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广西凡纳滨对虾源创伤弧菌耐药基因检测
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作者 谭雯予 邹杰 +7 位作者 黄威宁 童桂香 张洪耀 高铭佐 严子科 吴志刚 黄德生 梁静真 《现代畜牧科技》 2024年第4期37-41,共5页
该试验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源创伤弧菌中耐药基因ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM的携带情况。结果表明,27株创伤弧菌中,ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM基因的检出率分别为0%(0/27)... 该试验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源创伤弧菌中耐药基因ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM的携带情况。结果表明,27株创伤弧菌中,ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM基因的检出率分别为0%(0/27)、0%(0/27)、55.6%(15/27)、70.4%(19/27)、81.5%(22/27)和51.9%(14/27);共包含7种耐药基因型,其中优势耐药基因型为ant(3”)-I^(-)aac(3)-II^(-)sul1^(+)tet(A)^(+)tet(C)^(+)TEM^(+)。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 创伤弧菌 耐药基因 检测
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广西凡纳滨对虾源弧菌整合子相关基因检测
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作者 杨祖鹏 谭雯予 +5 位作者 吴志刚 魏华 张洪耀 黄德生 张振豪 梁静真 《水产研究》 2023年第1期13-22,共10页
本实验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源弧菌中整合子相关基因携带情况,为凡纳滨对虾弧菌病的综合防控提供指导。共采集溶藻弧菌7株,创伤弧菌10株,副溶血弧菌10株。PCR检测结果,27株弧菌中int1、sul1、qacEΔ1、int2和int3基因的检... 本实验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源弧菌中整合子相关基因携带情况,为凡纳滨对虾弧菌病的综合防控提供指导。共采集溶藻弧菌7株,创伤弧菌10株,副溶血弧菌10株。PCR检测结果,27株弧菌中int1、sul1、qacEΔ1、int2和int3基因的检出率依次为63.0%、40.7%、48.1%、0%和0%。受试菌株共包含5种整合子相关基因型,即int1−sul1−qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1−qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1+qacEΔ1−int2−int3−、int1+sul1+qacEΔ1+int2−int3−和int1+sul1−qacEΔ1+int2−int3−,其中优势基因型为int1−sul1−qacEΔ1−int2−int3−和int1+sul1+qacEΔ1+int2−int3−,各占37.0% (10/27)。在溶藻弧菌、创伤弧菌和副溶血弧菌的检出率:int1基因分别为28.6% (2/7)、90.0% (9/10)和60.0% (6/10);sul1基因分别为0% (0/7)、90.0% (9/10)和20.0% (2/10);qacEΔ1基因分别为14.3% (1/7)、90.0% (9/10)和30.0% (3/10)。int1、sul1和qacEΔ1基因在三种弧菌之间的检出率差异显著(P<0.05),在创伤弧菌中的检出率最高,在溶藻弧菌中的检出率最低。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 弧菌 整合子 检测
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广西罗非鱼源无乳链球菌耐药性及其四环素耐药基因检测 被引量:18
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作者 梁静真 黄立春 +7 位作者 韦慕兰 马沙 黎姗梅 文衍红 蒙兰丽 黄维 黄松 黄钧 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2077-2086,共10页
【目的】研究分析广西罗非鱼源无乳链球菌的耐药性及其四环素类耐药基因,为指导罗非鱼无乳链球菌病的临床用药和揭示其耐药机制提供参考依据。【方法】采用二倍稀释法测定8种抗生素对广西罗非鱼源无乳链球菌的最小抑菌浓度(MIC),运用PC... 【目的】研究分析广西罗非鱼源无乳链球菌的耐药性及其四环素类耐药基因,为指导罗非鱼无乳链球菌病的临床用药和揭示其耐药机制提供参考依据。【方法】采用二倍稀释法测定8种抗生素对广西罗非鱼源无乳链球菌的最小抑菌浓度(MIC),运用PCR检测菌株的四环素类耐药基因(tetM、tetO、tetL和tetS)携带情况,并以体外诱导法测定罗非鱼源无乳链球菌对多西环素耐药性的获得速率。【结果】37株广西罗非鱼源无乳链球菌对氨苄青霉素、多西环素、红霉素和土霉素均敏感,对硫酸新霉素和磺胺二甲嘧啶不敏感(已产生耐药性);仅从8株菌株中检出tetM基因,检出率21.6%(8/37),而tetO、tetL和tetS基因的携带率均为0,即广西罗非鱼源无乳链球菌仅存在tetM+tetO-tetL-tetS-和tetM-tetO-tetL-tetS-两种耐药基因型。经多西环素连续8代的体外传代诱导,6株携带tetM基因的罗非鱼源无乳链球菌MIC由0.24μg/mL上升至3.91μg/mL,即耐药性获得速率约16倍。PCR检测结果显示,各传代菌株均携带有tetM基因,且各传代菌株间的核甘酸相似性为100.0%。【结论】广西罗非鱼源无乳链球菌存在tetM+tetO-tetL-tetS-和tetM-tetOtetL-tetS两种耐药基因型,对氨苄青霉素、多西环素、红霉素和土霉素仍较敏感,对硫酸新霉素和磺胺二甲嘧啶已产生耐药性。携带tetM基因的罗非鱼源无乳链球菌经体外诱导后对多西环素的耐药性大幅度提高,说明未达有效抑菌浓度时极易诱导无乳链球菌产生耐药性。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 抗生素 耐药性 四环素类耐药基因
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2011~2016年广西罗非鱼源无乳链球菌的耐药谱型分析 被引量:10
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作者 黄艳华 马沙 +8 位作者 韩书煜 黄伟德 韦慕兰 蒙兰丽 吕小丽 覃惠明 李德壮 梁静真 黄钧 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1023-1031,共9页
【目的】了解广西罗非鱼源无乳链球菌耐药谱的变迁规律,为罗非鱼无乳链球菌病的有效防控和科学用药提供参考。【方法】采用K-B纸片扩散法对分离自广西南宁、玉林、柳州、河池、北海和百色等市养殖患病罗非鱼的48株无乳链球菌株进行抗生... 【目的】了解广西罗非鱼源无乳链球菌耐药谱的变迁规律,为罗非鱼无乳链球菌病的有效防控和科学用药提供参考。【方法】采用K-B纸片扩散法对分离自广西南宁、玉林、柳州、河池、北海和百色等市养殖患病罗非鱼的48株无乳链球菌株进行抗生素耐药性分析;并以抗生素的抑菌圈直径为变量,采用SPSS 18.0对无乳链球菌株进行聚类分析,以平方Euclidean距离表示菌株间的耐药性同类关系。【结果】48株广西罗非鱼源无乳链球菌的耐药谱型共有19种,谱型丰富度为39.6%。所有耐药谱型均为多重耐药谱型,耐药种数至少有3种。从采样地点来看,南宁市、玉林市、柳州市、河池市、北海市和百色市的分离株分别包含5、9、8、2、1和2种耐药谱型。2011~2016年各年份的菌株耐药谱型为:2011年10种(A、B、F、J、K、N、O、P、Q和S耐药谱型),2012年4种(B、H、N和S耐药谱型),2013年2种(L和M耐药谱型),2014年3种(B、D和S耐药谱型),2015年9种(B、C、D、E、G、H、J、R和S耐药谱型),2016年3种(B、I和J耐药谱型)。聚类分析将48株广西罗非鱼源无乳链球菌分成2个组群(Group I和Group II)和6个亚群(i^vi),其中Group I和Group II组群均含有11种耐药谱型,耐药谱型丰富度分别为37.9%和57.9%;Group I和Group II两组群无乳链球菌株的抗生素敏感性差异主要取决于其对恩诺沙星、氟苯尼考和环丙沙星的敏感率或耐药率。【结论】2011~2016年广西罗非鱼源无乳链球菌的耐药谱型呈多样性,谱型丰富度较高,且因来源地不同和年际变化存在一定差异性。此外,通过聚类分析可根据无乳链球菌的耐药情况对其进行有效分型,建议作为无乳链球菌流行病学分型方法给予推广应用。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 耐药谱 聚类分析 广西
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广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌耐药性及其整合子-基因盒检测 被引量:3
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作者 贺晓晨 韩书煜 +6 位作者 黎姗梅 胡大胜 黄德生 吴伟锋 黄钧 梁静真 胡庭俊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期893-900,共8页
【目的】检测广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌的耐药性和整合子-基因盒携带情况,为凡纳滨对虾副溶血弧菌病的防控及该菌耐药分子机制研究提供基础数据。【方法】采用K-B纸片扩散法测定副溶血弧菌对16种抗菌药物的敏感性;采用PCR检测I、II和... 【目的】检测广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌的耐药性和整合子-基因盒携带情况,为凡纳滨对虾副溶血弧菌病的防控及该菌耐药分子机制研究提供基础数据。【方法】采用K-B纸片扩散法测定副溶血弧菌对16种抗菌药物的敏感性;采用PCR检测I、II和III型整合子及I型整合子可变区基因盒的携带情况,并分析菌株整合子-基因盒携带情况与耐药性的相关性。【结果】104株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对16种抗菌药物表现出不同程度的敏感性,其中,对氟苯尼考(FFC)的敏感性最高,敏感率达82.7%;对磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲嘧啶(SM2)和复方磺胺嘧啶(SD)的耐药性较强,耐药率达93.3%~100.0%。在2013-2018年,广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌共有20种耐药谱,其中优势耐药谱为SD/SM2/SMM/SMD/SXT/RAD。PCR扩增结果表明,I型整合酶int1基因检出率为64.4%,sul1和qacEΔ1基因检出率分别为25.0%和27.9%。int1、sul1和qacEΔ1基因均为阳性的菌株检出率为22.1%。在int1、sul1和qacEΔ1基因均为阳性的菌株中,有6株检出携带基因盒,基因盒种类包括blaCTX-M-2-aadA1和blaVIM-60-aadA1-aacA。所有菌株均未检出II和III型整合酶基因。int1和qacEΔ1基因在广西北海市、钦州市和防城港市分离菌株中的检出率差异显著(P<0.05,下同)。int1阳性菌株对甲砜霉素(TAP)的耐药率显著大于int1阴性菌株,但其余抗菌药物的耐药表型与int1基因无显著相关性(P>0.05,下同);头孢拉定(RAD)的耐药表型与blaCTX-M-2和blaVIM-60基因、新霉素(NEO)的耐药表型与aadA1和aacA基因、磺胺类的耐药表型与sul1基因均无显著相关性。【结论】广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对氟苯尼考的敏感性最高,可考虑将该抗菌药物作为广西凡纳滨对虾副溶血弧菌病防治的备选药物。副溶血弧菌对大部分抗菌药物的耐药表型与int1基因间未检测到显著相关性、基因盒与相应抗菌药物的耐药表型间相关性也不显著,但I型整合子的流行增加了广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌产生多重耐药的可能性,因此应加强对弧菌整合子-基因盒的监控。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 副溶血弧菌 耐药性 整合子 基因盒
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2013-2016年广西沿海养殖凡纳滨对虾2种病毒的流行情况调查 被引量:3
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作者 梁静真 马沙 +7 位作者 肖双燕 韩书煜 黄艳华 黄德生 张振豪 吕忠坚 覃志彪 黄钧 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1088-1096,共9页
【目的】对2013-2016年广西沿海养殖凡纳滨对虾2种病毒(WSSV和IHHNV)的感染情况进行调查研究,为制定广西凡纳滨对虾WSSV和IHHNV的综合防治措施提供参考。【方法】依据广西沿海凡纳滨对虾养殖现状,分别在钦州市、防城港市和北海市设立监... 【目的】对2013-2016年广西沿海养殖凡纳滨对虾2种病毒(WSSV和IHHNV)的感染情况进行调查研究,为制定广西凡纳滨对虾WSSV和IHHNV的综合防治措施提供参考。【方法】依据广西沿海凡纳滨对虾养殖现状,分别在钦州市、防城港市和北海市设立监测区,每个监测区设立15~25个采样点,2013-2016年于每年5-9月进行4~5次采样,采用国家标准方法对各监测区凡纳滨对虾的虾苗和中成虾进行2种病毒携带情况调查分析。【结果】2013年检测样品317份,WSSV和IHHNV阳性率分别为19.2%和37.9%;2014年检测样品145份,WSSV和IHHNV阳性率分别为13.8%和2.1%;2015年检测样品138份,WSSV和IHHNV阳性率分别为21.0%和2.2%;2016年检测样品88份,WSSV和IHHNV阳性率分别为21.6%和0。2013-2016年各年度之间广西沿海凡纳滨对虾WSSV的阳性率无显著差异。2013、2015及2016年钦州WSSV阳性率最高,2014年北海WSSV阳性率最高。4年间,虾苗WSSV阳性率显著小于中成虾阳性率。2013-2016年广西沿海凡纳滨对虾IHHNV阳性率呈显著下降趋势,虾苗IHHNV阳性率显著小于中成虾阳性率。2013年钦州IHHNV阳性率最高,2014-2015年北海IHHNV阳性率最高,2016年3个监测区IHHNV检测均为阴性。2013-2016年,WSSV和IHHNV混合感染的样品数量呈逐年减少趋势。【结论】2013-2016年,WSSV在广西凡纳滨对虾主要养殖区依然有不同程度的流行,虾苗WSSV阳性率显著小于中成虾阳性率;IHHNV阳性率呈逐年下降趋势,虾苗阳性率也显著小于中成虾阳性率。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 WSSV IHHNV 流行情况 广西沿海
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广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌3种毒力基因检测及tlh基因的蛋白表达 被引量:1
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作者 刘杰 贺晓晨 +7 位作者 黎姗梅 黄艳华 张振豪 黄德生 杨廷雅 吴伟锋 梁静真 黄钧 《河北渔业》 2020年第8期28-32,共5页
采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)3种毒力基因tdh、trh和tlh的携带情况,并将tlh基因进行原核表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,67株副溶... 采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)3种毒力基因tdh、trh和tlh的携带情况,并将tlh基因进行原核表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,67株副溶血弧菌均未扩增出tdh和trh基因,而tlh基因检出率为100.0%,所检副溶血弧菌的毒力基因型为tdh-trh-tlh+。成功构建了原核表达质粒pET-28a-tlh,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测得到大小约为53 kDa的产物,与预测值相符。经Western blotting鉴定,该重组表达产物能与抗6×His标签的单克隆抗体发生特异性反应。 展开更多
关键词 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) tdh基因 trh基因 tlh基因 蛋白表达
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2013年广西沿海地区南美白对虾WSSV的流行性调查 被引量:1
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作者 梁静真 吕小丽 +6 位作者 邓小红 韦慕兰 蒙兰丽 韩书煜 吕忠坚 陈乃瑞 黄钧 《广西畜牧兽医》 2017年第6期295-298,共4页
为了解广西沿海地区南美白对虾白斑综合症病毒(WSSV)的感染情况,本文采用野外采样和PCR检测方法调查钦州市、钦南区、港口区、防城区、东兴市、北海市、铁山港区和合浦县等8个监测区的南美白对虾WSSV感染情况。2013年共检测南美白对虾样... 为了解广西沿海地区南美白对虾白斑综合症病毒(WSSV)的感染情况,本文采用野外采样和PCR检测方法调查钦州市、钦南区、港口区、防城区、东兴市、北海市、铁山港区和合浦县等8个监测区的南美白对虾WSSV感染情况。2013年共检测南美白对虾样本317份,WSSV总阳性率为19.6%。其中,虾苗和成虾的WSSV阳性率分别为1.5%和32.1%。在8个监测区中,北海市虾苗和成虾WSSV检出率均为最高,分别为5.6%和76.5%。总体上,2013年WSSV在广西沿海地区除铁山港外的南美白对虾养殖区均有不同程度的流行,且成虾平均阳性率高于虾苗。 展开更多
关键词 南美白对虾 WSSV 感染情况
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广西虾源副溶血弧菌喹诺酮类耐药基因qnrC、qnrS、qnrVC的检测及分析
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作者 盛雪晴 杨廷雅 +7 位作者 张振豪 潘英姿 梁祖銮 苏清荣 邓翊煊 陈耐牟 肖双燕 梁静真 《水产研究》 2020年第3期115-123,共9页
本实验通过PCR方法检测34株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌中喹诺酮类耐药基因qnrC、qnrS和qnrVC的分布情况。耐药基因检测结果表明,34株副溶血弧菌中qnrC、qnrS和qnrVC基因的检出率分别为2.9%、0.0%与2.9%。qnrC基因在防城港市、钦州市、... 本实验通过PCR方法检测34株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌中喹诺酮类耐药基因qnrC、qnrS和qnrVC的分布情况。耐药基因检测结果表明,34株副溶血弧菌中qnrC、qnrS和qnrVC基因的检出率分别为2.9%、0.0%与2.9%。qnrC基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率分别为16.7%、0%、0%。qnrS基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率均为0%。qnrVC基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率分别为0%、0%、6.3%,三种耐药基因的检出率在三个市的副溶血弧菌之间差异均不显著(P 】0.05)。基于qnrC基因的氨基酸序列同源性比较结果表明,防城港株F17383与副溶血弧菌TOE26912.1、TOP53441.1、OQU02262.1亲缘关系最近,氨基酸同源性分别为100.0%、98.8%和98.8%。基于qnrVC基因氨基酸序列同源性比较结果表明,北海株B13121与副溶血弧菌AXI69764.1亲缘关系最近,同源性为99.4%。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 副溶血弧菌 qnrC基因 qnrS基因 qnrVC基因
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黄芪多糖对黄喉拟水龟生长性能、血清生化指标及肠道菌群结构的影响 被引量:1
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作者 吴志刚 张洪耀 +7 位作者 高铭佐 严子科 谭雯予 韩书煜 施金谷 黄德生 梁静真 黄钧 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期388-396,共9页
【目的】探究饲料中添加不同水平的黄芪多糖对黄喉拟水龟(Mauremys mutica)生长性能、血清生化指标和肠道菌群结构的影响,以期为黄芪多糖在黄喉拟水龟饲料中的应用及黄喉拟水龟的健康养殖提供理论依据。【方法】将初始平均体重为128.36&... 【目的】探究饲料中添加不同水平的黄芪多糖对黄喉拟水龟(Mauremys mutica)生长性能、血清生化指标和肠道菌群结构的影响,以期为黄芪多糖在黄喉拟水龟饲料中的应用及黄喉拟水龟的健康养殖提供理论依据。【方法】将初始平均体重为128.36±1.80g的黄喉拟水龟随机分为5组,分别投喂黄芪多糖含量为0(M0,对照组)、0.25%(M25)、0.50%(M50)、0.75%(M75)和1.00%(M100)的等氮等脂饲料,每组设3个重复,每重复10只龟,投喂60 d后测定其生长性能指标和血清生化指标,以高通量测序分析肠道菌群结构。【结果】生长性能分析结果显示,M25、M50和M75组的黄喉拟水龟的增重率和特定生长率显著高于M0组(P<0.05,下同),饲料系数显著低于M0组,其中M50组的增重率和特定生长率最高、饲料系数最低。M25、M50、M75和M100组黄喉拟水龟背甲长、背甲宽和背甲高的日增长与M0组比较均无显著差异(P>0.05,下同)。血清生化指标检测结果显示,M25、M50和M75组的碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性显著高于M0组,M50、M75和M100组的过氧化氢酶活性显著高于M0组;M25、M50和M75组的丙二醛含量显著降低。肠道菌群分析结果显示,M25组群落丰富度指数(Sobs指数和ACE指数)显著高于M0组,群落多样性指数(Shannon指数和Simpson指数)与M0组无显著差异。M50、M75和M100组的Sobs指数、Chao1指数、ACE指数、Shannon指数和Simpson指数与M0组差异均不显著。在门分类水平上,各组丰度占比排名前3的菌群均为厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门,0.25%~1.00%的黄芪多糖对门分类水平的肠道菌群组成无显著影响。在属分类水平上,M50组的瘤胃球菌属1和M75组的汉氏盐单胞菌属相对丰度显著提高;添加0.25%和1.00%的黄芪多糖对属分类水平的肠道菌群组成均无显著影响。【结论】饲料中添加适量的黄芪多糖能有效地促进黄喉拟水龟生长、提高抗氧化能力并改善肠道菌群结构。综合分析,建议饲料中黄芪多糖添加量为0.50%。 展开更多
关键词 黄芪多糖 黄喉拟水龟 生长性能 血清生化指标 肠道菌群结构
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三种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼的保护性实验
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作者 盛雪晴 梁金亨 +7 位作者 叶小红 潘英姿 梁祖銮 苏清荣 邓翊煊 刘杰 梁静真 黄钧 《广西畜牧兽医》 2021年第1期6-9,47,共5页
为了探讨三种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼的免疫保护作用,在防病上提供理论依据,将分离自患病黄颡鱼的温和气单胞菌、恶臭假单胞菌和类志贺邻单胞菌3种细菌浓度均调至约5×108CFU/mL,按1∶1∶1的比例混合均匀成混合细菌悬液,然后制成... 为了探讨三种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼的免疫保护作用,在防病上提供理论依据,将分离自患病黄颡鱼的温和气单胞菌、恶臭假单胞菌和类志贺邻单胞菌3种细菌浓度均调至约5×108CFU/mL,按1∶1∶1的比例混合均匀成混合细菌悬液,然后制成福尔马林混合灭活疫苗,对黄颡鱼(体重约14.1g±1.2g)进行免疫保护试验,分别在免疫注射后7d、14d和28d进行3种细菌混合活菌的人工感染试验,以检测混合灭活疫苗的保护率。试验结果,使用0.5%福尔马林在25℃条件下灭活菌液24h可达到完全灭活要求,在人工感染后的第1d~3d为各试验组和对照组黄颡鱼的死亡高峰期,在免疫注射的7d、14d和28d后,混合灭活疫苗的免疫保护率依次为64.2%、92.4%和89.0%。表明本试验的3种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼具有一定的保护作用,在免疫注射14d后保护率达到最高。 展开更多
关键词 黄颡鱼 混合灭活疫苗 免疫保护
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黄喉拟水龟Cathelicidin基因克隆及表达分析 被引量:1
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作者 魏华 谭雯予 +7 位作者 吴志刚 杨祖鹏 张洪耀 韩书煜 施金谷 黄德生 梁静真 黄钧 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1559-1567,共9页
【目的】克隆黄喉拟水龟(Mauremys mutica)Cathelicidin基因(MmCath)并分析其组织表达特征,为深入研究MmCath基因在黄喉拟水龟先天免疫中的潜在作用提供理论依据。【方法】运用RACE克隆黄喉拟水龟MmCath基因cDNA序列,利用生物信息学软... 【目的】克隆黄喉拟水龟(Mauremys mutica)Cathelicidin基因(MmCath)并分析其组织表达特征,为深入研究MmCath基因在黄喉拟水龟先天免疫中的潜在作用提供理论依据。【方法】运用RACE克隆黄喉拟水龟MmCath基因cDNA序列,利用生物信息学软件进行序列特征分析,并通过实时荧光定量PCR检测MmCath基因在黄喉拟水龟不同组织中的表达特征及细菌攻毒后的表达情况。【结果】MmCath基因cDNA序列全长777 bp,包括63 bp的5’非编码区、483 bp的开放阅读框(ORF)和231 bp的3’非编码区。MmCath基因编码160个氨基酸残基,包括N端的信号肽区,含有4个保守半胱氨酸(Cys)残基的Cathelin肽区和C端的成熟肽区,符合Cathelicidins蛋白家族典型特征。MmCath前体蛋白相对分子质量为17.74 k D,理论等电点(p I)为5.27,其二级结构中α-螺旋占31.25%,无规则卷曲占20.63%,β-折叠占48.12%。黄喉拟水龟MmCath前体蛋白氨基酸序列与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)Cathelicidin氨基酸序列的相似性最高,达80.63%,亲缘关系最近。MmCath基因在黄喉拟水龟的表达具有组织差异性,以脾脏和肝脏中的相对表达量较高,在表皮、心脏、肾脏、肺脏、脑、肠道和肌肉等组织中的相对表达量较低;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后MmCath基因表达上调,在攻毒后第3和第6 h其相对表达量极显著高于攻毒前(0 h)的相对表达量(P<0.01,下同),之后有所下降,在攻毒后第36 h再极显著上升,随后下降。【结论】从黄喉拟水龟中克隆的MmCath基因属于Cathelicidins基因家族,参与了黄喉拟水龟抗病原感染过程,可为有效控制黄喉拟水龟细菌性疾病提供新思路。 展开更多
关键词 黄喉拟水龟 Cathelicidin基因 基因克隆 表达特征
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金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的急性毒性试验
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作者 吴志刚 蒙兰丽 +5 位作者 张洪耀 谭雯予 魏华 杨祖鹏 李文红 梁静真 《现代畜牧科技》 2023年第3期11-13,共3页
台湾泥鳅是稻鱼综合种养中常见的养鱼品种。为确定真菌杀虫剂金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的安全浓度,本研究进行金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的急性毒性试验。结果表明,金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的24 h半致死浓度(LC_(50))为9... 台湾泥鳅是稻鱼综合种养中常见的养鱼品种。为确定真菌杀虫剂金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的安全浓度,本研究进行金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的急性毒性试验。结果表明,金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的24 h半致死浓度(LC_(50))为93.79 mg/L,48、72 h和96 h的半致死浓度均为86.24 mg/L,金龟子绿僵菌CQMa421对台湾泥鳅的毒性可评价为低毒;安全浓度为21.87 mg/L,该安全浓度远高于金龟子绿僵菌CQMa421在水稻上施用的有效杀虫用量。本研究结果初步确定金龟子绿僵菌CQMa421在稻鳅综合种养中可以作为水稻生产的杀虫剂安全使用。 展开更多
关键词 台湾泥鳅 金龟子绿僵菌CQMa421 急性毒性 半致死浓度 安全浓度
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黄沙鳖白底板病病原菌的分离鉴定及6种毒力基因检测 被引量:38
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作者 黄钧 黄艳华 +7 位作者 胡大胜 罗华平 施金谷 彭民毅 禤均成 覃丽芬 滕忠作 曾桂忠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期844-854,共11页
用常规方法从患典型白底板病黄沙鳖的心脏、肝脏等处进行细菌的接种分离,通过人工感染确定分离菌株的致病性,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,K-B纸片扩散法进行药敏试验,PCR检测病原菌的6种毒力基... 用常规方法从患典型白底板病黄沙鳖的心脏、肝脏等处进行细菌的接种分离,通过人工感染确定分离菌株的致病性,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,K-B纸片扩散法进行药敏试验,PCR检测病原菌的6种毒力基因。试验结果,共分离到13株病原菌,其中嗜水气单胞菌9株,温和气单胞菌4株。在9株嗜水气单胞菌中,有5株与Aeromonas hydrophila ATCC 7966菌株亲源关系最近,4株与Aeromonas hydrophila北京株QDC01的亲源关系最近;而4株温和气单胞菌与Aeromonas sobria ATCC43979的亲源关系最近。药敏试验结果,仅头孢哌酮对13株病原菌都高度敏感,来源于不同养殖区域的病原菌药敏结果相差较大。6种毒力基因的阳性率,Aer、Act和ahp均为100%,hly和Alt为92.31%,ahal为76.92%;毒力基因型共有4种,嗜水气单胞菌主要为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+基因型,而温和气单胞菌主要为hly+Aer+Alt-Act+ahal+ahp+基因型,同时携带hly基因的菌株其致病力更强。 展开更多
关键词 黄沙鳖 白底板病 嗜水气单胞菌 温和气单胞菌 毒力基因
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斑点叉尾肠套叠症病原菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:15
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作者 彭亚 刘杰 +4 位作者 胡大胜 黄艳华 黄钧 梁静真 曾桂忠 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2014年第4期67-72,共6页
从患典型肠套叠症的濒死斑点叉尾(Ictalurus punctatus)肝脏分离到1株病原菌GX-1,经API 20NE鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。16S rRNA基因测序结果,该菌株与温和气单胞菌NCIMB 12065株的亲缘关系最近,相似性达99.8%。该菌株... 从患典型肠套叠症的濒死斑点叉尾(Ictalurus punctatus)肝脏分离到1株病原菌GX-1,经API 20NE鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。16S rRNA基因测序结果,该菌株与温和气单胞菌NCIMB 12065株的亲缘关系最近,相似性达99.8%。该菌株对健康斑点叉尾鱼种和成鱼均具有很强的致病力,人工感染发病鱼症状与自然病鱼症状基本一致。药敏试验结果表明,GX-1对头孢拉定、先锋必等15种抗生素敏感,对苯唑青霉素和青霉素G耐药。 展开更多
关键词 斑点叉尾(鱼回) ( ICTALURUS punctatus) 肠套叠症 温和气单胞菌( AEROMONAS sobria)
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黄沙鳖红底板病病原菌的分离鉴定及其毒力基因检测 被引量:23
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作者 黄艳华 黄钧 +3 位作者 胡大胜 施金谷 彭民毅 彭亚 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期2116-2121,F0003,共7页
以常规方法从患典型红底板病黄沙鳖的心脏、肝脏和腹水等处分离到5株病原菌,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,PCR检测病原菌的6种毒力基因。结果表明,5株病原菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophil... 以常规方法从患典型红底板病黄沙鳖的心脏、肝脏和腹水等处分离到5株病原菌,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,PCR检测病原菌的6种毒力基因。结果表明,5株病原菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与Aeromonas hydrophila QDC01菌株的亲源关系最近。6种毒力基因的阳性率,hly、Aer和Act为100%,ahal、Alt和ahp为80%;毒力基因型共3种,在5株菌株中的分布情况为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+3株,hly+Aer+Alt-Act+ahal+ahp-1株,hly+Aer+Alt+Act+ahal-ahp+1株。试验所检测的5株嗜水气单胞菌的毒力基因型主要为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+,Alt、ahp和ahal基因的缺失对嗜水气单胞菌的致病力没有影响。 展开更多
关键词 黄沙鳖 红底板病 嗜水气单胞菌 毒力基因
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黄沙鳖疖疮病的病原菌分离鉴定及药敏试验 被引量:13
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作者 彭亚 刘杰 +5 位作者 胡大胜 黄艳华 梁静真 植淇业 李凌波 黄钧 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1296-1301,共6页
【目的】对广西崇左市某养鳖场患疖疮病的黄沙鳖(Trionyx sinensis)进行病原菌分离鉴定及药敏试验,为今后生产中有效防治黄沙鳖疖疮病提供参考。【方法】以常规方法从患病黄沙鳖肝脏和心脏取样进行细菌分离,经人工感染试验确定病原菌的... 【目的】对广西崇左市某养鳖场患疖疮病的黄沙鳖(Trionyx sinensis)进行病原菌分离鉴定及药敏试验,为今后生产中有效防治黄沙鳖疖疮病提供参考。【方法】以常规方法从患病黄沙鳖肝脏和心脏取样进行细菌分离,经人工感染试验确定病原菌的致病性,用API20NE细菌鉴定系统和16SrRNA基因序列分析鉴定病原菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,并根据药敏试验结果选用高度敏感药物进行治疗。【结果】分离获得两株病原菌(X0805A和X0805B),经鉴定均为温和气单胞菌(Aeromonas sobria);在构建的系统发育进化树中,两株病原菌与Aeromonas sobri NCIMB12065(X60412)菌株亲源关系最近,相似性达99.9%,与Aeromonas sobri ATCC 43979(X74683)的相似性为99.6%;两株病原菌的药敏试验结果基本一致,对先锋必、复达欣、头孢呋肟、氧氟沙星、菌必治、呋喃妥因等6种药物极度敏感,对阿米卡星、卡那霉素、链霉素、利福平、氟哌酸、庆大霉素等6种高度敏感,对苯唑青霉素、万古霉素、环丙沙星、复方新诺明、氨苄青霉素、先锋霉素Ⅴ、四环素、妥布霉素、先锋霉素Ⅵ及青霉素G等药物已产生耐药性。【结论】引起广西崇左市某养殖场黄沙鳖疖疮病的病原菌为温和气单胞菌,以先锋必拌料投喂并结合全塘泼洒二氧化氯进行防治可获得良好的效果。 展开更多
关键词 黄沙鳖 疖疮病 温和气单胞菌 分离鉴定 药敏试验
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黄颡鱼暴发性流行病病原的分离鉴定及其3种毒力基因检测 被引量:16
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作者 刘杰 龙宜楠 +6 位作者 黄钧 梁静真 胡大胜 龙苏 牛志伟 彭亚 植淇业 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第2期56-61,共6页
为查明黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)暴发性流行病的病原菌及其3种毒力基因的携带情况,以常规方法进行细菌分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API 20NE和16S rRNA基因序列分析进行细菌鉴定,PCR扩增法检测病原菌的3种毒力基因。结... 为查明黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)暴发性流行病的病原菌及其3种毒力基因的携带情况,以常规方法进行细菌分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API 20NE和16S rRNA基因序列分析进行细菌鉴定,PCR扩增法检测病原菌的3种毒力基因。结果显示,从发病症状典型的黄颡鱼肝脏中分离到1株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)GXGP1,与嗜水气单胞菌标准株ATCC 7966T的同源性为99.9%,对黄颡鱼有很强致病力,是引起黄颡鱼暴发性流行病的病原菌,该菌携带有Aer、hly和ahp 3种毒力基因。 展开更多
关键词 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) 毒力基因
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山瑞鳖红底板病病原菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:5
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作者 刘杰 胡大胜 +5 位作者 黄钧 梁静真 彭亚 覃志彪 植淇业 李大广 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期712-716,共5页
【目的】了解山瑞鳖红底板病的病原菌及其对药物的敏感性,为生产中有效防治该病提供科学依据。【方法】以常规方法从患红底板病山瑞鳖的肝脏、心脏和腹水中分离病菌,人工感染确定其致病性,以API 20NE生化鉴定与16S r RNA基因序列分析相... 【目的】了解山瑞鳖红底板病的病原菌及其对药物的敏感性,为生产中有效防治该病提供科学依据。【方法】以常规方法从患红底板病山瑞鳖的肝脏、心脏和腹水中分离病菌,人工感染确定其致病性,以API 20NE生化鉴定与16S r RNA基因序列分析相结合的方法鉴定病原菌,并采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。【结果】从患病山瑞鳖的心脏、肝脏和腹水中分离到3株优势菌株,经鉴定均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与标准株ATCC 7966的亲缘关系最近,同源性达99.6%。3株病原菌对舒普深、菌必治、多粘菌素B和先锋必等4种药物均高度敏感,而对先锋霉素VI、青霉素G和氨苄青霉素等3种药物均不敏感。【结论】引起广西南宁市某养鳖场山瑞鳖红底板病的病原菌是嗜水气单胞菌,可选用舒普深、菌必治、多粘菌素B和先锋必等药物进行治疗。放养密度大、水质条件差和相互咬伤是山瑞鳖在保温越冬期间红底板病暴发性流行的诱发因子。 展开更多
关键词 山瑞鳖 红底板病 嗜水气单胞菌 分离鉴定 药敏试验
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禾花鲤致病性铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:6
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作者 龙苏 梁静真 +5 位作者 韩书煜 范华龙 牛志伟 邓小红 胡大胜 黄钧 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期988-992,共5页
探明广西桂林市全州县禾花鲤暴发性死亡的病原菌及其药敏特性,为有效防控禾花鲤暴发性死亡现象提供依据。按常规方法进行病原菌的分离,人工感染试验确定病原菌,分别以API 20NE和16S rRNA基因序列分析对病原菌进行生化鉴定和分子鉴定,K-... 探明广西桂林市全州县禾花鲤暴发性死亡的病原菌及其药敏特性,为有效防控禾花鲤暴发性死亡现象提供依据。按常规方法进行病原菌的分离,人工感染试验确定病原菌,分别以API 20NE和16S rRNA基因序列分析对病原菌进行生化鉴定和分子鉴定,K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果表明,从患病禾花鲤中分离到1株优势菌株TH4,该菌株对禾花鲤的平均致死率为80.00%,是引起禾花鲤暴发性死亡的病原菌;API 20NE和16S rRNA鉴定结果,TH4为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),与标准株Pseudomonas aeruginosa PA94(KM013815)的亲缘关系最近,同源相似度99.9%;病原菌TH4对菌必治等7种药物高度敏感,对青霉素G等7种药物耐药。 展开更多
关键词 禾花鲤 铜绿假单胞菌 病原分离与鉴定
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