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江苏省某鸡场CAstV、CIAV和REV感染情况的调查及分析 被引量：5
1
作者 姜泊宇 褚珊珊 +3 位作者 武宗仪 程晓薇 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2017年第20期78-80,共3页
为研究鸡星状病毒(Chicken-origin astrovirus,CAst V)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV)和禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)在江苏某鸡场的流行和混合感染情况,采集该鸡场1日龄雏鸡... 为研究鸡星状病毒(Chicken-origin astrovirus,CAst V)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV)和禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)在江苏某鸡场的流行和混合感染情况,采集该鸡场1日龄雏鸡的脏器,应用PCR和RT-PCR检测CAst V、CIAV和REV的单独感染以及混合感染情况。结果显示:1日龄雏鸡CAst V、CIAV、REV单独检出率分别为45%、37.5%和0%,其中CAst V和CIAV双重感染率为25%。表明该鸡场CAst V阳性率较高,提示养禽企业需增强对该病毒的关注。 展开更多
关键词 CAstV CIAV REV 混合感染 鸡 江苏
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I群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定 被引量：31
2
作者 何秀苗 张科 +3 位作者 秦爱建 金文杰 刘岳龙 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期42-45,共4页
通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为I群禽腺病毒江苏分离株FAVI_JS进行了鉴定 ,试验结果表明 :该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称 ,直径为 70nm～ 80nm ;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞。在鸡胚肾... 通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为I群禽腺病毒江苏分离株FAVI_JS进行了鉴定 ,试验结果表明 :该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称 ,直径为 70nm～ 80nm ;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞。在鸡胚肾细胞 (CEK)上可致细胞变圆 ,折光性增强等病变 ;通过PCR方法扩增出的FAVI_JSL、R、ITR三个片段 ,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清I型的CELO病毒、FAV_1、FAV_A和血清 8型的禽腺病毒 (FAV_8)全基因组的相应序列比较 ,FAVI_JS与I群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高 ,其中与血清I型的同源性高达 96 %以上 ,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析 ,FAVI_JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支 ,而与群禽腺病毒 ,特别是与血清I型的禽腺病毒更接近 ,这些结果证明 。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 江苏分离株 FAVI-JS 分离 鉴定 形态学 序列分析
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动物腺病毒载体的研究进展 被引量：7
3
作者 何秀苗 秦爱建 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期22-24,共3页
腺病毒载体已成为近年来在基因治疗和重组疫苗研究方面的热点 ,文章较详细地叙述了腺病毒载体的构建基础、腺病毒载体的构建方法和各类动物腺病毒载体的研究现状以及腺病毒载体在应用时遇到的免疫学问题。并依据现有的腺病毒活载体的研... 腺病毒载体已成为近年来在基因治疗和重组疫苗研究方面的热点 ,文章较详细地叙述了腺病毒载体的构建基础、腺病毒载体的构建方法和各类动物腺病毒载体的研究现状以及腺病毒载体在应用时遇到的免疫学问题。并依据现有的腺病毒活载体的研究现状 ,讨论了动物腺病毒载体的发展趋势 ,提出在人类腺病毒载体应用遇到的免疫学问题上 。 展开更多
关键词 动物腺病毒载体 构建方法 发展趋势 免疫反应 基因载体 基因治疗 重组疫苗 临床应用
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禽腺病毒江苏株(JS)复制非必需片段的确定 被引量：2
4
作者 何秀苗 秦爱建 +1 位作者 刘岳龙 金文杰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期291-294,共4页
利用PCR方法从一株Ⅰ群禽腺病毒的分离物 (FAVI JS)中扩增出其基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段 ,并分别克隆进pGEM Teasy载体 ,然后将L片段、r片段和ITR片段同时克隆进pHC粘粒载体中 ,获得质粒pHC FAVI r ITR L ,再在该克隆片段... 利用PCR方法从一株Ⅰ群禽腺病毒的分离物 (FAVI JS)中扩增出其基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段 ,并分别克隆进pGEM Teasy载体 ,然后将L片段、r片段和ITR片段同时克隆进pHC粘粒载体中 ,获得质粒pHC FAVI r ITR L ,再在该克隆片段中插入增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)基因 ,获得转移质粒载体pFAVI eGFP。将pFAVI eGFP转染已被该野生型Ⅰ群禽腺病毒分离物感染了的鸡胚肾细胞进行同源重组 ,通过无限稀释法筛选重组病毒 ,结果获得了表达增强型绿色荧光蛋白的重组Ⅰ群禽腺病毒rFAVI eGFP ,证明位于基因组右末端r片段和ITR片段之间的位点为病毒复制非必需区 。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 复制非必需片段 确定
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产蛋鸡群细菌性感染的病原分离与鉴定
5
作者 王建 茹筱娴 +4 位作者 刘书颜 袁璟 闫彩虹 羊扬 金文杰 《中国禽业导刊》 2025年第3期62-65,共4页
鸭源鸡杆菌作为革兰氏阴性菌,隶属于巴氏杆菌科鸡杆菌属,其宿主多样,常作为条件性致病菌,主要引发输卵管炎、卵巢炎等;奇异变形杆菌亦属革兰氏阴性菌,归类于肠杆菌科变形杆菌属,可以在各种各样的环境中生长,是人和动物胃肠道的共生菌,... 鸭源鸡杆菌作为革兰氏阴性菌,隶属于巴氏杆菌科鸡杆菌属,其宿主多样,常作为条件性致病菌,主要引发输卵管炎、卵巢炎等;奇异变形杆菌亦属革兰氏阴性菌,归类于肠杆菌科变形杆菌属,可以在各种各样的环境中生长,是人和动物胃肠道的共生菌,主要引起泌尿系统的感染。本实验以3只出现典型病变特征的病死蛋鸡为研究对象,观察其病理变化,并且通过细菌分离培养、生化试验、质谱仪检测及16S rDNA基因序列分析等方法,以鉴定其细菌性感染病原为鸭源鸡杆菌和奇异变形杆菌,同时进行药敏试验,为疾病防治提供理论依据。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 细菌性感染 条件性致病菌 细菌分离培养 鸭源鸡杆菌 动物胃肠道 典型病变 输卵管炎
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变异型高致病性鹅源禽呼肠孤病毒的分离和鉴定 被引量：3
6
作者 钱金涵 朱亭帆 +3 位作者 王强 马陈淑 秦爱建 金文杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期1-8,共8页
为了探究2020年江苏省扬州市江都区某鹅场发生的1起以肝脏和脾脏出血为典型病变特征的急性传染病病因,本试验采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病死鹅肝脏和脾脏研磨液中禽呼肠孤病毒(ARV)的感染情况,将聚合酶链反应(PCR)阳性病... 为了探究2020年江苏省扬州市江都区某鹅场发生的1起以肝脏和脾脏出血为典型病变特征的急性传染病病因,本试验采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病死鹅肝脏和脾脏研磨液中禽呼肠孤病毒(ARV)的感染情况,将聚合酶链反应(PCR)阳性病料进一步进行病毒的分离、鉴定、血凝性和致病性测定及遗传进化分析。结果显示,鸡胚中分离的病毒为ARV,将其命名为ARV-JSJD-2020;该病毒分离株接种鸡胚24 h后即可致其死亡;能感染Vero细胞产生细胞病变;没有血凝活性;鸡胚半数致死量(ELD50)为10^(-4.166)/0.2 mL;动物回归试验中雏鹅24 h即出现死亡现象,肝脏主要病变为局灶性坏死;σC基因序列分析显示,该分离株分类上属于水禽源呼肠孤病毒分支,但与目前疫苗株的亲缘关系较远。结果表明,本试验分离得到的ARV-JSJD-2020可以为后续鹅源ARV的防控和疫苗的研发提供参考依据。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒(ARV) 分离 鉴定 σC基因
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禽源糖原合成激酶蛋白单克隆抗体的制备及应用
7
作者 翁贝 崔洲昊 +2 位作者 邵红霞 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期81-88,共8页
为制备针对家禽糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的单克隆抗体以及了解不同细胞中GSK-3β蛋白的基础表达量,试验利用原核表达纯化的GSK-3β蛋白免疫BALB/c小鼠,真核表达GSK-3β蛋白间接免疫荧光筛选杂交瘤阳性细胞,并利用单克隆抗体检测不同... 为制备针对家禽糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的单克隆抗体以及了解不同细胞中GSK-3β蛋白的基础表达量,试验利用原核表达纯化的GSK-3β蛋白免疫BALB/c小鼠,真核表达GSK-3β蛋白间接免疫荧光筛选杂交瘤阳性细胞,并利用单克隆抗体检测不同禽源细胞(LMH细胞、DF-1细胞、CEF细胞)中GSK-3β蛋白表达情况。结果显示:共获得3株单克隆抗体细胞株,分别命名为4C1、5B11和8G9,其中4C1和5B11仅能结合禽源细胞中的GSK-3β,而8G9和禽源以及人源的GSK-3β都能反应;单克隆抗体4C1介导的Western bolt显示在LMH细胞中GSK-3β蛋白丰度相对最高,而RT-qPCR显示其中LMH细胞中GSK-3β基因转录水平较低。研究成功制备了禽源GSK-3β的单克隆抗体,为深入研究家禽GSK-3β的生物学功能提供良好的生物材料。 展开更多
关键词 禽 GSK-3Β 原核表达 单克隆抗体 应用
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J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立 被引量：30
8
作者 叶建强 秦爱建 +2 位作者 邵红霞 金文杰 刘岳龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期235-237,共3页
利用抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9,建立了检测ALV-Jenv抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清,结... 利用抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9,建立了检测ALV-Jenv抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应;抗ALV-J阳性血清与ALV-J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断;ALV-J阳性血清经酸处理后,ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV-J阳性血清样本进行电镜观察,可见ALV-J样病毒粒子及ALV-J样免疫复合物。经与间接免疫荧光(IFA)检测ALV-Jenv抗体结果比较表明,建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率,群体符合率为8/9。这些结果表明,本研究建立的ELISA方法在ALV-J的诊断中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 亚群 抗原/抗体免疫复合物 ELISA
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禽源性大肠杆菌HPI irp2基因序列的扩增及比较 被引量：18
9
作者 金文杰 郑志明 +3 位作者 王倩倩 秦爱建 刘岳龙 邵红霞 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期5-7,共3页
从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌(E scherich ia coli),用其中Y ZG 040515、NTLFC 040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛(HP I)irp 2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PC... 从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌(E scherich ia coli),用其中Y ZG 040515、NTLFC 040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛(HP I)irp 2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PCR产物克隆到pGEM-T-easy中,经E coRⅠ酶切鉴定为阳性者进行序列测定。结果表明:该基因片段与G eneB ank中发布的耶尔森菌HP I irp 2基因的同源性高达98%以上,证明禽源性大肠杆菌中具有耶尔森菌毒力岛HP I基因序列,结合临床发病情况和流行病学,提示该毒力岛与日趋严重的家禽大肠杆菌病可能有一定的相关性。 展开更多
关键词 禽源性大肠杆菌 耶尔森菌 高致病性毒力岛 克隆比较
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禽致病性大肠杆菌中四种抗氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学调查 被引量：25
10
作者 金文杰 秦爱建 +4 位作者 郑志明 黄训良 邵红霞 刘岳龙 张永志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期401-404,共4页
氨基糖苷类药物曾经是临床最为常用而有效的抗生素,长期应用与不合理使用使得该药物效果不尽理想。本研究参照GenBank中耐药基因相关序列,设计引物,结果从禽源大肠杆菌基因组中扩增出4种抗氨基糖苷类药物基因aadA1、strA、strB、aph(3... 氨基糖苷类药物曾经是临床最为常用而有效的抗生素,长期应用与不合理使用使得该药物效果不尽理想。本研究参照GenBank中耐药基因相关序列,设计引物,结果从禽源大肠杆菌基因组中扩增出4种抗氨基糖苷类药物基因aadA1、strA、strB、aph(3′),经pGEX-T-easy和pET32a载体克隆和序列分析,证明扩增获得的基因序列与GenBank中参考序列同源性达到97%以上。对分离保存的216株禽致病性大肠杆菌进行氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学检测,结果表明:aadA1阳性率高达49.1%,strA和strB的阳性率分别为56%和65.7%,aph(3′)的阳性率为16.2%;近三分之二的被检菌株携带有2种以上氨基糖苷类药物耐药基因。药敏试验结果显示所有被检菌株对链霉素耐药率为68.9%,而对阿米卡星的耐药率为38.9%。本研究结果说明禽类细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有着很大的关系,提示控制禽源耐药细菌对人类健康与卫生安全有重要意义。 展开更多
关键词 氨基糖苷类药物耐药基因 禽致病性大肠杆菌 流行病学
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禽致病性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分子流行病学调查 被引量：18
11
作者 金文杰 郑志明 +4 位作者 秦爱建 刘岳龙 邵红霞 张永志 黄训良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期787-790,共4页
为了解耶尔森菌强毒力岛(HPI)在禽致病性大肠杆菌(APEC)中的流行情况,根据HPI结构基因irp2和fyuA参考序列设计了引物,用PCR方法和斑点杂交法对从江苏等地分离的APEC基因组进行了扩增和检测,并对E.coliNTJC040406菌株相关基因进行了克隆... 为了解耶尔森菌强毒力岛(HPI)在禽致病性大肠杆菌(APEC)中的流行情况,根据HPI结构基因irp2和fyuA参考序列设计了引物,用PCR方法和斑点杂交法对从江苏等地分离的APEC基因组进行了扩增和检测,并对E.coliNTJC040406菌株相关基因进行了克隆和序列分析。结果表明,216株APEC中有44.9%的菌株携带有HPI,序列分析表明相关基因与GenBank中参考序列的同源性高达98%以上。提示HPI在APEC中广泛存在,经进一步分析,发现分离菌株是否携带HPI与O78等特定血清型有一定的相关性。 展开更多
关键词 致病性大肠杆菌 耶尔森菌强毒力岛 流行病学
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重组鸡γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达 被引量：10
12
作者 孔桂美 许金俊 +2 位作者 秦爱建 金文杰 刘岳龙 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期697-701,共5页
将鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因克隆到载体pFASTBAC1中,构建转移载体pFASTBAC1-ChIFN-γ,然后转化DH10Bac感受态大肠杆菌,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-ChIFN-γ;通过脂质体将表达质粒转... 将鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)基因克隆到载体pFASTBAC1中,构建转移载体pFASTBAC1-ChIFN-γ,然后转化DH10Bac感受态大肠杆菌,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-ChIFN-γ;通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞,用间接免疫荧光试验鉴定重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)的表达;通过水泡性口炎病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的细胞病变抑制试验,检测rChIFN-γ的活性.研究结果表明,感染重组杆状病毒的Sf9细胞能高效表达rChIFN-γ,且当每个细胞的感染量为1个病毒时,细胞在感染96h后,rChIFN-γ基因表达产物的活性最高,达到106～107.2U/mL.以rChIFN-γ进行对新城疫病毒(NDV)F48E8株、禽流感H5N1病毒(AIV-H5)和马立克氏病病毒(MDV)GA株的抗病毒活性试验,发现rChIFN-γ对AIV-H5和MDV GA株病毒有明显的抑制其致细胞病变作用,但对NDV F48E8株病毒在体外不能抑制其致细胞病变作用,仅能在病毒滴度上表现抑制效果. 展开更多
关键词 重组鸡γ-干扰素 杆状病毒 表达 抗病毒作用
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转化型人参皂苷对单克隆抗体生成的影响 被引量：10
13
作者 许小琴 金文杰 +2 位作者 李金贵 秦爱建 钱琨 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期16-18,共3页
以转化型人参皂苷的8个组分,按12.50和6.25μg·mL-1的剂量,以培养抗禽流感(AIV)H9亚型血凝素特异性单克隆抗体6E6株杂交瘤细胞和抗新城疫病毒(NDV)血凝素与神经氨酸酶单克隆抗体10B11株杂交瘤细胞,收集细胞培养上清,用血凝抑制试验... 以转化型人参皂苷的8个组分,按12.50和6.25μg·mL-1的剂量,以培养抗禽流感(AIV)H9亚型血凝素特异性单克隆抗体6E6株杂交瘤细胞和抗新城疫病毒(NDV)血凝素与神经氨酸酶单克隆抗体10B11株杂交瘤细胞,收集细胞培养上清,用血凝抑制试验(HI)和间接免疫荧光试验(IFA)检测单抗水平,探讨转化型人参皂苷对单克隆抗体生成的影响。结果表明;转化型人参皂苷3、4、7号组具有促进6E6单抗和10B11单抗生成的作用,其HI效价为26-27,与对照组(25)相比差异显著;IFA效价为104-105,与对照组(102)相比差异极显著。 展开更多
关键词 转化型人参皂苷 单克隆抗体 禽流感病毒 新城疫病毒
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抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制 被引量：10
14
作者 钱琨 秦爱建 +2 位作者 邵红霞 刘岳龙 金文杰 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2003年第3期5-7,11,共4页
以H9亚型禽流感病毒免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清,结果获得3株阳性细胞株,分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后,所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明,3株单克隆抗... 以H9亚型禽流感病毒免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清,结果获得3株阳性细胞株,分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后,所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明,3株单克隆抗体仅与试验的H9病毒株反应,与H5亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鹅源腺病毒等不反应。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,3株单克隆细胞的上清均能与感染H9亚型病毒的鸡成纤维细胞呈持异性绿色荧光反应。实验性病毒检测结果表明,IFA方法检测H9禽流感比鸡胚接种分离病毒的效果好、灵敏度高,是一种经济实用的方法。获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测及预警预报中发挥重要作用。 展开更多
关键词 禽流感 单克隆抗体 血凝抑制试验 间接免疫荧光试验
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传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用 被引量：9
15
作者 刘红梅 秦爱建 +6 位作者 许小琴 李迎晓 陈鸿军 叶建强 金文杰 刘岳龙 邵红霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期461-465,共5页
应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体... 应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo(+),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2 表达
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鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞分离纯化方法的建立 被引量：6
16
作者 高巍 秦爱建 +1 位作者 金文杰 邵红霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期807-810,共4页
将鸡胸腺和腔上囊淋巴组织剪碎后与PBS磷酸盐缓冲液混合,通过密度梯度离心和尼龙棉柱过滤对T、B淋巴细胞进行了分离纯化。纯化的T、B淋巴细胞以FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗,RPE标记的鼠抗鸡CD8单抗,FITC标记的鼠抗鸡Bu-1单抗染色,用流式细... 将鸡胸腺和腔上囊淋巴组织剪碎后与PBS磷酸盐缓冲液混合,通过密度梯度离心和尼龙棉柱过滤对T、B淋巴细胞进行了分离纯化。纯化的T、B淋巴细胞以FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗,RPE标记的鼠抗鸡CD8单抗,FITC标记的鼠抗鸡Bu-1单抗染色,用流式细胞仪分类检测其纯度,用台盼蓝排斥试验检测T、B淋巴细胞的活力。结果表明,以本研究建立的方法分离到的T、B淋巴细胞纯度较高(均达90%以上),细胞活力强,与流式细胞仪分选的效果相当,且经济简便。 展开更多
关键词 尼龙棉柱 鸡 T淋巴细胞 B淋巴细胞 纯化分离
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转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探 被引量：8
17
作者 许小琴 金文杰 +2 位作者 李金贵 秦爱建 陈鸿军 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2004年第3期16-18,24,共4页
以转化型人参皂苷的8个组,按12.5μg·mL-1的剂量,在体外鸡胚成纤维细胞上进行抗MDV-RB1B强毒株空斑减数试验和诱导肝癌7402细胞株、大鼠脑胶质瘤细胞C6株细胞凋亡试验,用光学显微镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA损伤。结果表明... 以转化型人参皂苷的8个组,按12.5μg·mL-1的剂量,在体外鸡胚成纤维细胞上进行抗MDV-RB1B强毒株空斑减数试验和诱导肝癌7402细胞株、大鼠脑胶质瘤细胞C6株细胞凋亡试验,用光学显微镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA损伤。结果表明:转化型人参皂苷6、7号组,在感染阻断、增殖抑制、直接杀灭3种方式的抗MDV空斑减数率都达到阿昔洛韦(ACV)抗MDV空斑减数率的80%,转化型人参皂苷4、6号组对MDV-RB1B株的直接杀灭作用与ACV的杀灭作用相同;转化型人参皂苷8号组诱导肝癌7402株细胞48h后,有60%的瘤细胞凋亡,对大鼠脑胶质瘤C6株细胞也有诱导凋亡的作用。 展开更多
关键词 转化型人参皂苷 马立克氏病病毒 瘤细胞凋亡
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雏鸡法氏囊蛋白质组学双向电泳技术的建立及其初步分析 被引量：5
18
作者 卢占军 秦爱建 +6 位作者 陈欣虹 苏钰文 邵红霞 金文杰 钱锟 王友 朱玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期944-951,共8页
为了建立并优化鸡法氏囊蛋白质组学的双向电泳技术体系,以不同日龄雏鸡的法氏囊组织为研究对象,用固相pH梯度胶条进行等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳,采用不同的样品制备方法,对上样量、水化、等电聚焦、胶条平衡和凝胶染色方法等进行一系... 为了建立并优化鸡法氏囊蛋白质组学的双向电泳技术体系,以不同日龄雏鸡的法氏囊组织为研究对象,用固相pH梯度胶条进行等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳,采用不同的样品制备方法,对上样量、水化、等电聚焦、胶条平衡和凝胶染色方法等进行一系列优化,并应用PDQuest8.0.1软件对图谱进行初步分析。结果显示法氏囊组织在pH 5~8范围1、7 cm的2-DE胶上可以得到很好的分离,胶体考染后经PDQuest软件分析,在正常法氏囊组织可检测到800个以上蛋白点,不同2-DE图谱间蛋白点平均匹配率为83.5%,不同日龄雏鸡法氏囊存在有明显表达差异的蛋白质点37个,其中表达上调蛋白点17个,表达下调蛋白点11个,新增蛋白点5个,消失蛋白点4个。试验建立的鸡法氏囊组织蛋白质组双向电泳技术为法氏囊发育进化及其免疫功能的研究提供了新技术和方法。 展开更多
关键词 鸡 法氏囊 蛋白质组 双向电泳
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MDV VP22的N1-18是发挥蛋白转导功能必需的序列 被引量：6
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作者 陈鸿军 秦爱建 +2 位作者 宋翠萍 张晨飞 邓绪芳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-97,共7页
血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)CVI988/Rispens弱毒株的VP22蛋白缺失201TKSERT206。为了进一步证实该缺失对MDV-1VP22蛋白转导功能和效率的影响,本研究通过将不同缺失型的VP22与EGFP相融合,转染COS-1细胞,通过间接免疫荧光方法,检测VP2... 血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)CVI988/Rispens弱毒株的VP22蛋白缺失201TKSERT206。为了进一步证实该缺失对MDV-1VP22蛋白转导功能和效率的影响,本研究通过将不同缺失型的VP22与EGFP相融合,转染COS-1细胞,通过间接免疫荧光方法,检测VP22的蛋白转导现象。结果发现,EGFP-VP22具有微管结合、核膜结合、核酸结合、蛋白转导等特性;CVI988VP22与GA株VP22的转导效率相当,且只有完整长度的VP22具有明显的转导功能,其中,N端1～18aa对VP22的核定位及其蛋白转导功能的发挥意义很大。这一发现为利用MDV-1VP22携带其他目的蛋白转导,增强目的蛋白免疫原性及其治疗性功能具有重要的指导价值。 展开更多
关键词 MDV-1 衣被蛋白 VP22 蛋白转导功能
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两株马立克病病毒的分离及相关致病基因序列的比较 被引量：5
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作者 陈欣虹 秦爱建 +5 位作者 钱锟 卢占军 张晨飞 苏钰文 邵红霞 金文杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期570-574,共5页
为了解国内鸡群马立克病（MD）流行毒株的遗传特征,采用细胞培养、间接免疫荧光等方法从江苏省2个鸡场送检病鸡中分离鉴定出2株马立克病病毒（MDV）Ⅰ型毒株,采用PCR方法扩增两分离毒株的vIL-8、pp38、meq等病毒致病相关基因,所得序列用... 为了解国内鸡群马立克病（MD）流行毒株的遗传特征,采用细胞培养、间接免疫荧光等方法从江苏省2个鸡场送检病鸡中分离鉴定出2株马立克病病毒（MDV）Ⅰ型毒株,采用PCR方法扩增两分离毒株的vIL-8、pp38、meq等病毒致病相关基因,所得序列用DNAStar软件与GenBank上登录的参考毒株进行比较分析。结果显示,两分离毒株的序列同源性为99.7%-100%,与MDVⅠ型强毒及超强毒株的同源性为99.3%-99.8%,具有强毒特征;两分离毒株的meq基因与其他4个国内分离强毒株的序列完全一致,在pp38基因编码的氨基酸序列中第109位均为甘氨酸而不是国外GA等毒株的谷氨酸,这与以前报道的另外3个中国野毒株一致。提示,这些变异可能是国内MDV流行强毒的遗传性特征。 展开更多
关键词 马立克病病毒 病毒分离 聚合酶链式反应 序列比较
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