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ISEcp1B介导铜绿假单胞菌CTX-M型ESBLs传播的分子机制研究 被引量：1
1
作者 易建云 江洁华 +4 位作者 廖伟娇 陈涛 苏秀馨 李翊泉 徐韫健 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期532-534,共3页
目的了解CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在铜绿假单胞菌传播的分子机制。方法用K ir-by-Bauer(K-B)药敏法分析26株铜绿假单胞菌的耐药性;用多重聚合酶链式反应(PCR)扩增ESBLs、ISEcp1B插入序列及I类整合子;用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找... 目的了解CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在铜绿假单胞菌传播的分子机制。方法用K ir-by-Bauer(K-B)药敏法分析26株铜绿假单胞菌的耐药性;用多重聚合酶链式反应(PCR)扩增ESBLs、ISEcp1B插入序列及I类整合子;用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒。结果26株多重耐药铜绿假单胞菌对下列抗生素的耐药率为:(1)头孢噻肟(69.23%)、哌拉西林(65.38%)、替卡西林/克拉维酸(65.38%)、头孢他啶(57.69%)、头孢吡肟(46.15%)、环丙沙星(50.00%)、氨曲南(46.15%)、阿米卡星(34.62%)、亚胺培南(30.77%)、头孢哌酮/舒巴坦(23.08%);(2)11株铜绿假单胞菌中检出CTX-M-G1,其中4株同时检出TEM、SHV、CTX-M-G1、ISEcp1B及I类整合子,I类整合子内未扩增出β-内酰胺酶;(3)ISEcp1B下游均连接CTX-M型ESBLs,ISEcp1B右端有一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;-35及-10位点各有一个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用。结论ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 CTX—M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 整合子
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人骨形成蛋白2和人骨形成蛋白7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建 被引量：1
2
作者 吉建新 廖伟娇 +3 位作者 刘利东 卢春生 朱伯平 范婷婷 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期410-413,共4页
目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达... 目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2MP和pcDNA3.1(+)/BMP-7MP。结果总RNA提取液电泳可见在28S、18S和5S处出现明显的条带,PCR和酶切可在439bp和364bp出现条带,阳性克隆测序结果与Genebank中登录的序列一致。结论成功克隆出人BMP-2MP和BMP-7MP基因,成熟肽基因已与pcDNA3.1(+)连接,成功构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2MP和pcDNA3.1/BMP-7MP,为进一步研究BMP-2、BMP-7的功能及其成熟肽基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 骨形成蛋白-2 骨形成蛋白-7 基因克隆 真核表达载体
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TLR4基因多态性与慢性牙周炎关系初探 被引量：1
3
作者 吉建新 廖伟娇 +1 位作者 刘利东 郑贵星 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1813-1815,共3页
目的检测TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性在慢性牙周炎患者的分布,探讨其与慢性牙周炎的相关性。方法采用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术检测52例慢性牙周炎患者和76例正常人Asp299Gly和Thr399Ile的多态性... 目的检测TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性在慢性牙周炎患者的分布,探讨其与慢性牙周炎的相关性。方法采用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术检测52例慢性牙周炎患者和76例正常人Asp299Gly和Thr399Ile的多态性分布情况。结果在患者和正常人中均未检测出Asp299Gly和Thr399Ile多态性。结论中国南方人群Asp299Gly和Thr399Ile基因多态性与慢性牙周炎患者的相关性较低。 展开更多
关键词 TLR4 慢性牙周炎 基因多态性
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降钙素原在感染性发热诊断中的意义 被引量：1
4
作者 卢鉴财 廖伟娇 +1 位作者 陈务华 李碧珊 《检验医学与临床》 CAS 2011年第8期937-938,940,共3页
目的分析感染性发热患者中细菌感染和病毒感染血清降钙素原(PCT)水平的差别,探讨血清PCT在感染性发热诊断中的意义。方法采用半定量固相免疫测定法测定48例细菌感染性发热患者、40例病毒感染性发热患者以及30例健康对照组血清中的PCT,... 目的分析感染性发热患者中细菌感染和病毒感染血清降钙素原(PCT)水平的差别,探讨血清PCT在感染性发热诊断中的意义。方法采用半定量固相免疫测定法测定48例细菌感染性发热患者、40例病毒感染性发热患者以及30例健康对照组血清中的PCT,将检测结果分成4个水平,PCT<0.5 ng/mL,0.5 ng/mL≤PCT<2.0 ng/mL,2.0 ng/mL≤PCT<10.0 ng/mL和PCT≥10.0 ng/mL,分析PCT水平与细菌病毒感染之间的关系。以PCT≥0.5 ng/mL为阳性诊断标准。结果细菌感染组患者血清PCT水平高于病毒感染组和对照组,差异有统计学意义(P≤0.05),病毒感染组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测PCT能有效地鉴别细菌性和非细菌性感染性发热,有利于早期正确治疗。 展开更多
关键词 降钙素原 感染性发热 病原体
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及纯化 被引量：3
5
作者 李翊泉 徐韫健 +2 位作者 廖伟娇 江洁华 张东梅 《中国热带医学》 CAS 2010年第2期137-138,161,共3页
目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重... 目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希菌ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符。结论成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础。 展开更多
关键词 超广谱Β-内酰胺酶 CTX—M-3 原核表达 纯化
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量：1
6
作者 李翊泉 黄伟青 +3 位作者 徐韫健 张志强 张东梅 江洁华 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期597-601,共5页
目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表... 目的将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备。方法将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中原核表达。IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表达,利用镍琼脂糖凝胶亲和柱层析纯化蛋白,用纯化的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果可溶性检测表明表达产物以可溶性形式(上清中)和包涵体形式(沉淀中)两种形式存在。通过蛋白表达条件的优化实验,SDS-PAGE电泳结果显示18℃,0.8 mmol/L IPTG诱导24 h的CTX-M-3重组蛋白的可溶性表达最佳。SDS-PAGE电泳和Western-blot检测表明获得纯化的重组32 kD蛋白。免疫获得的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白抗血清的效价为1∶32。结论 pET-28a(+)/CTX-M-3表达载体在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,用His亲和层析柱纯化可获得高纯度可溶性的重组蛋白,成功制备了效价较高的抗CTX-M-3型ESBLs酶蛋白多克隆抗体。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CTX—M-3 原核表达 纯化 多克隆抗体
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CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究 被引量：1
7
作者 徐韫健 李翊泉 +2 位作者 廖伟娇 江洁华 张东梅 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期123-125,129,共4页
目的探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶... 目的探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得最佳表达条件。结果表达载体的最佳诱导条件是重组质粒在BL21(DE3)中18℃诱导24h,IPTG终浓度为0.8mmol/L;表达载体在最佳条件下表达时,目的蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的33%。结论获得pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌中表达CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)蛋白的最佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础。 展开更多
关键词 CTX—M一3 超广谱β一内酰胺酶 原核表达 条件
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CTX-M型阴沟肠杆菌插入序列的检测
8
作者 廖伟娇 江洁华 +2 位作者 徐韫健 李翊泉 张丽梅 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期798-801,共4页
目的研究插入序列ISEcp1B及超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)、AmpC酶基因在CTX-M型阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,ECL)中的分布,并分析其与耐药的关系。方法用MIC法分析2株含CTX-M基因的阴沟肠杆菌的耐药... 目的研究插入序列ISEcp1B及超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)、AmpC酶基因在CTX-M型阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,ECL)中的分布,并分析其与耐药的关系。方法用MIC法分析2株含CTX-M基因的阴沟肠杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC、ISEcp1B基因及I类整合子,对PCR产物进行DNA测序。结果 2株阴沟肠杆菌对青霉素类、四代头孢菌素、喹诺酮类和呋喃类抗生素耐药,对氨基糖苷类和碳青霉烯类表现为敏感。在ECL15同时检出TEM、CTX-M-G1、ACT-1、I类整合子及ISEcp1B基因;在ECL45同时检出SHV、CTX-M-G1及ISEcp1B基因。ECL45(400 bp)ISEcp1B的右端均连接一个反向重复序列,有-35及-10两个启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列一致,GenBank登录号:EF437434;ECL45(500 bp)无反向重复序列,只有一个-35启动子,与CTX-M型ESBLs编码起始距离不相同,与ECL15序列不相同,GenBank登录号:EF441350。结论在CTX-M型阴沟肠杆菌中检出2种新的插入序列ISEcp1B,其对CTX-M的高水平表达和传播可能起重要的调控作用。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 CTX—M 插入序列 传播
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强致病岛在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布及序列分析
9
作者 江洁华 谭获 +7 位作者 徐军 廖伟娇 易健云 张还珠 李翊泉 郑贵星 许志晟 朱伯平 《中国医师杂志》 CAS 2009年第1期37-41,共5页
目的探讨强致病岛（HPI）fyuA—irp2基因簇在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布及分子生物学特征。方法用多重聚合酶链式反应（PCR）技术扩增84株菌的fyuA—irp2基因簇，对产物进行DNA测序。结果irp1、irp2、irp3、irp4及，fyuA的总检出率... 目的探讨强致病岛（HPI）fyuA—irp2基因簇在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布及分子生物学特征。方法用多重聚合酶链式反应（PCR）技术扩增84株菌的fyuA—irp2基因簇，对产物进行DNA测序。结果irp1、irp2、irp3、irp4及，fyuA的总检出率分别是：40．48％、41．67％、5．95％、0％及16．67％；ECO6748、Kp7151及PAE7之fyuA蛋白质序列与YP_853080的相比有100％同源；克雷伯菌蜘49及Kp之irp2与AAA27636．1的同源性高（99％），而大肠埃希菌ECO4、ECO7与1176840的相符率低（90％），GenBank登陆号分别为：FJ211852及FJ211851；Kp51、Kp10及和49之irp1均与AL590842有99％同源；EC03、Kp51、Kp10及脚49之irp3与CAA73128相比有97％的同源。同种菌株突变的位点大致相同，不同种菌株间的突变差异较大。结论在多重耐药革兰阴性杆菌中检出HPI，fyuA-irp2基因簇有不同程度的突变和缺失。 展开更多
关键词 革兰阴性菌/致病力 基因 抗药性 微生物 聚合酶链反应
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