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多聚甲醛固定对流式细胞术检测HepG2细胞整合素αVβ3的影响 被引量：4
1
作者 孙栋栋 杨利军 杨涛 《生物技术通讯》 CAS 2011年第3期411-414,共4页
目的:检测HepG2细胞表面整合素αVβ3的表达情况,同时探讨多聚甲醛的固定处理对HepG2细胞表面αVβ3检测的影响。方法:分别用0.25%的胰蛋白酶和1%的EDTA消化收集HepG2细胞,以FITC标记的抗αVβ3单抗检测细胞表面αVβ3的表达情况;在检测... 目的:检测HepG2细胞表面整合素αVβ3的表达情况,同时探讨多聚甲醛的固定处理对HepG2细胞表面αVβ3检测的影响。方法:分别用0.25%的胰蛋白酶和1%的EDTA消化收集HepG2细胞,以FITC标记的抗αVβ3单抗检测细胞表面αVβ3的表达情况;在检测中,用2%浓度的多聚甲醛固定细胞后,采用流式细胞仪测定多聚甲醛固定组和未固定组HepG2细胞的平均荧光强度和阳性细胞率,对结果进行统计学分析。结果:以胰蛋白酶消化HepG2细胞后,抗αVβ3单抗标记的阳性细胞率为3.6%,远低于EDTA消化组的阳性细胞率(47%)。多聚甲醛固定组的平均荧光强度为2.23,阳性细胞率为4.6%;而未固定组的平均荧光强度为6.97,阳性细胞率为30.1%。以上结果经统计学分析,均具有显著性差异(P<0.05)。结论:HepG2细胞表达整合素αVβ3,多聚甲醛固定处理可干扰对HepG2细胞αVβ3的检测。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 整合素 ΑVΒ3 多聚甲醛 流式细胞术
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抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定 被引量：1
2
作者 杨涛 柴蔚然 +3 位作者 杨利军 程牛亮 解军 牛勃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期930-936,共7页
应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL... 应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础. 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 肿瘤坏死因子-Α 单链抗体
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抗TNFα单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件的研究 被引量：8
3
作者 杨涛 杨利军 +2 位作者 张建林 张悦红 牛勃 《药物生物技术》 CAS CSCD 2010年第6期482-486,503,共6页
抗TNFαscFv在E.coliHB2151中以可溶性形式在胞周质中表达,为了进一步提高其表达量,文章通过摇瓶培养对其诱导表达条件进行了研究。将噬菌体抗体库筛选到的阳性克隆感染E.coliHB2151,分别改变诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG的浓度,并... 抗TNFαscFv在E.coliHB2151中以可溶性形式在胞周质中表达,为了进一步提高其表达量,文章通过摇瓶培养对其诱导表达条件进行了研究。将噬菌体抗体库筛选到的阳性克隆感染E.coliHB2151,分别改变诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG的浓度,并在培养基中加入甘氨酸和Triton X-100等添加剂,观察诱导条件的改变对scFv表达和分泌的影响。结果表明,E.coliHB2151在培养5 h对数生长期时开始诱导,在ITPG浓度为0.5 mmol/L条件下,30℃诱导20 h,胞周质中scFv的表达量比优化前增加了一倍,而且在诱导后期加入甘氨酸和Triton X-100后可增加scFv向培养基的分泌量。免疫学印迹法检测抗TNFαscFv能够与天然结构的TNFα结合,识别抗原的构象表位。该工作为其他可溶性scFv表达量的提高提供了可参考的模式。 展开更多
关键词 单链抗体 肿瘤坏死因子Α 大肠杆菌 表达
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RWR通过与血小板表面整合素α_(Ⅱb)β_3受体作用对血栓形成的影响 被引量：2
4
作者 赵海霞 杨涛 杨利军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第8期1126-1129,1133,共5页
目的探讨含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ(3GPⅡb/Ⅲ)a结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响。方法取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plas... 目的探讨含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ(3GPⅡb/Ⅲ)a结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响。方法取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响;分别用0.3、0.6、1.2mg/kgRWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化。结果随着RWR剂量增加,血小板最大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L。随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加。结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ(3GPⅡb/Ⅲ)a受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓。 展开更多
关键词 RGD序列 RWR 整合素αⅡbβ3 血栓
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