抗菌、抗氧化和厚朴酚复合纳米纤维膜的制备及性能研究

1

作者 张强 文雯 +3 位作者 孙近 谭淋 施亦东 张勇 《包装工程》 CAS 北大核心 2024年第13期18-24,共7页

目的满足新型天然食品活性包装材料的需求。方法天然植物苯酚和厚朴酚(HK)为活性成分,采用共混静电纺丝工艺制备PLGA-HK复合纳米纤维膜,避免食品氧化及受到微生物的侵袭。结果通过FT-IR、扫描电镜、TG、水接触角等表征手段,证明PLGA-HK... 目的满足新型天然食品活性包装材料的需求。方法天然植物苯酚和厚朴酚(HK)为活性成分,采用共混静电纺丝工艺制备PLGA-HK复合纳米纤维膜,避免食品氧化及受到微生物的侵袭。结果通过FT-IR、扫描电镜、TG、水接触角等表征手段,证明PLGA-HK复合纳米纤维膜具有均匀的纤维形貌,以及良好的热稳定性和表面疏水性。此外,PLGA-HK复合纳米纤维膜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率均大于等于99%,抗氧化活性值达到(61.33±7.71)%,且活性成分在作用过程中不会溶出,其安全性较高。结论在食品保鲜应用中,PLGA-HK复合纳米纤维膜可有效保持食品品质,延长食品保质期,具有作为食品保鲜应用活性包装材料的潜力。 展开更多

关键词 和厚朴酚 抗菌 抗氧化 纳米纤维膜 食品保鲜

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制药企业实验室信息管理系统的设计及应用

2

作者 舒泽柳 江虎 潘其麟 《质量安全与检验检测》 2024年第5期79-83,共5页

为实现制药企业实验室业务的规范化、自动化、数字化管理,进一步提升实验室的管理水平,本文对制药企业实验室信息管理系统(LIMS)进行研究。LIMS基于完善的检验检测质量管理体系,按照标准化的实验室管理理念,系统包含了检验管理、实验室... 为实现制药企业实验室业务的规范化、自动化、数字化管理,进一步提升实验室的管理水平,本文对制药企业实验室信息管理系统(LIMS)进行研究。LIMS基于完善的检验检测质量管理体系,按照标准化的实验室管理理念,系统包含了检验管理、实验室管理、实验用品管理、质量管理、统计分析及公共信息6大模块,对传统的实验室业务管理模式进行了多角度的升级和改造。通过统计并分析制药企业LIMS的应用数据,总结其优缺点,以提升制药企业实验室的管理水平。制药企业通过LIMS的应用,规范了检验业务流程,实现检验的标准化和自动化,有效提升了实验室的管理水平和工作效率。 展开更多

关键词 制药企业 实验室信息管理系统 LIMS应用

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高纯度白喉毒素突变体CRM197的制备及鉴定

3

作者 黄杰 李松 +4 位作者 孙俊 赖艺 何刚 魏鑫 侯文礼 《中国测试》 CAS 北大核心 2023年第11期176-183,共8页

为了制备高纯度的白喉毒素无毒突变体CRM197,可作为载体蛋白用于细菌性结合疫苗开发,对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化,并克隆至表达载体pET28a(+)中,将鉴定正确的重组质粒pET28a-CRM197转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并... 为了制备高纯度的白喉毒素无毒突变体CRM197,可作为载体蛋白用于细菌性结合疫苗开发,对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化,并克隆至表达载体pET28a(+)中,将鉴定正确的重组质粒pET28a-CRM197转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并分析其表达形式及表达条件的优化。再对表达的重组CRM197蛋白进行纯化,最后对纯化的CRM197进行WB、纯度、分子量和圆二色谱等检测项目的初步鉴定分析。PCR酶切和测序鉴定结果表明重组质粒pET28a-CRM197构建成功,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,获得重组工程菌(E.coli(DE3/p28a/197))。该重组工程菌发酵的最佳接种量为5%~10%(v/v),且主要以包涵体形式表达,收获的菌体在高压均质机破碎压力为1000 bar的条件下进行破碎,然后利用6 mol/L盐酸胍进行溶解变性,复性及经30 kD超滤膜包超滤后上纯化系统AKTA pure150 M,经一步阴离子交换层析进行纯化,其纯度可达98%以上,WB、分子量及圆二色谱等鉴定结果均与标准品一致。综上所述,成功建立大肠菌表达系统CRM197制备方法,具有无标签、产量高及纯度高等特点,可用于该蛋白的规模化生产。 展开更多

关键词 白喉毒素突变体 蛋白纯化 结合疫苗 鉴定

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2011—2020年中国狂犬病暴露人群流行病学与临床防治特征的系统评价 被引量：13

4

作者 甘晓虹 李明 +6 位作者 刘晖 赵连泽 刘佳阳 郭维 王艳华 王传林 侯文礼 《中国急救复苏与灾害医学杂志》 2022年第10期1261-1267,1277,共8页

目的系统评价中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征。方法计算机检索中国知网、万方、中国维普、中国生物医学文献服务系统等数据库,搜集关于中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征的横断面研究,检索时限为2011年1月—2020... 目的系统评价中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征。方法计算机检索中国知网、万方、中国维普、中国生物医学文献服务系统等数据库,搜集关于中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征的横断面研究,检索时限为2011年1月—2020年12月。由2位研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用R软件进行Meta分析。结果共纳入42个研究,包括2032341例狂犬病暴露患者。Meta分析结果:狂犬病暴露患者24 h内完成就诊和主动免疫率为87%[95%CI(83%,90%)];狂犬病暴露后规范化处置率为72%[95%CI(58%,86%)];Ⅲ级暴露患者被动免疫制剂使用率为36%[95%CI(29%,44%)];致伤动物疫苗接种率为18%[95%CI(10%,27%)]。结论中国狂犬病暴露人群呈逐年上升趋势,以接种狂犬病疫苗为主要干预方式的主动免疫发挥了重要作用,同时加强规范化处置、抗体检测和致伤动物的疫苗接种率至关重要。受纳入研究数量和质量限制,本研究结果尚需高质量的研究数据进一步佐证。 展开更多

关键词 狂犬病 暴露人群 流行病学 临床防治 横断面研究 系统评价

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人诺如病毒感染引起的急性胃肠炎流行特征及其影响因素的研究进展 被引量：2

5

作者 谢迪 何莲花 +1 位作者 刘晖 李金松 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期140-150,共11页

人诺如病毒(Human norovirus, HuNoV)属于杯状病毒科诺如病毒属,为无包膜单股正链RNA病毒,易发生重组,变异快,传染性强,致病剂量低;人群普遍易感,是全球急性胃肠炎(Acute gastroenteritis, AGE)的主要病因之一。HuNoV感染后,≤5岁儿童和... 人诺如病毒(Human norovirus, HuNoV)属于杯状病毒科诺如病毒属,为无包膜单股正链RNA病毒,易发生重组,变异快,传染性强,致病剂量低;人群普遍易感,是全球急性胃肠炎(Acute gastroenteritis, AGE)的主要病因之一。HuNoV感染后,≤5岁儿童和>65岁老年人群中少数人会因大量失水导致电解质紊乱等重症,甚至死亡。HuNoV还易在封闭和/或半封闭人群拥挤的场所引起AGE暴发;新的变异株或/和型别出现,会导致暴发事件大幅升高,甚至出现大流行。因此,HuNoV导致了沉重的疾病负担,是全球性的公共卫生问题。本文综述了全球HuNoV AGE的流行病学研究进展,还从宿主、病毒和环境等多个方面综述了当前影响HuNoV AGE流行特征的主要影响因素,为HuNoV AGE的防控提供支撑。 展开更多

关键词 人诺如病毒 急性胃肠炎 流行特征 影响因素

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HPLC法测定药用胶塞中常用抗氧剂及可提取硫向丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中的迁移 被引量：2

6

作者 成婕 江燕 +4 位作者 邱怡婷 任锟 赵津池 田甜 张罗红 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期307-315,共9页

目的:建立一种高效液相色谱方法(HPLC),用于考察药用胶塞中常用抗氧剂及可提取硫的提取情况,以及药用胶塞中抗氧剂及可提取硫向丙泊酚中/长链脂肪乳注射液的迁移情况。方法:采用Waters Symmetry RP18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,... 目的:建立一种高效液相色谱方法(HPLC),用于考察药用胶塞中常用抗氧剂及可提取硫的提取情况,以及药用胶塞中抗氧剂及可提取硫向丙泊酚中/长链脂肪乳注射液的迁移情况。方法:采用Waters Symmetry RP18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈^(-1)%醋酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为277 nm,流速为1 mL·min^(-1),柱温为35℃。结果:各组分分离度良好;在0.1~20μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r≥0.999 6;该方法的精密度、稳定性、重复性均良好,RSD均<5.0%;回收率为93.3%~108.7%,RSD为1.8%~12.5%。检出3批药液中均有抗氧剂BHT的迁移,且含量高于其相应人每日允许最大暴露量(PDE)值,有较大安全性风险。结论:该方法具有较高的灵敏度,操作简便,能够用于检测丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中抗氧剂的迁移。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 丙泊酚中/长链脂肪乳注射液 抗氧剂 可提取硫

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两种ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合疫苗的制备及质量与免疫原性分析 被引量：1

7

作者 姚永鹏 张子昌 +7 位作者 李松 孙俊 范志源 许可 朱慧 王基宏 魏鑫 黄杰 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第2期35-42,共8页

目的 对比2种结合方式的以白喉毒素无毒突变体197(cross-reacting material 197,CRM197)蛋白为载体制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的质量与免疫原性。方法 方法一以CRM197蛋白羧基为结合位点,用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1... 目的 对比2种结合方式的以白喉毒素无毒突变体197(cross-reacting material 197,CRM197)蛋白为载体制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的质量与免疫原性。方法 方法一以CRM197蛋白羧基为结合位点,用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate, CDAP)分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基,以己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide, ADH)作为连接剂,最后通过4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐[4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl morpholinium chloride, DMTMM]与CRM197反应得到单价结合物;方法二用CRM197蛋白氨基为结合位点,用高碘酸钠分别氧化A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基为醛基,加入CRM197蛋白生成席夫碱,最后通过氰基硼氢化纳还原,得到单价结合物。对2种结合方式制备的结合物原液进行理化检测,合格后再分别将2种路线的单价结合物按比例与冻干辅料混合后经冻干制成2种ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗(ACYW135-CRM197),分别免疫NIH小鼠后,用ELISA检测小鼠血清中抗体并进行统计学分析。结果 2种结合方式制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗,游离多糖含量均<20.00%,K_D值在0.2以前的洗脱液多糖回收率均>80.00%,但以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌单价结合物原液中游离多糖含量(3.20%~11.50%)均低于以氨基为结合位点的相应结合物原液中的游离多糖(8.35%~17.42%);疫苗成品的平均相对分子质量,以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗更大。2种结合疫苗免疫小鼠后其体内产生的抗体经检定后统计分析,A群、C群多糖免疫原性差异均无统计学意义(P=0.080,P=0.176),W群、Y群多糖免疫原性差异均有统计学意义(P=0.015,P=0.027)。结论 以CRM197蛋白载体羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗在质量和免疫原性方面均不差于传统的以CRM197蛋白载体氨基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗。 展开更多

关键词 脑膜炎奈瑟菌 结合疫苗 白喉毒素无毒突变体197 免疫原性 质量研究

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新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体结合疫苗的制备及其免疫原性评价

8

作者 姚永鹏 张子昌 +5 位作者 许可 朱慧 李松 王基宏 魏鑫 黄杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期795-800,共6页

目的 制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法 用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino p... 目的 制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法 用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基,并以己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)作为连接剂与活化多糖通过氰酸酯连接,生成裸露酰肼基的多糖-ADH衍生物,再通过4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐[4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl morpholinium chloride,DMTMM]与CRM197生成酰胺键偶联,得到各单价结合物原液,并进行相关检测。将单价结合物原液按一定比例混合后,分别加入3种冻干保护剂(蔗糖溶液、乳糖溶液及蔗糖+甘露醇溶液),经冻干,制备3种ACYW135-CRM197结合疫苗。将制备的疫苗于0、14 d经雄性NIH小鼠背部皮下注射,0.2 mL/只,每组10只,并于初次免疫后21 d,经小鼠颌下静脉采血,分离血清,ELISA法检测特异性抗体水平。结果 A、C、Y、W135-CRM197单价结合物原液的检测结果均符合质量标准。ACYW135-CRM197疫苗成品可与各群多糖抗血清形成明显沉淀线;平均分子量均在1 680 000~5 230 000范围内。3种ACYW135-CRM197结合疫苗的抗A、C、Y、W135群多糖IgG抗体阳转率均为100%;ACYW135-CRM197(蔗糖)、ACYW135-CRM197(乳糖)和ACYW135-CRM197(蔗糖+甘露醇)组比较,差异均无统计学意义(t=0.249~1.157,P均> 0.05)。结论 本研究制备了新型ACYW135-CRM197结合疫苗,且该疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 脑膜炎球菌 白喉毒素无毒变异体 结合疫苗 免疫原性

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传染病mRNA疫苗的研究进展及应用 被引量：2

9

作者 秦凤铭 任宁 +1 位作者 成温玉 魏恒 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3966-3984,共19页

mRNA疫苗有望成为预防传染病的新型疫苗。与传统疫苗相比,mRNA疫苗具有高效、安全、生产周期短和成本低等诸多优势。2020年,BNT162b2和mRNA-1273这两款mRNA疫苗的获批使用,有效降低了人类感染COVID-19的感染风险,表明mRNA技术在针对暴... mRNA疫苗有望成为预防传染病的新型疫苗。与传统疫苗相比,mRNA疫苗具有高效、安全、生产周期短和成本低等诸多优势。2020年,BNT162b2和mRNA-1273这两款mRNA疫苗的获批使用,有效降低了人类感染COVID-19的感染风险,表明mRNA技术在针对暴发性传染病疫苗研发上具有一定优势。本文综述了mRNA疫苗的分类、免疫机制、修饰方法和在传染病中的应用等,最后讨论了mRNA疫苗目前面临的挑战和未来的发展方向。 展开更多

关键词 mRNA疫苗 传染病 免疫机制 修饰方法

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反相高效液相色谱法检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度 被引量：1

10

作者 何刚 黄杰 +3 位作者 孙俊 魏鑫 冯树宏 侯文礼 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期34-40,共7页

目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相... 目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相色谱系统,以含0.1%三氟乙酸水溶液-异丙醇(98∶2)为流动相A,以含0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,体积流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为65℃,进样体积为10μL,采用面积归一法检测CRM197蛋白纯度,并对方法的适用性、专属性、重复性、中间精密度、线性、灵敏度和耐用性指标进行考察。用建立的方法检测CRM197蛋白酸处理供试品溶液、碱处理供试品溶液及3批原液的纯度。结果 建立的方法系统适用性良好;专属性验证表明空白溶液在目标峰积分范围内无干扰峰,热处理CRM197蛋白目标峰与其他杂质峰分离度>1.5;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.14%,保留时间RSD为0.81%;中间精密度分析目标峰面积RSD为1.62%,保留时间RSD为0.06%;CRM197蛋白含量在20~2 000μg/mL范围内,与峰面积存在良好的线性关系(R^(2)=0.999 8);最低检测限为10μg/mL,定量限为20μg/mL;在改变柱温色谱条件时,目标峰面积百分比与保留时间均RSD≤5.00%,耐用性研究合格。对酸处理、碱处理供试品溶液及3批原液进行纯度检测,纯度在76.5%~96.9%,结果准确。结论 建立的RP-HPLC检测CRM197蛋白纯度的方法,经验证各项指标均符合要求,可用于CRM197蛋白的纯度检测。 展开更多

关键词 白喉毒素 无毒突变体 CRM197蛋白 纯度 反相高效液相色谱法 结合疫苗

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紫外分光光度法测定白喉毒素无毒突变体CRM197的蛋白含量 被引量：2

11

作者 何刚 黄杰 +4 位作者 冯树宏 于健 孙俊 魏鑫 侯文礼 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第6期47-51,共5页

目的基于紫外分光光度法,建立一种测定白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白含量的方法。方法在天然折叠状态和非折叠状态(CRM197蛋白经盐酸胍变性)下,分别测定相同含量的CRM197蛋白A_(280 nm)值,再根据朗伯-比尔定律c=A/εL计算其折叠状态消... 目的基于紫外分光光度法,建立一种测定白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白含量的方法。方法在天然折叠状态和非折叠状态(CRM197蛋白经盐酸胍变性)下,分别测定相同含量的CRM197蛋白A_(280 nm)值,再根据朗伯-比尔定律c=A/εL计算其折叠状态消光系数。同时,使用当前建立的方法与BCA法分别测定CRM197蛋白的含量,并对2种方法的差异和检测特点进行比较分析。结果根据CRM197蛋白的氨基酸一级序列与相对分子质量计算出其理论消光系数为0.934 mL/(mg·cm),在280 nm处的实验消光系数为(0.959±0.006)mL/(mg·cm)。2种方法测定同一蛋白样本的结果一致,分别为(2.17±0.02)mg/mL和(2.14±0.09)mg/mL;本方法检测值的CV为0.70%,BCA法检测值的CV为4.15%。结论本研究建立的CRM197蛋白含量测定方法准确性高、线性范围宽、获取数据快,可用于CRM197蛋白含量的测定,同时为其他载体蛋白的含量测定提供了参考。 展开更多

关键词 白喉毒素 无毒突变体 CRM197蛋白 消光系数 紫外分光光度法 BCA法 蛋白含量

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