目的制备1株抗黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)六邻体(hexon,hex)蛋白重组单克隆抗体(单抗)。方法表达并纯化AdC68-hex蛋白,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA及细胞免疫染色法筛选得到1...目的制备1株抗黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)六邻体(hexon,hex)蛋白重组单克隆抗体(单抗)。方法表达并纯化AdC68-hex蛋白,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA及细胞免疫染色法筛选得到1株分泌抗AdC68-hex蛋白单抗的杂交瘤细胞。抽提杂交瘤细胞RNA进行测序,获得单抗重链与轻链可变区序列,分别与小鼠重链与轻链恒定区序列拼接得到小鼠全长IgG1κ抗体重链与轻链,并构建至真核细胞高效表达质粒。将重链与轻链质粒共同转染至哺乳动物细胞表达并纯化得到抗AdC68-hex重组单抗。将抗体用于滴定AdC68、重组AdC68及AdC68重组疫苗,并开展方法学验证。结果表达制备的AdC68-hex蛋白能有效诱导小鼠的病毒产生抗AdC68-hex抗体。抗AdC68-hex重组单抗用于重组AdC68滴定具备良好的专属性、耐用性,在4.56~9.57 lg感染单位/ml范围内具备良好的线性、准确度和精密度。结论制备的重组抗AdC68-hex单抗适用于AdC68及AdC68重组疫苗载体相关的基因治疗药物及疫苗等的检测。展开更多
自1947年在非洲乌干达寨卡森林首次发现寨卡病毒（Zika virus）以来,一直鲜有该病毒感染人的病例的报道。但自2015年以来,寨卡病毒在拉丁美洲和加勒比海地区快速传播开来,小头症和吉兰-巴雷综合征也与寨卡病毒感染直接相关,引起全球瞩...自1947年在非洲乌干达寨卡森林首次发现寨卡病毒（Zika virus）以来,一直鲜有该病毒感染人的病例的报道。但自2015年以来,寨卡病毒在拉丁美洲和加勒比海地区快速传播开来,小头症和吉兰-巴雷综合征也与寨卡病毒感染直接相关,引起全球瞩目。埃及伊蚊和白纹伊蚊是寨卡病毒主要传播媒介,它们全年活跃于世界许多地方,包括美国南部沿海大多数州及拉丁美洲和太平洋众多度假区。寨卡病毒可通过全球贸易和旅行扩展传播。世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计,未来一年仅美洲可能就有300万~400万寨卡病毒感染者。目前,尚无可预防寨卡病毒感染的疫苗,也无药物和有效治疗手段。开发安全有效的疫苗来控制寨卡病毒感染是一项紧迫的全球卫生问题。展开更多
文摘目的制备1株抗黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)六邻体(hexon,hex)蛋白重组单克隆抗体(单抗)。方法表达并纯化AdC68-hex蛋白,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA及细胞免疫染色法筛选得到1株分泌抗AdC68-hex蛋白单抗的杂交瘤细胞。抽提杂交瘤细胞RNA进行测序,获得单抗重链与轻链可变区序列,分别与小鼠重链与轻链恒定区序列拼接得到小鼠全长IgG1κ抗体重链与轻链,并构建至真核细胞高效表达质粒。将重链与轻链质粒共同转染至哺乳动物细胞表达并纯化得到抗AdC68-hex重组单抗。将抗体用于滴定AdC68、重组AdC68及AdC68重组疫苗,并开展方法学验证。结果表达制备的AdC68-hex蛋白能有效诱导小鼠的病毒产生抗AdC68-hex抗体。抗AdC68-hex重组单抗用于重组AdC68滴定具备良好的专属性、耐用性,在4.56~9.57 lg感染单位/ml范围内具备良好的线性、准确度和精密度。结论制备的重组抗AdC68-hex单抗适用于AdC68及AdC68重组疫苗载体相关的基因治疗药物及疫苗等的检测。
文摘自1947年在非洲乌干达寨卡森林首次发现寨卡病毒（Zika virus）以来,一直鲜有该病毒感染人的病例的报道。但自2015年以来,寨卡病毒在拉丁美洲和加勒比海地区快速传播开来,小头症和吉兰-巴雷综合征也与寨卡病毒感染直接相关,引起全球瞩目。埃及伊蚊和白纹伊蚊是寨卡病毒主要传播媒介,它们全年活跃于世界许多地方,包括美国南部沿海大多数州及拉丁美洲和太平洋众多度假区。寨卡病毒可通过全球贸易和旅行扩展传播。世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计,未来一年仅美洲可能就有300万~400万寨卡病毒感染者。目前,尚无可预防寨卡病毒感染的疫苗,也无药物和有效治疗手段。开发安全有效的疫苗来控制寨卡病毒感染是一项紧迫的全球卫生问题。
