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C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织 被引量:4
1
作者 王齐 廖华 +4 位作者 秦建强 余磊 艾鹤英 汪海仪 邱小忠 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期606-610,共5页
目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀... 目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。 展开更多
关键词 Sylgard 184 铸型 MATRIGEL 肌组织 反转录-聚合酶链式反应 免疫荧光 C2C12细胞
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五羟色胺-N-乙酰转移酶基因真核表达载体的构建表达及活性检测 被引量:1
2
作者 廖华 曹永英 +2 位作者 徐达传 邱小忠 余磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期656-659,共4页
目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导... 目的构建pTARGETTM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞,检测目的基因的表达并初步探讨AANAT转基因细胞的生物活性。方法提取大鼠松果体组织mRNA,RT-PCR技术扩增五羟色胺-N-乙酰转移酶基因(AANAT)cDNA,酶切连接pTARGETTM载体,脂质体法导入L6成肌细胞。倒置显微镜观察转化细胞体外存活、RT-PCR及Western blotting技术检测pTARGETTM-AANAT的基因表达产物及转化细胞的功能表达。结果酶切分析、DNA测序及凝胶电泳检测结果证实,pTARGETTM-AANAT真核表达载体构建成功。RT-PCR及Western blotting检测表明,转化后的L6细胞表达AANAT mRNA,细胞具备AANAT蛋白的表达能力。结论成功构建pTARGETTM-AANAT的真核表达载体,转化的L6细胞株能表达AANAT蛋白活性。 展开更多
关键词 五羟色胺-N-乙酰转移酶 L6细胞 pTARGET^TM载体 RT-PCR
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失神经萎缩肌组织成分对成肌细胞性能影响的实验研究 被引量:1
3
作者 廖华 徐达传 +2 位作者 邱小忠 余磊 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2008年第2期154-157,共4页
目的:探讨长期失神经萎缩骨骼肌组织成分对体外培养成肌细胞的性能影响。方法:①获取长期失神经支配肌萎缩模型大鼠的腓肠肌,无菌条件下清洗、剪碎、匀浆、过滤,收集上清液;②收集Schwann细胞的体外培养基;③体外培养C2C12成肌细胞系,... 目的:探讨长期失神经萎缩骨骼肌组织成分对体外培养成肌细胞的性能影响。方法:①获取长期失神经支配肌萎缩模型大鼠的腓肠肌,无菌条件下清洗、剪碎、匀浆、过滤,收集上清液;②收集Schwann细胞的体外培养基;③体外培养C2C12成肌细胞系,扩增传代并分组:A.对照组,常规培养,无任何处理因素;B.添加Schwann细胞培养基;C.添加萎缩肌匀浆液。倒置显微镜观察3组细胞的形态特征,免疫荧光检测C2C12细胞MyoD和Myogenin的差异表达。结果:倒置显微镜下,各组细胞贴壁良好,A、C组形态无差异,未见分化肌管;B组于培养48h后细胞变纤细,可见肌管形成。荧光染色证实,培养24h后,3组均出现MyoD阳性细胞,C组阳性细胞数量明显多于A、B组;72h时,3组均可见Myogenin阳性细胞,B组阳性细胞数量明显多于A组,C组阳性细胞数量稀少。结论:长期失神经萎缩肌组织成分能够促进成肌细胞的增殖与活化,但抑制活化成肌细胞的进一步分化成熟。 展开更多
关键词 失神经肌萎缩 C2C12成肌细胞 MYOD MYOGENIN
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头皮和毛囊健康的多维度综合检测方法
4
作者 梁凤婷 王雪儿 +3 位作者 叶理 林枚芬 张敏 张琳 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第6期720-725,共6页
毛是由毛囊产生的,毛囊作为一种皮肤附属器官,生长在皮肤真皮之中,与皮脂腺共同开口于皮肤表面。毛囊的组织结构是由内外根鞘、毛球、隆突区以及毛乳头构成,在毛囊发育过程中,毛乳头组织来源于真皮,其他组织来源于表皮[1],健康茁壮的毛... 毛是由毛囊产生的,毛囊作为一种皮肤附属器官,生长在皮肤真皮之中,与皮脂腺共同开口于皮肤表面。毛囊的组织结构是由内外根鞘、毛球、隆突区以及毛乳头构成,在毛囊发育过程中,毛乳头组织来源于真皮,其他组织来源于表皮[1],健康茁壮的毛发是毛囊和头皮健康的外在表现。对于毛发而言,毛囊和头皮是制造者和维护者,缺一不可。 展开更多
关键词 头皮健康 头发健康 毛囊 头皮菌群 头皮屏障
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氯膦酸盐脂质体通过消耗巨噬细胞延缓周围神经损伤后功能性修复的实验研究
5
作者 李云伦 许逸舟 +7 位作者 蔡家乐 许淑怡 张家琪 傅兰雅 马心蕊 何叶 王祥海 郭家松 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第3期265-269,277,共6页
目的探究巨噬细胞消耗对周围神经损伤修复的影响。方法实验组小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂质体消耗巨噬细胞后制备坐骨神经夹伤模型,另外部分小鼠注射空载脂质体后神经损伤作为对照组。术后7 d利用免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞和GAP43阳性... 目的探究巨噬细胞消耗对周围神经损伤修复的影响。方法实验组小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂质体消耗巨噬细胞后制备坐骨神经夹伤模型,另外部分小鼠注射空载脂质体后神经损伤作为对照组。术后7 d利用免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞和GAP43阳性再生轴突。术后28 d再次进行免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞,并通过行为学、神经电生理检测运动功能和神经传导功能,腓肠肌称重和HE染色评估靶区肌萎缩。结果术后7 d和28 d,实验组神经夹伤远端巨噬细胞消耗效率均达到70%以上,术后7 d神经远端的GAP43阳性再生轴突比对照组更少、更短。术后28 d,实验组小鼠的运动能力和神经传导强度显著下降,神经传导潜伏期延长,腓肠肌湿重比和肌纤维面积显著变小。结论氯膦酸盐脂质体通过巨噬细胞消耗可导致神经损伤后的再生修复能力下降。 展开更多
关键词 巨噬细胞 氯膦酸盐 周围神经损伤 功能性修复
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脂肪源干细胞移植对糖皮质激素性骨质疏松骨量影响的实验研究 被引量:12
6
作者 陶晖 余美春 +5 位作者 杨会营 杨春 曲戎梅 戴景兴 余磊 原林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期817-821,共5页
目的探索异体脂肪源干细胞(ADSCs)移植对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨密度和骨组织微结构的影响,为GIOP的治疗探索一种新的方法。方法雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、治疗对照组(C组)和细胞治疗组(D组)。利... 目的探索异体脂肪源干细胞(ADSCs)移植对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨密度和骨组织微结构的影响,为GIOP的治疗探索一种新的方法。方法雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、治疗对照组(C组)和细胞治疗组(D组)。利用醋酸泼尼松龙建模成功后,C和D组分别通过尾静脉移植生理盐水和ADSCs。对各组大鼠作腰椎和股骨骨密度测量以及胫骨骨组织形态计量学分析。结果与A组相比,B组腰椎和股骨骨密度、骨小梁的相对体积、厚度和数量均明显降低,骨小梁的分离度和单位骨小梁破骨细胞数显著增加(P<0.05)。ADSCs治疗后,D组中的各项指标均明显改善,并与B组比较具有统计学差异(P<0.05),亦明显优于C组。结论 ADSCs可以有效的改善大鼠GIOP,这为GIOP的治疗提供了一种新的方法,也为"筋膜学假说"提供了部分实验支持。 展开更多
关键词 筋膜学 脂肪源干细胞 骨质疏松 骨组织形态计量学
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乙酰肝素酶、肝细胞生长因子和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌组织中的表达及其相关性 被引量:8
7
作者 王锦阳 黄文华 +5 位作者 李海滨 曾宝真 王亚 陈佳丽 何园 尤长宣 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期169-172,187,共5页
目的:研究乙酰肝素酶(HPA)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(ⅦGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床特征之间的关系;并分析三者表达的相关性。方法:采用免疫组织化学检测45例非小细胞肺癌组织及10例正... 目的:研究乙酰肝素酶(HPA)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(ⅦGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床特征之间的关系;并分析三者表达的相关性。方法:采用免疫组织化学检测45例非小细胞肺癌组织及10例正常组织中HPA、HGF及VEGF的表达水平。结果:非小细胞肺癌组织中HPA、vEGF的表达与正常组织表达、TNM分期有关。HGF的表达与正常组织的表达有关。三者中任意两者间在非小细胞肺癌组织中的表达均呈正相关性。结论:HPA、HGF与VEGF参与了非小细胞肺癌的发生、发展、浸润与转移;在非小细胞肺癌的发展过程中,三者之间可能存在协同作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 乙酰肝素酶 肝细胞生长因子 血管内皮生长因子
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CRMP-1真核表达载体的构建及其突起生长抑制作用 被引量:3
8
作者 郭国庆 辛莉 +2 位作者 邱小忠 沈伟哉 原林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期297-304,共8页
为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行... 为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行观察.结果显示,NGF诱导的PC12细胞具有典型的神经元形态特征,脂质体转染技术可成功地把CRMP-1基因导入细胞.过表达CRMP-1可明显抑制突起生长,促进突起坍塌,首先是细小突起缩短,然后是长突起,细胞突起的长度随CRMP-1蛋白表达时间延长呈逐渐缩短的趋势.突起提取液的测定显示,CRMP-1过表达的细胞较NGF诱导的和转染空载体的细胞突起明显减少(P<0.01).说明CRMP-1具有明显的突起生长抑制作用. 展开更多
关键词 坍塌反应调节蛋白 神经元 突起 生长 基因转染 基因表达
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血管化组织工程骨修复猕猴的胫骨缺损(英文) 被引量:5
9
作者 曾宪利 裴国献 +5 位作者 金丹 唐光辉 林海宁 陈书军 程文俊 黄爱文 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第33期174-178,F0003,共6页
背景:许多实验结果显示组织工程骨植入体内后,其血管化进程和有效程度对骨成骨愈合的优劣起到关键性作用。目的:建立组织工程骨修复猕猴胫骨段性缺损的血管化动物模型,观察其影像学和形态学特点,分析血管化程度和成骨的关系。设计:随机... 背景:许多实验结果显示组织工程骨植入体内后,其血管化进程和有效程度对骨成骨愈合的优劣起到关键性作用。目的:建立组织工程骨修复猕猴胫骨段性缺损的血管化动物模型,观察其影像学和形态学特点,分析血管化程度和成骨的关系。设计:随机对照动物实验。单位:南方医科大学南方医院创伤骨科。材料:支架主要成分为β-磷酸三钙,圆柱状,20mm×8mm(直径),侧方开纵槽2mm宽,内有轴向全长中空管直径3mm,中空管向两端及纵槽开放。孔隙率60%,孔径100~150μm。四五岁健康猕猴29只,体质量在3.5~5kg,雌雄不限。方法:实验于2003-10/2005-07在南方医科大学南方医院创伤骨科完成。①将27只猕猴右侧胫骨(共27处)制成中段20mm骨-骨膜缺损,采用随机数字表法随机分成3组。②筋膜-血管组在缺损处填塞由骨髓基质干细胞和具有特殊外型(侧槽和中空管)的β-磷酸三钙支架体外构建的复合物,在中空管内移入隐动静脉束的一段,外被带蒂深筋膜;筋膜组、空白组分别填塞组织工程骨并包裹筋膜和单纯组织工程骨。另取2只猕猴的无填充物胫骨缺损作缺损对照。钢板螺钉固定。③在术后4,8,12周时间点分别对各组骨-骨膜缺损行放射影像学评分和X射线阻射密度分析,以及血管面积图像分析。主要观察指标:骨-骨膜缺损放射影像学评分、X射线阻射密度分析、形态学检测以及血管面积图像分析。结果:29只猕猴均进入结果分析。①猕猴标本大体观察:术后12周:筋膜-血管组植入物各面及中央部完全被骨样组织所包裹或替代,坚硬,折不断,材料2/3被吸收;筋膜组和空白组植入物于内侧及前面仍有部分材料未被骨样组织所包裹或替代,用力可以折断,材料1/3被吸收。②各组支架材料组织学观察:随着时间的延长,3组支架材料均有不同程度的吸收,筋膜-血管组最明显;镜下观察,12周时移植物完全被骨样组织所包裹,材料中的血管样结构多呈“肺泡状”,分支多。筋膜组12周时形成的骨样组织把材料大部分包被,材料中央部少见血管样结构。空白组12周时可见移植物有少部分吸收,新骨及血管样结构的形成量稀少。③各组移植物血管面积图像分析:4,8,12周筋膜-血管组中央部和周围部的血管样结构面积均显著大于筋膜组和空白组(P<0.05)。而且随时间的推移呈上升趋势。④各组移植物X射线片观察:筋膜-血管组12周显示移植物密度明显降低,个别区域低于正常骨,连续性骨痂明显。筋膜和空白组12周移植物密度稍有降低,断面处有连续性骨痂。⑤各组骨缺损X射线片影像学评分结果:从X射线片骨缺损修复评分中可以看出,筋膜-血管组在4,8,12周均优于筋膜组和空白组(P<0.05)。结论:①实验所采用的血管化方法可以加快和提高组织工程骨的成骨作用。②材料的吸收水平与局部血管化程度成正相关。 展开更多
关键词 组织工程 血管 猕猴属 胫骨 磷酸钙类
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骨骼肌纤维NLRP3炎症小体激活、亚细胞定位及3D重建
10
作者 厉洋洋 菅晓婷 +6 位作者 黄静雯 王琪森 桂炜超 张小龙 赵子炜 胡稷杰 廖华 《中国临床解剖学杂志》 北大核心 2025年第2期168-174,共7页
目的探讨体外炎性环境中肌纤维内NLRP3炎症小体的激活、亚细胞定位及其3D重建。方法C2C12细胞体外培养、马血清分化;脂多糖(Lipopolysaccharide/LPS)及尼日利亚菌素(Nigericin/Nig)刺激C2C12肌管内NLRP3炎症小体激活;qPCR及Western blo... 目的探讨体外炎性环境中肌纤维内NLRP3炎症小体的激活、亚细胞定位及其3D重建。方法C2C12细胞体外培养、马血清分化;脂多糖(Lipopolysaccharide/LPS)及尼日利亚菌素(Nigericin/Nig)刺激C2C12肌管内NLRP3炎症小体激活;qPCR及Western blot分析NLRP3、ASC、Caspase-1基因及蛋白水平;免疫荧光分析NLRP3、ASC的聚集与共定位;共聚焦观察、Imaris软件重建显示聚合态NLRP3、ASC与特定细胞器(高尔基体、线粒体、内质网)的关联。结果体外条件下,LPS/Nig联合刺激可致肌纤维内NLRP3、ASC、Caspase-1基因、蛋白水平上调,胞浆内可见NLRP3、ASC聚集;肌纤维内线粒体功能分子TOM20、高尔基体分子TGN38显著上调,聚集态NLRP3、ASC与线粒体、高尔基体存在共定位。结论LPS/Nig刺激可诱导骨骼肌纤维内NLRP3炎症小体激活。活化的NLRP3炎症小体组分与线粒体及高尔基体密切关联。 展开更多
关键词 NLRP3炎症小体 C2C12细胞 Imaris 3D重建 细胞器
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损伤骨骼肌组织内CD8^+T细胞的功能特性 被引量:2
11
作者 冯利强 曾慧君 +3 位作者 刘幸卉 陈荣 黄维一 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第3期307-310,共4页
目的分析骨骼肌损伤后CD8+T细胞的渗出及其功能特性。方法机械挤压法制备小鼠胫骨前肌(TA)损伤模型。免疫组化、免疫荧光检测损伤肌组织内CD8+T细胞的渗出及其可能的CTL功能。结果 HE染色证实机械挤压引发显著的TA肌纤维坏死、退变和再... 目的分析骨骼肌损伤后CD8+T细胞的渗出及其功能特性。方法机械挤压法制备小鼠胫骨前肌(TA)损伤模型。免疫组化、免疫荧光检测损伤肌组织内CD8+T细胞的渗出及其可能的CTL功能。结果 HE染色证实机械挤压引发显著的TA肌纤维坏死、退变和再生。损伤肌组织内出现广泛的炎性渗出,损伤后7d(再生初期)可见较多的CD8+T细胞,少量CD8+T细胞共表达Perforin以及IFN-γ。结论与慢性肌炎的免疫反应相似,急性损伤同样会引发CD8a+T细胞的渗出、活化并具备CTL功能。但这种活化的CD8+CTL细胞仅短暂出现于肌组织的再生初期。 展开更多
关键词 T细胞 CD8 骨骼肌损伤 炎性反应
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携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建 被引量:2
12
作者 张黎声 邱小忠 +4 位作者 余磊 秦建强 陆云涛 杨俊 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期276-277,共2页
目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具。方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和... 目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具。方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;并通过细胞转染技术将Id2基因导入L6成肌细胞中。结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2cDNA片段,获取了转染外源性Id2基因的L6细胞。结论:我们成功构建了同时携带有G418筛选位点和增强绿色荧光蛋白的Id2真核表达载体。 展开更多
关键词 分化抑制因子2 构建 真核表达载体
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人快速型肌球蛋白结合蛋白C原核表达载体的构建及表达纯化 被引量:1
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作者 冯利强 刘幸卉 +3 位作者 陈荣 曾慧君 黄维一 廖华 《宁夏医科大学学报》 2015年第8期865-868,873,封4,共6页
目的构建人快速型肌球蛋白结合蛋白C(MyBP-C2)融合蛋白表达载体,高效表达和纯化p ET28aMyBPC2融合蛋白,为进一步研究MyBP-C2的生物学功能提供基础。方法 PCR扩增MyBP-C2基因片段,经双酶切定向克隆至表达载体p ET28a,构建原核重组表达载... 目的构建人快速型肌球蛋白结合蛋白C(MyBP-C2)融合蛋白表达载体,高效表达和纯化p ET28aMyBPC2融合蛋白,为进一步研究MyBP-C2的生物学功能提供基础。方法 PCR扩增MyBP-C2基因片段,经双酶切定向克隆至表达载体p ET28a,构建原核重组表达载体p ET28a-MyBPC2,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经层析纯化、透析复性,SDS-PAGE分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体p ET28a-MyBPC2,诱导后的融合蛋白经SDS-PAGE检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后得到了浓度为0.72g·L-1的融合蛋白4.52mg。结论 MyBP-C2表达载体构建成功,为研究人肌球蛋白结合蛋白C的生物学功能以及诱导建立新型实验性自身免疫性肌炎的动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人MyBP-C2基因 基因克隆 融合蛋白 原核表达
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松果体细胞微囊的组织相容性研究
14
作者 廖华 徐达传 +3 位作者 余磊 邱小忠 刘小静 黄美贤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期2027-2031,共5页
目的:制备松果体细胞微囊并进行动物移植实验,探讨松果体微囊与宿主体的组织相容性。方法: 游离并摘取乳鼠松果体,胰酶、胶原酶消化分离获取松果体细胞悬液,体外培养后进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海 藻酸钠(APA)微囊化处理,将囊化细胞与... 目的:制备松果体细胞微囊并进行动物移植实验,探讨松果体微囊与宿主体的组织相容性。方法: 游离并摘取乳鼠松果体,胰酶、胶原酶消化分离获取松果体细胞悬液,体外培养后进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海 藻酸钠(APA)微囊化处理,将囊化细胞与空囊植入大鼠体内(腹膜腔、肌间隙)。术后15、30 d回收微囊,采用形态学 观察、HE染色、细胞计数、高效液相色谱(HPLC)技术检测并分析回收囊的形态、囊内细胞活性、囊壁炎性浸润及纤维 化程度,从而判断APA囊膜在体内的组织相容性及其对松果体细胞的免疫保护效应。结果:微囊的腹腔回收率约为 85%,15 d回收囊大多囊壁完整,少数有破损,囊外粘附巨噬细胞。随植入时间的延长,炎性浸润逐渐加重,囊壁增 厚,同一时段微囊与空囊的回收率、囊壁纤维化程度无显著差异。检测证实,15 d回收微囊仍有褪黑素(MT)分泌功 能,但细胞功能迅速下降,30 d回收囊的MT检测呈阴性。结论:APA微囊有一定的组织相容性,对松果体细胞具备 免疫保护作用,囊内细胞生存期约为20 d左右,该时段内细胞能维持生物活性和MT分泌功能。 展开更多
关键词 松果体 APA微囊 移植 褪黑激素
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骨骼肌特异表达卵清蛋白(OVA)抗原转基因小鼠构建
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作者 黄涛 丁茂超 +5 位作者 史丹丹 谷瑞彩 肖将尉 郭梦霞 李俊桦 廖华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期733-736,共4页
目的利用PiggyBAC转座酶系统及受精卵注射法,将MCK3E-OVA-pA随机插入小鼠基因组,获得骨骼肌特异表达卵清蛋白(OVA)的转基因小鼠(Muscle-OVA Tg)。方法通过体外转录,获得PiggyBAC mRNA;将PiggyBAC mRNA和含有鸡全长OVA片段、骨骼肌肌酸... 目的利用PiggyBAC转座酶系统及受精卵注射法,将MCK3E-OVA-pA随机插入小鼠基因组,获得骨骼肌特异表达卵清蛋白(OVA)的转基因小鼠(Muscle-OVA Tg)。方法通过体外转录,获得PiggyBAC mRNA;将PiggyBAC mRNA和含有鸡全长OVA片段、骨骼肌肌酸激酶启动子(MCK)、H-2K^b引导序列、H-2Db跨膜序列的质粒显微注射至C57BL/6J小鼠受精卵中,获得转基因阳性首建鼠。将Muscle-OVA Tg鼠与野生B6小鼠杂交建系。PCR鉴定小鼠基因型;Westernblot检测小鼠各组织中OVA蛋白表达以验证其组织特异性。结果PCR检测表明,Muscle-OVA Tg的肌组织表达OVA mRNA;Western blot进一步证实Muscle-OVA Tg小鼠骨骼肌组织特异的OVA蛋白表达,其他组织/器官,如心、脾、肺、肾组织OVA表达均呈阴性。结论利用PiggyBAC转座酶系统成功构建骨骼肌特异表达鸡OVA抗原的转基因小鼠,为相关的骨骼肌免疫反应研究提供了有价值的动物模型。 展开更多
关键词 卵清蛋白 PIGGYBAC 转基因 骨骼肌
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磁性纳米材料在组织工程研究中的应用 被引量:1
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作者 蒋兴禄 邱小忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1049-1055,共7页
磁性纳米材料因其独特的理化性质在组织工程研究中被广泛地应用.本文主要从磁性纳米材料的表面化学活性、磁学性质以及生物应用磁性纳米材料的主要合成方法等几方面,综述了近年来利用磁性纳米材料设计组织工程支架材料的相关研究进展,... 磁性纳米材料因其独特的理化性质在组织工程研究中被广泛地应用.本文主要从磁性纳米材料的表面化学活性、磁学性质以及生物应用磁性纳米材料的主要合成方法等几方面,综述了近年来利用磁性纳米材料设计组织工程支架材料的相关研究进展,包括纳米条件下的生长因子及相关基因的包裹和释放、机械力学刺激、干细胞追踪以及细胞图案化. 展开更多
关键词 磁性纳米材料 组织工程 干细胞
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MC3T3-HA复合培养后的细胞凋亡检测
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作者 宋辰刚 邱小忠 +3 位作者 吴刚 余磊 赖桂华 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2007年第5期567-570,共4页
目的:探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)压片材料对小鼠MC3T3成骨细胞凋亡的影响,提供一种方便可行的组压片材料的生物相容性检测方法。方法:小鼠MC3T3成骨细胞株接种在HA压片材料上,应用光学显微镜和PI-Hoechst33342双染色荧光显微镜... 目的:探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)压片材料对小鼠MC3T3成骨细胞凋亡的影响,提供一种方便可行的组压片材料的生物相容性检测方法。方法:小鼠MC3T3成骨细胞株接种在HA压片材料上,应用光学显微镜和PI-Hoechst33342双染色荧光显微镜观察细胞,采用RT-PCR方法分析HA对Id2(Inhibitor of differentiation 2,分化抑制因子2)和OPN(osteopontin,骨桥蛋白)等基因表达的影响。结果:HA压片材料组MC3T3细胞凋亡率(78.7%)显著高于正常对照组(24.6%)(t’=28.1,P=0.000)。HA压片材料双荧光染色可以直接检测种子细胞的凋亡。结论:HA压片可促进小鼠MC3T3成骨细胞凋亡。 展开更多
关键词 羟基磷灰石 小鼠MC3T3成骨细胞 凋亡
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导电弹性水凝胶促进C2C12细胞增殖的实验研究
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作者 黄世嘉 吴威乐 +2 位作者 陈小星 王乐禹 刘成龙 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期277-281,287,共6页
目的本文主要探讨一种多巴胺激活的导电冷冻水凝胶(Dopamine-based polypyrrolemethacrylated gelatin cryogel,Ppy-GelMA)对成肌细胞活性的影响。方法通过扫描电镜了解材料结构、细胞粘附生长情况,并通过活死染色、CCK-8试验、Ki-67... 目的本文主要探讨一种多巴胺激活的导电冷冻水凝胶(Dopamine-based polypyrrolemethacrylated gelatin cryogel,Ppy-GelMA)对成肌细胞活性的影响。方法通过扫描电镜了解材料结构、细胞粘附生长情况,并通过活死染色、CCK-8试验、Ki-67免疫荧光染色明确此水凝胶对C2C12细胞的影响。结果扫描电镜结果显示此水凝胶具有均一连通的多孔结构,Ppy-GelMA导电水凝胶上的成肌细胞具有同向排列性;活死染色显示此水凝胶对C2C12成肌细胞有良好的细胞相容性;CCK-8检测显示Ppy-GelMA导电水凝胶上的细胞活力显著高于GelMA水凝胶上的细胞活力;Ki67免疫染色结果显示Ppy-GelMA导电水凝胶相比GelMA水凝胶拥有更高的Ki67阳性细胞率。结论 Ppy-GelMA导电水凝胶可促进成肌细胞增殖。 展开更多
关键词 冻胶 成肌细胞 聚吡咯 组织工程
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一种皮肤感染性慢性溃疡动物模型的构建方法
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作者 陈银燕 张敏 +3 位作者 王雪儿 卢魁 房兆鑫 张琳 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期565-571,577,共8页
目的构建一种皮肤感染性慢性溃疡动物模型。方法C57BL/6小鼠通过药物处理、磁铁造成创面后,使用3M无菌透明敷料对伤口进行覆盖,观测和记录小鼠伤口的变化。挤压后的第3、7、14、21、28 d,大体拍照,伤口部位取材,通过HE染色、Masson染色... 目的构建一种皮肤感染性慢性溃疡动物模型。方法C57BL/6小鼠通过药物处理、磁铁造成创面后,使用3M无菌透明敷料对伤口进行覆盖,观测和记录小鼠伤口的变化。挤压后的第3、7、14、21、28 d,大体拍照,伤口部位取材,通过HE染色、Masson染色、免疫组化染色、16SrDNA检测观察伤口的病理变化。结果大体观察第3天开始有腐肉覆盖,渗出液渗出,至28天腐肉增多,第1~28天伤口愈合率均小于0;与正常皮肤相比,HE染色显示,伤口部位存在大量炎症细胞浸润和坏死组织碎片;Masson染色显示,伤口部位仅少量胶原纤维散在分布于坏死组织中,且排列紊乱松散;继而免疫组化显示,伤口部位M1型巨噬细胞阳性率显著高于周围正常皮肤(P<0.001),M2型阳性率没有差异,M1与M2型巨噬细胞的比值最高可达10;免疫组化显示第14天炎症因子TNF-α和IL-1β在伤口部位高表达;进一步16SrDNA检测显示,第0天菌群多样化明显,第3天之后变形菌门占据90%以上,伤口细菌多样化消失,出现菌群失调。结论本研究利用药物提高小鼠氧化应激水平,磁铁挤压的方法模拟伤口部位组织缺血坏死,3M膜促进伤口腐肉形成和菌群失调,通过大体观察、组织学染色、免疫组化和菌群16SrDNA结果均符合临床上皮肤慢性溃疡的发展特征。该造模方法可以成功构建一种皮肤感染性慢性溃疡动物模型。 展开更多
关键词 皮肤慢性溃疡 炎症 巨噬细胞 菌群失调
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羟基磷灰石在硬组织替代材料中的复合与组装 被引量:1
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作者 吴广森 袁岱军 《国外医学(生物医学工程分册)》 2003年第3期141-144,共4页
本文介绍了硬组织替代材料复合方法从机械共混到超微结构自组装的不断发展过程 。
关键词 羟基磷灰石 生物材料 自组装
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