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热打击单核细胞来源外泌体中miR-155对肝细胞炎症的影响及其机制
1
作者 张明 李悦 +3 位作者 杨经文 施学智 肖吉彪 童华生 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1017-1022,共6页
目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)... 目的研究热打击单核细胞来源外泌体对肝细胞炎症损伤的影响及其与外泌体miR-155的关系。方法将单核细胞THP-1分为对照组、热打击组、乌司他丁组,分别提取3组细胞的外泌体,将其孵育肝细胞系HepG2细胞后,检测肝细胞上清中谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,肝细胞存活率,以及肝细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平,评估外泌体对肝细胞的作用;采用RT-qPCR检测单核细胞来源外泌体中miR-155含量的变化;通过数据库检索、双重荧光素酶报告基因检测及Western blotting实验分析miR-155的潜在靶点;观察热打击单核细胞外泌体对肝细胞miR-155的影响,以及使用乌司他丁或miR-155抑制剂处理对这些外泌体功能的影响。结果热打击单核细胞来源外泌体使肝细胞上清ALT及LDH水平、TNF-αmRNA及IL-6 mRNA水平明显增高(P<0.01),细胞存活率下降(P<0.05);热打击能增加单核细胞及其释放外泌体内含的miR-155水平;miR-155可能以细胞因子信号传导抑制分子1(SOCS1)作为靶基因发挥作用;采用热打击单核细胞外泌体孵育肝细胞可使后者miR-155水平增高,乌司他丁或miR-155抑制剂能降低热打击单核细胞外泌体miR-155水平并减少肝细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热打击单核细胞可上调肝细胞炎性因子导致的炎症损伤,这可能是通过释放外泌体miR-155至肝细胞并以SOCS1为潜在靶点实现的;乌司他丁可能缓解此条件下肝细胞内炎性因子mRNA的表达。 展开更多
关键词 中暑 外泌体 单核细胞 乌司他丁 肝细胞 MIR-155
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热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1对内皮细胞炎症的作用
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作者 张明 杨经文 +3 位作者 李悦 施学智 李华楚 童华生 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期670-675,共6页
目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采... 目的观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法制备中暑大鼠模型,将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6),分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定;对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述;采用Western blotting及酶联免疫吸附法(ELISA)分别验证中暑大鼠及患者单核细胞来源外泌体HMGB1的表达变化;将脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组、中暑组以及中暑+丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)组,分别添加来自对照组、中暑组大鼠外周血单核细胞上清中提取的外泌体及EP,采用RT-qPCR及Western blotting检测内皮细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平;采用ELISA检测健康志愿者及中暑患者外泌体NLRP3及IL-1β的表达水平。结果与对照组比较,中暑组大鼠单核细胞来源外泌体数量(×104/单核细胞)明显增多(11.24±2.66 vs.1.52±0.21,P<0.001)。蛋白质组学分析表明中暑组外泌体HMGB1表达较对照组上调18.63倍(P<0.001),且在NOD样受体等信号通路富集。Westernblotting检测结果显示,中暑组大鼠外泌体内含HMGB1表达量较对照组明显升高(4.13±0.22 vs.1.00±0.15,P<0.001)。ELISA检测结果显示,中暑组患者外泌体内含HMGB1水平(ng/ml)较对照组明显升高(0.29±0.11 vs.0.12±0.04,P=0.006)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与对照组比较,中暑组内皮细胞中NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,与中暑组比较,中暑+EP组NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平则明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热打击可提高单核细胞来源外泌体HMGB1水平,并可能通过HMGB1介导内皮细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 中暑 外泌体 单核细胞 高迁移率族蛋白B1
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氢化可的松对中暑大鼠去甲肾上腺素低反应性及炎症反应的影响
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作者 张明 陈怀生 +4 位作者 李悦 杨经文 施学智 梁泳欣 童华生 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期685-690,共6页
目的观察氢化可的松对中暑大鼠去甲肾上腺素低反应性及炎症反应的影响。方法根据是否接受中暑造模和氢化可的松干预将大鼠分为生理盐水对照组、生理盐水中暑组、氢化可的松对照组和氢化可的松中暑组。4组大鼠均在麻醉状态下监测颈动脉血... 目的观察氢化可的松对中暑大鼠去甲肾上腺素低反应性及炎症反应的影响。方法根据是否接受中暑造模和氢化可的松干预将大鼠分为生理盐水对照组、生理盐水中暑组、氢化可的松对照组和氢化可的松中暑组。4组大鼠均在麻醉状态下监测颈动脉血压,并分别完成下列3部分实验,每部分实验中各组大鼠的样本量均为8只。(1)两次负荷剂量的去甲肾上腺素(1μg/kg)静脉推注实验:观察4组大鼠接受两次负荷剂量的去甲肾上腺素后平均动脉压(MAP)升幅及回落至基线的时间;(2)恒定低剂量的去甲肾上腺素[25μg/(kg.h)]持续泵注实验:观察4组大鼠MAP维持水平及总体生存时间;(3)血管反应性相关生化指标检测:接受恒定低剂量去甲肾上腺素持续泵注的4组大鼠被处死后,留取血清和主动脉组织,检测血管扩张因子(血清NO、前列腺素E2)、激素(皮质醇、促肾上腺皮质激素)、促炎因子[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)]以及主动脉组织α1肾上腺素能受体mRNA表达水平。结果(1)生理盐水中暑组大鼠接受负荷剂量去甲肾上腺素注射后MAP升幅和持续时间低于生理盐水对照组,尤以第2次注射后明显。氢化可的松中暑组MAP升幅和持续时间高于生理盐水中暑组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)接受恒定低剂量的去甲肾上腺素持续泵注后,生理盐水中暑组MAP维持水平明显低于生理盐水对照组。与生理盐水中暑组比较,氢化可的松中暑组大鼠MAP增加,生存时间延长,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)生理盐水中暑组大鼠血清NO、前列腺素E2、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平与生理盐水对照组比较差异无统计学意义,但促炎因子水平明显增加,主动脉α1肾上腺素能受体的mRNA表达显著降低。相较于生理盐水中暑组,氢化可的松中暑组的促炎因子水平下降,主动脉α1肾上腺素能受体mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论循环衰竭的中暑大鼠存在对去甲肾上腺素的低反应性,氢化可的松能增加MAP和存活时间,改善低反应性,抑制炎性因子水平并增加主动脉肾上腺素能受体表达水平。 展开更多
关键词 中暑 低反应性 缩血管药 氢化可的松
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