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抗微生物肽Alloferon的研究进展
1
作者 洪伟鸣 左伟勇 +2 位作者 吴双 王健 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期14-15,共2页
Alloferon-1和Alloferon-2是分离自昆虫细胞的2个小肽,研究结果表明Alloferon-1和Alloferon-2具有抗病毒和抗肿瘤的活性。本文就Alloferon-1和Alloferon-2的抗病毒、抗肿瘤的作用效果及其在兽医临床上的应用进行了综述。
关键词 多肽 Alloferon 抗病毒 抗肿瘤
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鸡α-干扰素成熟肽的原核表达及其多价血清的制备 被引量：8
2
作者 王永娟 朱善元 +5 位作者 左伟勇 韩小英 吴双 王安平 洪伟鸣 黄文强 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期32-35,40,共5页
以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET32a-α诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清并以pGEX... 以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET32a-α诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清并以pGEX6p-α诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果表明:扩增的鸡α-干扰素成熟肽基因成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶12 000。其结果为制备安全、高效的重组干扰素奠定了基础,为定量检测机体内产生的α干扰素进而了解机体免疫状态提供较为可靠的技术手段。 展开更多
关键词 鸡 Α-干扰素 原核表达 抗体
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猪阴沟肠杆菌16SrRNA甲基化酶耐药基因分析 被引量：7
3
作者 陈琳 刘健华 +4 位作者 张俊丰 陈杖榴 曾振灵 魏冬霞 黄东璋 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期167-175,共9页
【目的】分析猪阴沟肠杆菌GZL41B中4种质粒介导的16SrRNA甲基化酶耐药基因及其水平传播方式;【方法】采用PCR及序列分析方法检测鉴定猪阴沟肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因。以大肠杆菌E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌进行接合试验研... 【目的】分析猪阴沟肠杆菌GZL41B中4种质粒介导的16SrRNA甲基化酶耐药基因及其水平传播方式;【方法】采用PCR及序列分析方法检测鉴定猪阴沟肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因。以大肠杆菌E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌进行接合试验研究16SrRNA甲基化酶耐药基因的水平传播方式。用微量稀释法测定原菌株及其接合子对18种抗菌药物的敏感性。用PCR及序列测定法分析比较来自同一猪腹泻直肠拭子阴沟肠杆菌GZL41B和大肠杆菌GZL41H的侧翼序列并对172株动物源大肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因流行情况进行调查。【结果】从阴沟杆菌中成功扩增出目的片段,该片段经限制性内切酶HindⅢ酶切后,出现与预期的531 bp和194 bp相符的两段片段,序列测定结果证实该基因为rmtB,GenBank登录号为EF017943。以E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌,成功地获得了接合子,该接合子经鉴定为大肠杆菌。原菌株和接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素等4,6-二脱氧链霉胺类高度耐药,其MIC均≥256μg.mL-1。大肠杆菌GZL41H中,rmtB的上游为Tn3转座子的部分序列,下游为肠炎沙门氏菌基因岛SGI1上融合酶编码基因groEL/intI1的部分序列orf1,而来源相同的阴沟肠杆菌GZL41B未扩增到与大肠杆菌GZL41H相同的侧翼序列。172株动物源大肠杆菌中,25株菌(15%)检出rmtB,1株菌(0.6%)检出armA;【结论】16SrRNA甲基化酶耐药基因rmtB首次出现在猪阴沟肠杆菌中,该基因介导猪阴沟肠杆菌对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷抗生素的高度耐药,并能通过接合方式在不同种属细菌间进行传播。rmtB在阴沟肠杆菌和大肠杆菌中传播的遗传背景存在差异。动物源大肠杆菌中rmtB广泛流行。 展开更多
关键词 猪 阴沟肠杆菌 16SRRNA甲基化酶 耐药 rmtB
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肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在组织中的分布 被引量：3
4
作者 吴双 左伟勇 +4 位作者 王永娟 王安平 洪伟鸣 黄文强 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期237-238,262,共3页
为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中... 为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中鸡Toll样受体2(chTLR2)基因的表达情况。结果表明:chTLR2主要分布于免疫组织系统中,chTLR2t1没有chTLR2t2表达得广泛。说明chTLR2可能参与了肠炎沙门氏菌感染的天然免疫反应过程。 展开更多
关键词 鸡 TOLL样受体2 肠炎 沙门氏菌 半定量RT—PCR
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仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病的临床试验 被引量：3
5
作者 洪伟鸣 郁杰 +2 位作者 左伟勇 葛竹头 宋亮 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期367-368,共2页
为了观察仔猪痢清口服液对仔猪大肠杆菌病的临床效果,对人工感染大肠杆菌的仔猪进行治疗性试验。用大肠杆菌O301对试验动物进行人工感染后,分为仔猪痢清低、中、高剂量治疗试验组进行观察。结果表明,仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病... 为了观察仔猪痢清口服液对仔猪大肠杆菌病的临床效果,对人工感染大肠杆菌的仔猪进行治疗性试验。用大肠杆菌O301对试验动物进行人工感染后,分为仔猪痢清低、中、高剂量治疗试验组进行观察。结果表明,仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病疗效可靠,效果明显。对人工感染引起的仔猪大肠杆菌病治愈率为90.0%,有效率达100%,并能显著降低仔猪的死亡率。 展开更多
关键词 仔猪痢清 大肠杆菌 仔猪 临床试验
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抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1
6
作者 左伟勇 洪伟鸣 +2 位作者 吴双 王安平 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第1期43-45,共3页
利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验... 利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验证明其具有良好的特异性和敏感性,利用Protein-G Sepharose亲和层析系统纯化单克隆抗体5D7,单克隆抗体5D7对CL的IC50约为4.6 ng/mL。 展开更多
关键词 盐酸克伦特罗 单克隆抗体 制备与鉴定 间接竞争ELISA
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伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗沙门氏菌感染的作用 被引量：1
7
作者 左伟勇 孟婷 +3 位作者 郭成东 朱善元 张源淑 洪伟鸣 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第5期984-987,共4页
选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV... 选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV组)和水解肽分离有效抑菌组分组(基础日粮+水解肽分离有效抑菌组分,V组)。预饲3 d后,除I组和II组外,其他各处理组灌喂液体总含氮量为10mg/mL,每只小鼠灌喂量均为0.5 mL。连续灌胃10 d后,于第11天将108CFU/mL的沙门氏菌分别灌喂除正常对照组的其他各组(剂量均为0.5 mL/只),24 h后采用摘除眼球法收集血液后,宰杀各组小鼠,取脾脏、肠黏膜,分析血清和脾脏中TNF-α、IL-6和肠黏膜组织中sIgA的变化。结果表明在小鼠发生沙门氏菌感染时,伴大豆球蛋白水解肽以及水解肽分离有效抑菌组分能显著降低小鼠血清TNF-α水平(P<0.05)和脾脏IL-6水平(P<0.01),提高脾脏TNF-α和肠道黏膜sIgA水平(P<0.01)。说明伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。 展开更多
关键词 伴大豆球蛋白 胃蛋白酶 水解肽 沙门氏菌
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vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制
8
作者 王永娟 左伟勇 +2 位作者 王安平 吴双 朱善元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1081-1085,共5页
为探索vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）复制的抑制作用,在前期研究基础上,将2个有效的vp2基因特异miRNA表达框分别克隆入含neo基因的pTarget载体中,获得miRNA单表达或双表达载体,重组载体转染DF-1细胞后经G418筛选、鸡传... 为探索vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）复制的抑制作用,在前期研究基础上,将2个有效的vp2基因特异miRNA表达框分别克隆入含neo基因的pTarget载体中,获得miRNA单表达或双表达载体,重组载体转染DF-1细胞后经G418筛选、鸡传染性法氏囊病毒Lurket株感染,通过半定量RT-PCR法、病毒滴定法分别检测vp2基因转录子的表达情况与细胞上清中的病毒TCID50.结果表明,vp2基因转录子水平明显降低,最高降低达80.7％,病毒TCID50可下降5lg2～6lg2.前期筛选到的2个vp2基因特异的miRNA在筛选过的细胞系中均能有效抑制病毒复制,为RNA干扰技术在鸡传染性法氏囊病的防治应用中奠定了基础. 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病毒 VP2基因 MIRNA RNA干扰
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禽源细胞中miRNA表达方法建立及基因沉默效率检测
9
作者 王永娟 朱善元 崔平福 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第6期59-62,共4页
从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRN... 从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRNA表达后,根据转染细胞中GFP阳性细胞数及荧光强度变化,比较鸡U6启动子在哺乳动物源和禽源细胞中介导的miRNA沉默效率。结果显示,pRFPRNAiGFP在哺乳动物和禽源细胞中都能表达抑制性miRNA,但在禽源细胞中的基因沉默效率较高。因此,pRFPRNAiC可作为禽源细胞中表达miRNA的载体,GFP则是检测沉默效率的很好的报告基因,本研究为在禽源细胞中进行RNAi研究创建了平台。 展开更多
关键词 禽U6启动子 GFP MIRNA 细胞种属特异性
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重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用
10
作者 王永娟 朱善元 +2 位作者 黄文强 洪伟鸣 左伟勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第2期65-67,共3页
在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病... 在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、白色念珠菌进行体外抑菌活性试验,研究重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用。结果表明,溶菌酶基因能在重组禽腺联病毒中高效表达,这为进一步探索溶菌酶作为新型兽用生物药物奠定了基础。 展开更多
关键词 重组禽腺联病毒 溶菌酶 病原菌 抑菌作用
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