-746,共5页

目的构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA-TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的蛋白能够在靶组织中高效表达,提高其特异性及表达效率。方法以pEGFP-1载体为模... 目的构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA-TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的蛋白能够在靶组织中高效表达,提高其特异性及表达效率。方法以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,PCR技术扩增含有酶切位点的小片段SalI-TAT-EGFP-Not I,经胶回收纯化,连接到T克隆载体。双酶切及测序鉴定后,提取质粒、双酶切后胶回收得到目的小片段。含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后,胶回收含有PSA启动子序列的大片段。过夜连接目的小片段与PSA启动子大片段,得到pPSA-TAT-EGFP表达载体。转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定。将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况。结果成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体。转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达。结论引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的蛋白能够在前列腺癌组织中表达。 展开更多

关键词 前列腺特异抗原 蛋白转导结构域 增强型绿色荧光蛋白 前列腺肿瘤 细胞株

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PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探 被引量：1

12

作者 蔡捷 苑辉卿 +5 位作者 孔峰 任凯 王小玲 吉恺 胡晓燕 张建业 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期498-503,共6页

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前... 目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 前列腺特异抗原 TAT—p21^WAF1/CIP1融合蛋白 前列腺肿瘤 LNCAP细胞 HT-29细胞

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9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响 被引量：6

13

作者 于雪艳 田克立 +2 位作者 张世国 丁磊 胡国强 《山东医科大学学报》 2001年第4期289-291,共3页

目的 :研究 9 顺 维甲酸 (9 cis RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响。方法 :以 1和 5 μmol/L 9 cis RA处理肿瘤细胞株 ,分别于 0、12、2 4、36、4 8、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化 ,应用流式细... 目的 :研究 9 顺 维甲酸 (9 cis RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响。方法 :以 1和 5 μmol/L 9 cis RA处理肿瘤细胞株 ,分别于 0、12、2 4、36、4 8、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化 ,应用流式细胞术分析细胞周期分布、Bcl 2表达和凋亡细胞数。结果 :9 cis RA可抑制肺鳞癌细胞生长 ;用药后细胞分化征明显 ,可见凋亡细胞。流式细胞计数显示 ,用药组细胞G0 /G1百分率明显升高 ,S期细胞百分率下降 ,细胞凋亡率增加 ,Bcl 2的表达下降。结论 :9 cis RA能抑制人肺鳞癌L78细胞、A2细胞增殖 ,诱导细胞分化和凋亡。 展开更多

关键词 9-顺维甲酸 人肺鳞癌细胞 肺肿瘤 细胞分化 细胞凋亡

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转染过氧化氢酶-过氧化物酶基因对H_2O_2诱导PC_(12)细胞凋亡的保护作用

14

作者 付振涛 杨玲玲 +4 位作者 郝建荣 曾季平 孔峰 钟华 崔行 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第6期464-468,共5页

目的:观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对过氧化氢(H2O2)诱导细胞凋亡的保护作用。方法:以CPX基因转染PC12细胞,用遗传霉素(G-418)筛选出含目的基因的单克隆细胞系。以RT-PCR法检测CPX基因mRNA的表达,用免疫细胞化学、酶活性测... 目的:观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对过氧化氢(H2O2)诱导细胞凋亡的保护作用。方法:以CPX基因转染PC12细胞,用遗传霉素(G-418)筛选出含目的基因的单克隆细胞系。以RT-PCR法检测CPX基因mRNA的表达,用免疫细胞化学、酶活性测定技术检测目的蛋白的表达;用H2O2处理细胞,观察其抗凋亡的能力;通过电镜、DNA片段化的测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析观察转基因后对H2O2诱导细胞凋亡的保护作用。结果:用H2O2处理细胞,未转染CPX基因的PC12细胞出现凋亡的特征性形态学改变,电泳可见断裂的DNA片段;流式细胞仪检测细胞凋亡率较转染组明显增加;MTT比色微量分析显示细胞活力下降(均P<0.01)。而转染CPX基因的PC12细胞以上改变均不明显,形态学接近正常,细胞凋亡的各项指标均明显改善。结论:转染CPX基因能保护H2O2所致的神经细胞凋亡。 展开更多

关键词 过氧化氢酶-过氧化物酶 细胞凋亡 过氧化氢 细胞转染

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神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达

15

作者 张之勇 苑辉卿 +5 位作者 姜安丽 蔡捷 任凯 胡晓燕 孔峰 张建业 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2304-2308,共5页

目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连... 目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中。利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETE-coT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽。结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础。 展开更多

关键词 神经营养肽 融合蛋白质类 原核表达

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FIZZ1对α-肌动蛋白和Ⅰ型胶原在大鼠支气管哮喘模型中表达的影响 被引量：1

16

作者 王淑娟 董亮 +2 位作者 李鸿佳 陈明 毕文祥 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期62-63,共2页

支气管哮喘（简称哮喘）患者的气道慢性炎症可导致上皮细胞损伤，成纤维细胞活化并分化为表达α-肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞和胶原沉积，因此，α-SMA和Ⅰ型胶原是哮喘早期气道重塑中的重要指标。FIZZ1是2000年首次在过敏性炎症... 支气管哮喘（简称哮喘）患者的气道慢性炎症可导致上皮细胞损伤，成纤维细胞活化并分化为表达α-肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞和胶原沉积，因此，α-SMA和Ⅰ型胶原是哮喘早期气道重塑中的重要指标。FIZZ1是2000年首次在过敏性炎症中发现的独立新基因。我们试图检测大鼠哮喘模型Ⅱ期肺泡上皮细胞（AECⅡ）中FIZZ1表达水平、肺组织内α-SMA和成纤维细胞内Ⅰ型胶原含量，揭示FIZZ1与早期气道重塑的关系。 展开更多

关键词 支气管哮喘模型 FIZZ1 Α-肌动蛋白 Ⅰ型胶原 大鼠 肌成纤维细胞 Α-SMA 上皮细胞损伤

原文传递

Alzheimer病模型大鼠脑生长抑素表达与学习能力改变 被引量：4

17

作者 王墨林 崔行 张群业 《中国临床神经科学》 2001年第3期274-276,共3页

目的:研究损伤脑胆碱能系ＡＤ模型大鼠学习能力及相关脑组化改变。方法:鹅膏蕈氨酸(ＩＢＡ)定位损伤大鼠脑建立ＡＤ模型,分光光度法、免疫组化法测定其脑胆碱酯酶(ＡＣｈＥ)活性及生长抑素(ＳＯＭ)表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠... 目的:研究损伤脑胆碱能系ＡＤ模型大鼠学习能力及相关脑组化改变。方法:鹅膏蕈氨酸(ＩＢＡ)定位损伤大鼠脑建立ＡＤ模型,分光光度法、免疫组化法测定其脑胆碱酯酶(ＡＣｈＥ)活性及生长抑素(ＳＯＭ)表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠显示学习能力明显下降(Ｐ＜０．０５),鼠脑ＡＣｈＥ活性显著降低(Ｐ＜０．０１);额叶皮质和海马区ＳＯＭ表达显著减少(Ｐ＜０．０１)。结论:模型鼠学习功能下降可能与中枢胆碱能系毁损导致的ＡＣｈＥ活性下降和ＳＯＭ表达减少有关。 展开更多

关键词 ALZHEIMER病 生长抑素 胆碱酯酶 动物模型 学习能力

原文传递

海风藤抑制淀粉样前体蛋白表达的研究

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作者 姚俊英 韩恩吉 +4 位作者 崔行 杨玲玲 曾季平 郝建荣 付振涛 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期314-316,322,共4页

目的研究中药海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH淀粉样前体蛋白(APP)基因表达的影响。方法MTT比色法检测海风藤作用后SK-N-SH细胞活性,RT-PCR和Western blot方法分别检测APP基因mRNA及蛋白质的表达。结果海风藤能够选择性降低SK-N... 目的研究中药海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH淀粉样前体蛋白(APP)基因表达的影响。方法MTT比色法检测海风藤作用后SK-N-SH细胞活性,RT-PCR和Western blot方法分别检测APP基因mRNA及蛋白质的表达。结果海风藤能够选择性降低SK-N-SH细胞APP mRNA表达,且呈药物浓度依赖性,海风藤对APP几种同功异构体的表达均有不同程度的抑制作用。在实验药物浓度内,海风藤抑制APP的表达,未导致SK-N-SH细胞活性下降。结论海风藤能够选择性抑制SK-N-SH细胞系APP的表达。 展开更多

关键词 淀粉样前体蛋白 海风藤 基因表达

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