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江苏省部分地区水禽肠道外致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：3
1
作者 郭长明 陈怀君 +5 位作者 袁橙 封琦 王永娟 徐海 吴双 朱善元 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期25-33,共9页
本研究旨在明确江苏地区水禽致病性大肠杆菌的血清型、进化分群、毒力基因分布和耐药情况,以期为水禽大肠杆菌病的防控提供依据。本研究从江苏省部分规模化水禽养殖场疑似大肠杆菌感染病例中,分离得到24株水禽肠道外致病性大肠杆菌,并... 本研究旨在明确江苏地区水禽致病性大肠杆菌的血清型、进化分群、毒力基因分布和耐药情况,以期为水禽大肠杆菌病的防控提供依据。本研究从江苏省部分规模化水禽养殖场疑似大肠杆菌感染病例中,分离得到24株水禽肠道外致病性大肠杆菌,并检测分离菌株的血清型、毒力基因分布、系统进化分群和耐药情况。血清型检测结果表明,O65血清型菌株共8株,占全部菌株的33.3%,O16、O68、O87、O126、O138、O164血清型菌株各1株,其他未鉴定血清型10株;毒力基因检测结果表明,fimA、ECs3737、ECs3703、tsh和irp2基因在分离菌株中的阳性率分别为83.3%、75.0%、66.7%、33.3%和4.2%,其中含有4个毒力基因组合的菌株占29.2%;系统进化分群结果表明,非致病群A占45.8%,低致病群B1占33.3%,高致病群B2和D分别占8.3%、1.3%;药敏试验结果表明,24株分离菌株均对恩诺沙星、强力霉素100%耐药,对四环素、万古霉素、红霉素的耐药率为91.7%,对阿莫西林/棒酸的敏感率为100%。本研究结果表明,江苏省水禽致病性大肠杆菌血清型较为复杂、耐药性严重。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 血清型 毒力基因 耐药性
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鹅骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定 被引量：1
2
作者 张力 许加龙 +8 位作者 黄锦钰 许子月 雷昕诺 卢会鹏 朱睿 孙伟翔 曹海月 王安平 朱善元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4186-4195,共10页
旨在建立鹅骨骼肌卫星细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的方法。本研究选取健康10周龄溆浦鹅仔鹅为试验材料,采用分散酶Dispase II和胶原酶II共同作用肌肉组织分离得到卫星细胞,利用差速贴壁法纯化卫星细胞,在体外培养过程中,含有20%FBS... 旨在建立鹅骨骼肌卫星细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的方法。本研究选取健康10周龄溆浦鹅仔鹅为试验材料,采用分散酶Dispase II和胶原酶II共同作用肌肉组织分离得到卫星细胞,利用差速贴壁法纯化卫星细胞,在体外培养过程中,含有20%FBS并添加bFGF的DMEM/F12生长完全培养基能较好维持卫星细胞的分化潜能,培养过程中涉及的培养皿需经基质胶特别包被处理;诱导分化出成熟肌管后,采用免疫荧光法和Western blotting检测肌球蛋白重链MyHC的表达,采用qRT-PCR检测Pax7、MyoD1、MyoG基因在诱导分化前(growth medium,GM)和分化后(differentiation medium,DM)的相对表达量,分化前后每组均3个重复。结果表明,新分离得到的卫星细胞体积较小,折光性强,贴壁后呈中间彭起两端针状的梭形结构,经免疫荧光鉴定呈Pax7阳性;诱导分化后可形成成熟多核肌管,免疫荧光检测成肌特异性标志MyHC呈阳性,统计分化指数高达78%(P<0.01);qRT-PCR检测标志性基因Pax7、MyoD1、MyoG呈阳性,并且分化前Pax7基因相对表达量是分化后的2.22倍(P<0.01),而分化后标志性基因MyoD1、MyoG的相对表达量分别是分化前的1.90(P<0.01)和44.22倍(P<0.01);Western blotting结果显示分化后MyHC蛋白表达水平明显升高。综上所述,本研究建立了一种基于胶原酶Ⅱ和分散酶Dispase II的混合酶分离鹅骨骼肌卫星细胞的方法,提供的培养体系能够使细胞在体外培养过程中维持巨大的分化潜能,为鹅肌肉组织生长发育分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型。 展开更多
关键词 鹅 骨骼肌卫星细胞 分离 培养 鉴定
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输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定
3
作者 吴植 张继玲 +2 位作者 吴萌 崔潇婷 王安平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2871-2877,共7页
试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽... 试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体p FB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-AIOVLYZ。将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒r Bac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒r Bac-Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为r AAAV-OVLYZ。电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示r AAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明r AAAV能介导h LYZ在输卵管细胞中的特异表达。结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达h LYZ基因的r AAAV,为h LYZ的大量制备奠定了基础。 展开更多
关键词 重组禽腺联病毒(rAAAV) 人溶菌酶(hLYZ) 杆状病毒表达系统 鉴定
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一株鸡源血清4型禽腺病毒的分离鉴定及动物回归试验
4
作者 吴植 黄佳 +5 位作者 吴双 谢军 顾陈怡 徐艳 张聪 袁慧莎 《畜牧兽医科技信息》 2023年第8期53-55,共3页
自2015年以来,心包积液-肝炎综合征在我国部分地区暴发并造成大量肉鸡死亡,给养殖户造成巨大的经济损失。本研究对广西某养殖场送检的疑似感染禽腺病毒感染的发病鸡进行了病毒分离,收集尿囊液进行PCR扩增和序列测定,并进行了动物回归试... 自2015年以来,心包积液-肝炎综合征在我国部分地区暴发并造成大量肉鸡死亡,给养殖户造成巨大的经济损失。本研究对广西某养殖场送检的疑似感染禽腺病毒感染的发病鸡进行了病毒分离,收集尿囊液进行PCR扩增和序列测定,并进行了动物回归试验。测序结果显示该分离株与禽腺病毒(FAdV)血清4型参考株同源性高达99.2%;动物回归实验剖检攻毒鸡可见心包积液、肝炎综合征等明显病理变化,与禽腺病毒4型感染出现病变一致。本研究分离获得的病毒为血清4型禽腺病毒(FAdV-4),进一步探究其致病机理提供了实验基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒 分离鉴定 血清4型 动物回归试验
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猪干扰素α的原核可溶性表达及抗PEDV活性
5
作者 朱睿 张弘石 +6 位作者 吴植 谢军 张蕾 覃光让 房崇琴 成大荣 朱善元 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期550-557,共8页
旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pE... 旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×10^(8)IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2^(-10.29),抗PEDV活性为2.72 IU,表明srPoIFN-α具有良好抗PEDV活性。这些结果为进一步开发可溶性IFNα药物制剂提供参考。 展开更多
关键词 原核表达 猪可溶性重组干扰素α 抗病毒活性 PEDV
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