血清淀粉样蛋白A在重症监测病房早期感染中的诊断价值 被引量：2

1

作者 孔莹 刘世国 +7 位作者 龚菲 崔红晶 徐祖敏 叶华 孙艳芹 罗海清 罗辉 朱萧 《解剖学研究》 CAS 2015年第3期206-208,共3页

目的探讨血清淀粉样蛋白A在重症监测病房（ICU）早期感染中的诊断价值。方法收集本院2013年6月至2013年12月之间入住ICU超过2 d的患者,所有患者均检测血清淀粉样蛋白A（SAA）和高敏C反应蛋白（hs CRP）。根据痰培养（深部无菌吸痰）结... 目的探讨血清淀粉样蛋白A在重症监测病房（ICU）早期感染中的诊断价值。方法收集本院2013年6月至2013年12月之间入住ICU超过2 d的患者,所有患者均检测血清淀粉样蛋白A（SAA）和高敏C反应蛋白（hs CRP）。根据痰培养（深部无菌吸痰）结果将所有患者区分为正常组与感染组。分别比较正常组与感染组之间的血清淀粉样蛋白A和高敏C反应蛋白变化。结果研究对象入选381例,其中细菌感染组106例,正常对照组275例。SAA在正常对照组与细菌感染组结果分别为5.00 mg/L（95%CI：5.00~5.00 mg/L）与105.12 mg/L（95%CI：48.89~212.47 mg/L）;hs CRP在正常对照组及细菌感染组中分别为9.13 mg/L（95%CI：3.87~14.47 mg/L）和28.15 mg/L（95%CI：16.81~39.63 mg/L）。SAA与hs CRP在正常组与感染组之间呈显著性差异（P〈0.001）。结论 SAA及hs CRP联合检测在ICU早期细菌感染中敏感性较高,具有辅助诊断价值。 展开更多

关键词 血清淀粉样蛋白A 高敏C反应蛋白 细菌感染

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鼻咽癌肿瘤干细胞样细胞亚群的分离及初步鉴定 被引量：16

2

作者 冀天星 张鑫 +4 位作者 李祥勇 李彩虹 黄颖 周克元 李涛 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期754-757,共4页

目的:分离和鉴定具有肿瘤干细胞特性的鼻咽癌球形成细胞亚群。方法:利用无血清干细胞球悬浮培养技术从不同分化程度鼻咽癌细胞株中分离成球细胞,然后利用MTT法,软琼脂克隆形成实验,分别评价成球细胞的耐药性、克隆形成能力,最后利用RT-... 目的:分离和鉴定具有肿瘤干细胞特性的鼻咽癌球形成细胞亚群。方法:利用无血清干细胞球悬浮培养技术从不同分化程度鼻咽癌细胞株中分离成球细胞,然后利用MTT法,软琼脂克隆形成实验,分别评价成球细胞的耐药性、克隆形成能力,最后利用RT-PCR和免疫荧光细胞技术分析干性基因及Wnt信号通路关键转录因子β-catenin在成球及未成球细胞中的表达情况。结果:低分化鼻咽癌细胞含有较高成球细胞,而高分化细胞株CNE-1中未见成球细胞。与CNE-2相比较,CNE-2S(来源于CNE-2的成球细胞)具有较强的抗肿瘤药物耐药性、克隆形成能力、高表达干性基因,且β-catenin在胞浆和核内都呈高表达。结论:本研究分离到干细胞样鼻咽癌成球细胞亚群,为最终靶向杀灭鼻咽癌肿瘤干细胞提供了可能。 展开更多

关键词 鼻咽癌 肿瘤干细胞 球形成细胞 分离 鉴定

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原花青素二聚体B_2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响 被引量：9

3

作者 丁伟斌 梁统 周克元 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期803-806,共4页

目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Wes... 目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化。结果 TNF-α(10μg.L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50μmol.L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平。结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关。 展开更多

关键词 原花青素二聚体B2 滑膜细胞 NF-ΚB TNF-Α 抗炎 核转运

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白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用 被引量：7

4

作者 王铮华 梁统 +1 位作者 李涛 周克元 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-96,共4页

探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-... 探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-2细胞的生长具有较强的抑制作用,并具有明显的量-效关系;白杨素可诱导CNE-2细胞凋亡,使G0/G1期细胞明显增多,S期明显减少,使细胞周期被阻滞于G0/G1期;白杨素可升高CNE-2细胞caspase-3的活性。白杨素对CNE-2细胞生长有明显的抑制作用,其机制可能与白杨素诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 白杨素 鼻咽癌 细胞凋亡 细胞增殖

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人IL-37在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：5

5

作者 赵付前 何素辉 +3 位作者 何玲鸽 林妙芬 王森 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期513-516,共4页

目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫... 目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性抗体,用ELISA、Western blot法和免疫组织化学染色检测抗体的效价和特异性。结果原核表达了重组蛋白IL-37b成熟肽,并获得高效价的小鼠抗IL-37抗体,能特异性识别天然的IL-37抗原。结论成功制备效价高、特异性好的小鼠抗IL-37抗体。 展开更多

关键词 白细胞介素37 表达 抗体 制备 小鼠

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表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53/miR-34a抑制鼻咽癌细胞的增殖 被引量：3

6

作者 李彬彬 万郑 +3 位作者 孔霞 廖丹 王籽又 黄国良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1557-1562,共6页

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测... 目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期分布的改变;Western blot检测P53和Notch1蛋白水平的变化;real-time PCR检测miR-34a和Notch1 mRNA的表达。结果:EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖受到明显抑制,克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期,呈剂量依赖关系;随着EGCG浓度增高,P53和miR-34a的表达水平明显上调,而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论:EGCG可能通过调控P53/miR-34a/Notch1通路诱导细胞周期阻滞,抑制鼻咽癌细胞增殖。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌 P53 微小RNA-34a NOTCH1

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肿瘤干细胞标志物的确定与争议 被引量：2

7

作者 马晓娟 李祥勇 +1 位作者 李涛 周克元 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1287-1289,共3页

肿瘤中除了普通肿瘤细胞以外还有一小部分具有异质性分化潜能的细胞,命名为肿瘤干细胞,这部分细胞很可能与肿瘤的发生及复发、转移密切相关。肿瘤干细胞的异质性分化能力与胚胎干细胞较为相似,而且由于到目前为止尚无公认的肿瘤干细胞... 肿瘤中除了普通肿瘤细胞以外还有一小部分具有异质性分化潜能的细胞,命名为肿瘤干细胞,这部分细胞很可能与肿瘤的发生及复发、转移密切相关。肿瘤干细胞的异质性分化能力与胚胎干细胞较为相似,而且由于到目前为止尚无公认的肿瘤干细胞的标志物,所以,往往利用胚胎干细胞的标志物来分离和鉴定肿瘤干细胞。 展开更多

关键词 干细胞标志物 肿瘤细胞 肿瘤干细胞 胚胎干细胞 分化潜能 分化能力 异质性

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胰岛素样生长因子Ⅰ通过改善线粒体功能保护新生大鼠心肌细胞免于凋亡 被引量：4

8

作者 李晋菊 丁碧蓝 +4 位作者 许晓玲 张剑凯 黄颖 李涛 吴柱国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1585-1589,共5页

目的:探讨线粒体机制在胰岛素样生长因Ⅰ(IGF-Ⅰ)保护心肌细胞中的作用。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,过氧化氢处理诱导凋亡,JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,Annexin V-FITC/PI双染色法、cas... 目的:探讨线粒体机制在胰岛素样生长因Ⅰ(IGF-Ⅰ)保护心肌细胞中的作用。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,过氧化氢处理诱导凋亡,JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,Annexin V-FITC/PI双染色法、caspase-3活性测定、DNA-ladder分析和Hoechst 33258染色方法观察心肌细胞凋亡的情况。结果:过氧化氢可诱导心肌细胞凋亡,siRNA下调Kruppel样因子9(KLF9)48 h后,心肌细胞线粒体膜电位下降率明显降低,由对照组的(24.0±1.6)%,降为IGF-Ⅰ处理组的(18.3±1.2)%和KLF9下调组的(15.2±1.2)%;线粒体形态明显改善;DNA片段化改善;caspase-3活性降低,与对照组相比IGF-Ⅰ处理组降低(1.30±0.28)倍,KLF9下调组降低(1.31±0.43)倍;Annexin V-FITC/PI双染法显示细胞凋亡率对照组为(42.5±1.8)%,IGF-I处理组为(22.4±4.2)%,KLF9下调组为(32.5±3.5)%;Hoechst 33258染色结果显示凋亡小体减少,KLF9下调组与IGF-I的抗心肌细胞凋亡效果相似。结论:IGF-I通过下调KLF9表达改善线粒体功能,保护心肌细胞免于凋亡。 展开更多

关键词 心肌细胞 胰岛素样生长因子Ⅰ Kruppel样因子9 线粒体 细胞凋亡

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白细胞介素-35在鼻咽癌患者组织和外周血中的表达及意义 被引量：3

9

作者 刘艳 曾今诚 +1 位作者 梁小泉 许卫华 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期3533-3535,共3页

目的探讨鼻咽癌患者组织和外周血白细胞介素-35（IL-35）的表达及意义。方法收集鼻咽癌患者50例,其中21例为角化型鳞状细胞癌,29例为非角化型鳞状细胞癌;发生颈部淋巴结转移者30例,未发生颈部淋巴结转移者20例;T1期10例、T2期16例、T3... 目的探讨鼻咽癌患者组织和外周血白细胞介素-35（IL-35）的表达及意义。方法收集鼻咽癌患者50例,其中21例为角化型鳞状细胞癌,29例为非角化型鳞状细胞癌;发生颈部淋巴结转移者30例,未发生颈部淋巴结转移者20例;T1期10例、T2期16例、T3期19例和T4期5例。ELISA法检测组织和外周血IL-35含量。结果鼻咽癌组织中IL-35含量显著高于癌旁黏膜组织（t=2.415,P=0.018 8）和鼻咽黏膜慢性炎组织（t=2.368,P=0.021 1）。T3~T4期组织IL-35含量显著高于T1~T2期（t=2.139,P=0.037 7）;非角化型鳞癌组织IL-35含量显著高于角化型鳞癌（t=2.550,P=0.014 1）;有颈部淋巴结转移癌组织IL-35含量显著高于无颈部淋巴结转移癌（t=3.147,P=0.002 9）。鼻咽癌患者外周血中IL-35含量显著高于健康志愿者（t=2.776,P=0.007 3）和鼻咽黏膜慢性炎患者（t=2.122,P=0.038 4）。T3~T4期患者外周血IL-35含量显著高于T1~T2期（t=2.427,P=0.019 7）;非角化型鳞癌患者外周血IL-35含量显著高于角化型鳞癌患者（t=2.109,P=0.041 1）;有颈部淋巴结转移患者外周血IL-35含量显著高于无颈部淋巴结转移癌患者（t=3.469,P=0.001 2）。鼻咽癌患者组织与外周血之间IL-35含量呈正相关（r=0.405,P=0.003 5）。结论 IL-35可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 鼻咽癌 白细胞介素-35 组织 外周血

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siRNA靶向干扰组蛋白H3表达对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用 被引量：2

10

作者 李彬彬 黄国良 +3 位作者 孔霞 李蓉 董子明 何志巍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1625-1630,共6页

目的:应用RNA干扰技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE1中组蛋白H3的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:构建针对组蛋白H3的小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,转染CNE1细胞并筛选获得稳定表达细胞株。实时荧光定量RT-PCR和Western blottin... 目的:应用RNA干扰技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE1中组蛋白H3的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:构建针对组蛋白H3的小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,转染CNE1细胞并筛选获得稳定表达细胞株。实时荧光定量RT-PCR和Western blotting检测细胞中组蛋白H3 mRNA和蛋白表达的改变;CCK-8法和平板克隆形成实验观察细胞增殖能力的改变;双萤光素酶报告系统检测细胞激活蛋白1(AP-1)转录活性的改变。结果:与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA-H3质粒转染组的组蛋白H3 mRNA和蛋白表达均显著下降,细胞生长速度明显减慢,表皮生长因子诱导的细胞克隆形成能力和AP-1转录活性均受到明显抑制。结论:通过RNA干扰技术阻断组蛋白H3的表达,可抑制CNE1细胞的生长、增殖,其机制可能与下调AP-1转录活性有关。组蛋白H3可能是潜在的肿瘤治疗新靶点。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 组蛋白H3 RNA干扰 激活蛋白1

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蛇床子素防治乳腺癌的研究新进展 被引量：2

11

作者 林碧华 马晓娟 +1 位作者 蔚帅帅 李继霞 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期3810-3812,共3页

蛇床子素（osthole）为香豆素类天然产物,具有重要且多样的生物学作用,是具备开发前景的中药有效成分.药理研究发现,蛇床子素具有抗骨质疏松、抗肝炎、抗过敏及抗肿瘤等功能,对机体有多重保护作用.乳腺癌（breast cancer）是女性常见的... 蛇床子素（osthole）为香豆素类天然产物,具有重要且多样的生物学作用,是具备开发前景的中药有效成分.药理研究发现,蛇床子素具有抗骨质疏松、抗肝炎、抗过敏及抗肿瘤等功能,对机体有多重保护作用.乳腺癌（breast cancer）是女性常见的恶性肿瘤,也是女性死亡的主要因素之一,严重威胁着女性的身心健康.乳腺癌是机体多种危险因素共同作用的结果,病因学尚未完全阐明,治疗手段也更加多样化.随着中药学的发展,很多中药已经进入临床来治疗乳腺癌,研究发现蛇床子素对乳腺癌有一定的抑制作用[6],本文对蛇床子素在防治乳腺癌方面的研究进展给予总结和展望. 展开更多

关键词 蛇床子素 乳腺癌 防治 生物学作用 抗骨质疏松 中药学 天然产物 香豆素类

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IL-37b基因克隆及其真核的表达载体构建 被引量：2

12

作者 何玲鸽 赵付前 +3 位作者 林妙芬 祝惠钦 王森 陈章权 《山东医药》 CAS 2013年第39期1-3,共3页

目的克隆IL-37b编码区基因,并构建其真核表达载体。方法通过RT-PCR扩增IL-37b编码区基因,DNA测序鉴定后,将阳性克隆提取质粒,通过酶切连接将目的片段定向克隆至真核表达载体pcDNA 3.1,通过菌落PCR和DNA测序等进行鉴定。结果凝胶电泳显示... 目的克隆IL-37b编码区基因,并构建其真核表达载体。方法通过RT-PCR扩增IL-37b编码区基因,DNA测序鉴定后,将阳性克隆提取质粒,通过酶切连接将目的片段定向克隆至真核表达载体pcDNA 3.1,通过菌落PCR和DNA测序等进行鉴定。结果凝胶电泳显示RT-PCR扩增出1条大小约650 bp特异条带,DNA测序结果显示获取了大小为654 bp的IL-37b编码区基因。PCR和DNA测序对所构建的真核表达载体鉴定结果表明IL-37b编码区基因正确插入真核表达载体pcDNA3.1。结论成功克隆了IL-37b编码区基因,并成功构建其真核表达载体,为下一步IL-37b生物学作用的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞介素-37 基因克隆 真核表达载体

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铁硫蛋白的生物合成及相关疾病 被引量：2

13

作者 郑华珍 赵炜 刘新光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期566-574,共9页

铁硫蛋白是以铁硫簇为辅基,相对分子质量较小的一类蛋白质.它广泛存在于各种生物体内,参与电子传递、能量代谢以及基因表达调控等重要生理过程.其生物合成过程复杂,并且从细菌到人类高度保守.在真核细胞内,铁硫蛋白的组装由线粒体铁硫... 铁硫蛋白是以铁硫簇为辅基,相对分子质量较小的一类蛋白质.它广泛存在于各种生物体内,参与电子传递、能量代谢以及基因表达调控等重要生理过程.其生物合成过程复杂,并且从细菌到人类高度保守.在真核细胞内,铁硫蛋白的组装由线粒体铁硫簇组装系统(mitochondrial ironsulfur cluster assembly system,mitochondrial ISC assembly system)和细胞质铁硫簇组装器(cytosolic iron-sulfur cluster assembly,CIA)完成.研究发现,铁硫蛋白的合成异常可导致弗里德赖希共济失调(friedreich ataxia,FRDA)、遗传性肌病和铁粒幼细胞性贫血等多种罕见疾病,这些疾病严重影响个体的生活质量和寿命.因此,深入了解铁硫蛋白的结构和生物合成过程,对研究其生物学功能与相关疾病的诊断和治疗有重要意义. 展开更多

关键词 铁硫蛋白 生物合成 线粒体铁硫簇组装系统 细胞质铁硫簇组装器

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中国南海多棘海星水提物抗皮肤真菌的活性分析 被引量：2

14

作者 华影 唐晓磊 +1 位作者 陈章权 于静蕊 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第3期265-268,共4页

目的从南海多棘海星(asterias amurensis)水溶性提取物中筛选具有抗真菌活性的物质。方法粉碎后冷冻干燥的海星经有机溶剂去除脂溶性物质,固体成分以去离子水于低温浸取,将水溶液通过高效液相色谱仪(high performance liquid chrom atog... 目的从南海多棘海星(asterias amurensis)水溶性提取物中筛选具有抗真菌活性的物质。方法粉碎后冷冻干燥的海星经有机溶剂去除脂溶性物质,固体成分以去离子水于低温浸取,将水溶液通过高效液相色谱仪(high performance liquid chrom atography,HPLC)分别连以葡聚糖凝胶柱进行初次分离和C18硅胶柱对初次分离活性组分进行再次分离,并用微量稀释法对各分离组分进行抗真菌活性检测。结果南海多棘海星水提物经高效液相色谱仪连以葡聚糖凝胶柱分离得到了5个组分:初次分离组分1(FSF-1)、FSF-2、FSF-3、FSF-4、FSF-5,其中FSF-3对红色毛癣显示出较强的抗真菌活性。FSF-4对红色毛癣菌、断发毛癣菌和石膏样小孢子菌显示出了较弱的抗菌活性,其余组分对3种真菌无明显抑菌作用。对FSF-3抗红色毛癣菌的有效成分经高效液相色谱仪连以C18硅胶分离柱进一步分离得到了3个组分:次级分离组分1(SSF-1)、SSF-2、SSF-3共3个组分。其中SSF-1对红色毛癣菌仅有微弱的抑菌活性,SSF-2和SSF-3对红色毛癣菌均具有较强的抗真菌活性,且在浓度为1μg/ml仍可表现出抑菌效果。结论中国南海多棘海星体内存在水溶性抗红色毛癣菌的活性成分。 展开更多

关键词 多棘海星 水溶性提取物 抗真菌活性 高效液相色谱 红色毛癣菌

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tRNA抑制子对转录因子NKX2.5提前终止密码子的通读 被引量：1

15

作者 欧阳平 刘远航 +6 位作者 黄志刚 齐小娟 倪倩 刘亚萍 宋仁生 李涛 吴柱国 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期367-373,共7页

人类NKX2.5基因（NK2 homeobox 5，NKX2.5）提前终止密码子（Premature termination codon，PTC）突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前，已报道的NKX2.5 PTC突变有8个（E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、... 人类NKX2.5基因（NK2 homeobox 5，NKX2.5）提前终止密码子（Premature termination codon，PTC）突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前，已报道的NKX2.5 PTC突变有8个（E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X）。为了检测tRNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白，文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pcDNA3.1（-）载体，将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到pEGFP-N1载体，形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的tRNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断tRNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 mRNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明，文章成功构建了8个基于pcDNA3.1（-）的NKX2.5表达质粒、4个基于pEGFP-N1的质粒；tRNA抑制子tRNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X，且对后三者的通读效率均在50%以上；tRNA op能有效通读C264X，通读效率约50%左右；tRNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变；各通读后样本Cx43 mRNA相对表达量增加7%~41.7%；tRNA am和tRNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变，产生具有功能的全长蛋白，但tRNA抑制子对细胞的其他影响还不明确，有待于进一步观察。 展开更多

关键词 tRNA抑制子 NKX2.5 提前终止密码子 通读 先天性心脏病

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IGF-1通过BTEB调控CYPs途径保护心肌细胞免于凋亡 被引量：1

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作者 张剑凯 丁碧蓝 +2 位作者 许晓玲 李涛 吴柱国 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期64-71,共8页

目的探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱... 目的探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱导心肌细胞凋亡,通过Annexin VFITC/PI双染色法、Caspase 3活性测定、Hoechest33258染色法和Tunel法观察下调CYPs的基因表达对心肌细胞凋亡的影响;JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变。结果大鼠心肌细胞经IGF-1刺激60 min后,BTEB m RNA和蛋白表达均明显下降;IGF-1刺激48 h后,CYP1A1、2E1、3A11和11A1的m RNA和蛋白表达均明显下降(均P<0.01);用BTEB特异性的si RNA人为下调BTEB基因表达后,CYP1A1、3A1 m RNA和蛋白表达明显下降(均P<0.01),CYP2E1、11A1 m RNA和蛋白表达变化不明显。与对照组相比,H2O2诱导的大鼠心肌细胞用CYP1A1、2E1、3A11和11A1特异性的si RNA人为下调上述基因表达后,Annexin V-FITC/PI双染法显示心肌细胞凋亡率下降(均P<0.05)、Caspase 3活性测定显示酶活性降低(均P<0.05)、Hoechest33258染色和Tunel法检测结果显示凋亡小体和凋亡细胞数目减少,与IGF-1的抗心肌细胞凋亡效果相似;且细胞线粒体膜电位下降率明显降低(均P<0.05),线粒体形态明显改善。结论 IGF-1可以通过下调细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的表达改善线粒体功能,其中CYP1A1、3A11受BTEB调控途径发挥抗心肌细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 心肌细胞 凋亡 基本转录元件结合蛋(BTEB) 细胞色素C 胰岛素样生长因子 I(IGF-1 )

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多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响 被引量：1

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作者 何素辉 唐晓磊 +1 位作者 邓亦峰 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1198-1200,共3页

目的:研究多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响。方法:将多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,通过硅胶柱层析进行组分分离。将各组分分别腹腔注射小鼠后,用ELISA法检测小鼠血清中IL-4与IFN-γ的水平。结果:多棘海星乙醇提... 目的:研究多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响。方法:将多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,通过硅胶柱层析进行组分分离。将各组分分别腹腔注射小鼠后,用ELISA法检测小鼠血清中IL-4与IFN-γ的水平。结果:多棘海星乙醇提取物通过硅胶柱层析分离后,获取8个组分。多棘海星乙醇提取物的组分III和VIII能刺激小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ。结论:所分离的多棘海星乙醇提取物组分III和VIII刺激小鼠产生高水平的IL-4和IFN-γ,具有自然杀伤T(NKT)细胞激活剂的作用特征。提示多棘海星中可能含有能活化NKT细胞的活性物质。 展开更多

关键词 多棘海星 IL-4 IFN-Γ 小鼠

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白细胞介素-12家族在肉芽肿相关疾病中的研究进展 被引量：1

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作者 吴文钦 周克元 曾今诚 《检验医学与临床》 CAS 2016年第2期268-270,共3页

肉芽肿可定义为巨噬细胞及其衍生细胞（如上皮样细胞、多核巨细胞、T细胞及B细胞）的聚集,伴随或不伴随其他炎症细胞的出现。新近研究发现白细胞介素-12（IL-12）家族与肉芽肿的发生、发展有着密切的联系。本文就IL-12家族与肉芽肿相关... 肉芽肿可定义为巨噬细胞及其衍生细胞（如上皮样细胞、多核巨细胞、T细胞及B细胞）的聚集,伴随或不伴随其他炎症细胞的出现。新近研究发现白细胞介素-12（IL-12）家族与肉芽肿的发生、发展有着密切的联系。本文就IL-12家族与肉芽肿相关疾病作一综述,为揭示和研究以IL-12家族为靶点的肉芽肿性疾病诊断、治疗及预后奠定基础。 展开更多

关键词 白细胞介素-12 白细胞介素-23 白细胞介素-27 白细胞介素-35 肉芽肿性疾病

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人肥大细胞类糜蛋白酶的促血管生成作用 被引量：1

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作者 张志伟 侯玉涛 +2 位作者 何素辉 邝珠芳 陈章权 《中华临床免疫和变态反应杂志》 2013年第1期27-31,I0005,共6页

目的探讨人肥大细胞类糜蛋白酶(mast cell chymase,MC-Chy)的促进血管生成作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分为6组,每组5只。4组实验组小鼠分别予腹股沟部皮下注射基质胶与MC-Chy质粒DNA50μg(Chy50组)、100μg(Chy100组)、150μg(Chy15... 目的探讨人肥大细胞类糜蛋白酶(mast cell chymase,MC-Chy)的促进血管生成作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分为6组,每组5只。4组实验组小鼠分别予腹股沟部皮下注射基质胶与MC-Chy质粒DNA50μg(Chy50组)、100μg(Chy100组)、150μg(Chy150组)、200μg(Chy200组)的混合物;抑制剂组小鼠给予MC-Chy质粒DNA150μg与基质胶的混合物腹股沟部皮下注射,然后每天注射类糜蛋白酶抑制剂chymostatin10μg至皮下的基质胶栓;对照组小鼠行腹股沟部皮下注射生理盐水及基质胶混合物。注射后第7天,以同样剂量的质粒DNA注射至各实验组小鼠皮下的基质胶栓,于第12天处死小鼠,取出胶栓,测定MC-Chy活性及血红蛋白浓度,并进行免疫组化学染色、HE染色,测量血管密度计数。结果 Chy50组(7.5±1.4)、Chy100组(21.7±2.7)、Chy150组(28.4±2.1)、Chy200组(25.8±2.0)血红蛋白浓度与对照组(2.9±0.7)比较差异均显著(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。Chy50组(9.3±2.7)、Chy100组(12.2±4.0)、Chy150组(15.4±3.1)、Chy200组(13.5±3.6)血管密度与对照组(5.9±2.7)比较,均存在显著性差异(均P<0.01)。HE染色可见到血管,免疫组化染色可见到棕黄色阳性颗粒及血管腔。结论人MC-Chy具有促进血管生成的作用。 展开更多

关键词 肥大细胞 类糜蛋白酶 血管生成

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急性力竭运动后大鼠心肌细胞Ang II受体表达的时间研究 被引量：1

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作者 李世成 孙雪荣 +2 位作者 罗齐军 熊静宇 李红 《湛江师范学院学报》 2013年第6期122-128,共7页

目的:通过对急性力竭运动后不同时间大鼠心肌细胞血管紧张素Ⅱ受体AT1R和AT2R的表达变化以及心肌细胞凋亡进行研究,探讨血管紧张素Ⅱ受体与运动引起的心肌细胞凋亡之间的关系,揭示运动影响心脏的分子机制.方法:SD健康大鼠40只随机分为... 目的:通过对急性力竭运动后不同时间大鼠心肌细胞血管紧张素Ⅱ受体AT1R和AT2R的表达变化以及心肌细胞凋亡进行研究,探讨血管紧张素Ⅱ受体与运动引起的心肌细胞凋亡之间的关系,揭示运动影响心脏的分子机制.方法:SD健康大鼠40只随机分为安静组(A,n=10)和力竭运动组(B,n=30),B组在运动后又分为3个亚组即0h、6h和24h处死组.运动组大鼠进行运动速度为(25±2)m/min,跑台坡度为0°力竭运动.应用RTPCR法测定AIF mRNA的表达,TUNEL法测试心肌细胞凋亡指数,用Western blotting方法测试心肌细胞AT1R和AT2R表达.结果:急性力竭运动后0h、6h和24hAIF mRNA表达量分别为6.69(P<0.05)、9.32(P<0.05)和10.82倍(P<0.001);运动后0h、6h和24hAI分别为(17.10±3.6)%(P<0.001)、(33.3±10.4)%(P<0.001)和(30.7±9.2)%(P<0.001);运动后0h、6h和24h心肌细胞AT1R蛋白表达分别增加5.16%(P>0.05)、30.19%(P<0.05)和64.44%(P<0.05)而AT2R蛋白表达分别增加2.15%(P>0.05)、10.12%(P>0.05)和28.30%(P<0.05).结论:急性力竭运动后AT1R和AT2R表达增加,24h后仍然维持较高水平的表达;运动后AIF mRNA表达增加,运动后6h表达量达最大,24h开始下降.而AT1R和AT2R可能均参与介导急性力竭运动引起心肌细胞凋亡的过程. 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ受体表达 力竭运动 心肌 时间 大鼠

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