为建立一种评估重亚硫酸盐处理DNA样本后胞嘧啶转化效率的有效方法,以两组不同的Taq Man q PCR检测梯度稀释的重亚硫酸盐处理和未处理的DNA标准品,建立转化与未转化的DNA Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。使用相同的探针定量检测重...为建立一种评估重亚硫酸盐处理DNA样本后胞嘧啶转化效率的有效方法,以两组不同的Taq Man q PCR检测梯度稀释的重亚硫酸盐处理和未处理的DNA标准品,建立转化与未转化的DNA Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。使用相同的探针定量检测重亚硫酸盐处理后的DNA样本评估转化效率。结果显示该方法应用两组探针,根据相应的标准曲线,精确评估样本经重亚硫酸盐处理的转化效率。使用已知转化和未转化拷贝数的混合DNA作为模板,证实了该方法的可靠性。同时也对不同重亚硫酸盐试剂盒处理DNA的转化效率进行了评估,结果显示,该方法能够有效地评估DNA样品重亚硫酸盐的转化效率,为DNA甲基化准确分析提供了可靠快捷的方法。展开更多
目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,AZA)抗癌作用的新机制,即AZA是否通过激活反义RNA来抑制癌相关基因的表达。方法:从已建双链RNA文库中挑选出6个基因,即第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatas...目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,AZA)抗癌作用的新机制,即AZA是否通过激活反义RNA来抑制癌相关基因的表达。方法:从已建双链RNA文库中挑选出6个基因,即第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、信号转导及转录激活因子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)基因、Ras样原癌基因B(Ras-like proto-oncogene B,RALB)、MET、CD44和热休克蛋白A4(heat-shock protein A4,HSPA4)基因。用DMSO(作为对照组)或溶于DMSO的AZA分别处理人肝癌细胞Hep G2,采用链特异性RT-PCR及实时荧光定量PCR法检测上述6个基因的正反义RNA的表达。AZA促进抑癌基因PTEN和先天免疫相关基因STAT 1的正义RNA表达(P<0.01,P<0.001),而癌相关基因CD 44和HSPA 4的正义RNA表达均受到明显抑制(P值均<0.01)。结论:AZA通过激活反义RNA的表达,诱导抑癌基因和先天免疫基因的表达,并抑制癌相关基因的表达,从而发挥其抗癌作用。展开更多
文摘为建立一种评估重亚硫酸盐处理DNA样本后胞嘧啶转化效率的有效方法,以两组不同的Taq Man q PCR检测梯度稀释的重亚硫酸盐处理和未处理的DNA标准品,建立转化与未转化的DNA Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。使用相同的探针定量检测重亚硫酸盐处理后的DNA样本评估转化效率。结果显示该方法应用两组探针,根据相应的标准曲线,精确评估样本经重亚硫酸盐处理的转化效率。使用已知转化和未转化拷贝数的混合DNA作为模板,证实了该方法的可靠性。同时也对不同重亚硫酸盐试剂盒处理DNA的转化效率进行了评估,结果显示,该方法能够有效地评估DNA样品重亚硫酸盐的转化效率,为DNA甲基化准确分析提供了可靠快捷的方法。
文摘目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,AZA)抗癌作用的新机制,即AZA是否通过激活反义RNA来抑制癌相关基因的表达。方法:从已建双链RNA文库中挑选出6个基因,即第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、信号转导及转录激活因子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)基因、Ras样原癌基因B(Ras-like proto-oncogene B,RALB)、MET、CD44和热休克蛋白A4(heat-shock protein A4,HSPA4)基因。用DMSO(作为对照组)或溶于DMSO的AZA分别处理人肝癌细胞Hep G2,采用链特异性RT-PCR及实时荧光定量PCR法检测上述6个基因的正反义RNA的表达。AZA促进抑癌基因PTEN和先天免疫相关基因STAT 1的正义RNA表达(P<0.01,P<0.001),而癌相关基因CD 44和HSPA 4的正义RNA表达均受到明显抑制(P值均<0.01)。结论:AZA通过激活反义RNA的表达,诱导抑癌基因和先天免疫基因的表达,并抑制癌相关基因的表达,从而发挥其抗癌作用。
