分别提取锯缘青蟹Scylla serrata卵巢、精巢、眼柄、促雄腺的总RNA,等量混合后经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5′end of RNA transcript)技术及DSN(duplex-specific nuclease)的特性构建线性化cDNA质粒文...分别提取锯缘青蟹Scylla serrata卵巢、精巢、眼柄、促雄腺的总RNA,等量混合后经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5′end of RNA transcript)技术及DSN(duplex-specific nuclease)的特性构建线性化cDNA质粒文库。经检测文库约含有5.3×107重组子,扩增后的文库含有1011以上重组子。文库的插入cDNA长度为0.5—2.5kb,重组率大于98%。从构建的文库中随机挑取5 202个克隆进行大规模EST测序,获得3 346条ESTs,其中长度大于100bp的高质量ESTs 2 697条。经拼接与软件分析,2 697 ESTs代表了2 522个Unigenes,包括2 355个Singlets和167个Contigs,冗余率6.49%。EST序列经生物信息学分析(BLASTX,e<10-6),发现了Sry-like protein C、Sox14 protein、Sox4b、sex-determining protein fem-1、vitellogenin、vitellogenin receptor、cyclin A、cathepsin C和cyclin-dependent kinase 2等与性别分化和性腺发育相关的基因,以及热休克蛋白家族、泛素系统、抗氧化防御体系和抗病相关的功能基因。该文库具有较高的质量和利用价值,可为更大规模EST分析及采用基因芯片技术开展锯缘青蟹性腺发育及性别分化相关功能基因的研究奠定基础。展开更多
为探讨锯缘青蟹(Scylla serrata)性腺发育的分子机制,本研究提取锯缘青蟹卵巢的总RNA,经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5 end of RNAtranscript)技术及双链特异核酸内切酶DSN(duplex-specific nuclease)的...为探讨锯缘青蟹(Scylla serrata)性腺发育的分子机制,本研究提取锯缘青蟹卵巢的总RNA,经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5 end of RNAtranscript)技术及双链特异核酸内切酶DSN(duplex-specific nuclease)的特性构建均一化cDNA文库。经检测文库约含有4.7×107重组子,扩增后的文库含有1011以上重组子。从文库中随机挑取24个克隆进行PCR检测,文库的插入cDNA长度为500bp-2.5kb,重组率为95.8%。该文库的成功构建,为采用基因芯片技术开展锯缘青蟹性腺发育相关功能基因的研究奠定了基础。展开更多
文摘为探讨锯缘青蟹(Scylla serrata)性腺发育的分子机制,本研究提取锯缘青蟹卵巢的总RNA,经oligotex试剂分离mRNA,利用SMART(Switch mechanisms at the 5 end of RNAtranscript)技术及双链特异核酸内切酶DSN(duplex-specific nuclease)的特性构建均一化cDNA文库。经检测文库约含有4.7×107重组子,扩增后的文库含有1011以上重组子。从文库中随机挑取24个克隆进行PCR检测,文库的插入cDNA长度为500bp-2.5kb,重组率为95.8%。该文库的成功构建,为采用基因芯片技术开展锯缘青蟹性腺发育相关功能基因的研究奠定了基础。
