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PCR技术检测猪肺炎支原体的研究进展 被引量：16
1
作者 张旭 白方方 +5 位作者 武昱孜 刘茂军 冯志新 熊祺琰 张映 邵国青 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期54-60,共7页
猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是引起猪支原体肺炎的重要病原,该病常引起继发感染和混合感染,严重威胁养猪业发展,造成巨大的经济损失。利用PCR技术对猪支原体肺炎早期正确诊断具有非常重要的意义。从猪肺炎支原体的特异性靶... 猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是引起猪支原体肺炎的重要病原,该病常引起继发感染和混合感染,严重威胁养猪业发展,造成巨大的经济损失。利用PCR技术对猪支原体肺炎早期正确诊断具有非常重要的意义。从猪肺炎支原体的特异性靶基因、临床样品采集方法与样品DNA处理方法、关键技术因素及普通PCR技术、多重PCR技术、套式PCR技术、荧光定量PCR技术、芯片检测和环介导等温扩增技术等在猪肺炎支原体检测中的研究进展、主要优缺点及应用进行综述。 展开更多
关键词 猪支原体肺炎 猪肺炎支原体 PCR检测 临床样品采集
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次黄嘌呤核苷酸脱氢酶对猪链球菌2型GN061215生物学特性及蛋白质表达的影响 被引量：1
2
作者 周俊明 何孔旺 +7 位作者 倪艳秀 张雪寒 杨志彪 祝昊丹 温立斌 俞正玉 茅爱华 吕立新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期114-120,共7页
为了了解次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)对猪链球菌2型GN061215致病力的影响机制,利用同源重组技术,敲除猪链球菌2型GN061215的impdh基因,重组后的GN061215命名为GN061215(△IMPDH),比较GN061215与GN061215(△IMPDH)培养特性、生化特性、... 为了了解次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)对猪链球菌2型GN061215致病力的影响机制,利用同源重组技术,敲除猪链球菌2型GN061215的impdh基因,重组后的GN061215命名为GN061215(△IMPDH),比较GN061215与GN061215(△IMPDH)培养特性、生化特性、致病力以及基因转录水平差异。结果显示impdh基因敲除后,引起GN061215生长曲线迟缓期延长,降低了GN061215生长曲线平台期OD600峰值,同时截短了GN061215菌株成链长度;GN061215、GN061215(△IMPDH)对46种代谢底物利用能力一致,对2种代谢底物利用存在差异;GN061215(△IMPDH)对Balb/c小鼠的致病力较GN061215菌株有一定程度的下降。SDS-PAGE显示GN061215(△IMPDH)菌体的粗提蛋白质条带较GN061215有显著减少;基因芯片比较GN061215、GN061215(△IMPDH)基因转录差异发现,下调基因中存在36个关联核糖体大、小亚基合成的基因,而在上调基因中不存在该类基因,表明impdh基因的丢失影响了GN061215菌株核糖体大、小亚基的合成,进而显著减少了GN061215菌株菌体蛋白质的表达,这可能与GN061215菌株毒力的下降有关。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 次黄嘌呤核苷酸脱氢酶 核糖体蛋白质 表达谱芯片
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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：16
3
作者 武昱孜 熊祺琰 +5 位作者 刘蓓蓓 张珍珍 王佳 华利忠 韦艳娜 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1491-1498,共8页
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测... 建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%,重复性好。检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%,鼻拭子阳性率22%,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%;猪鼻支原体的肺阳性率为40%,鼻拭子阳性率66%,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪鼻支原体 双重荧光定量PCR
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从山羊持续性腹泻病例中分离到边界病病毒(BDV) 被引量：6
4
作者 李文良 毛立 +4 位作者 张纹纹 张则斌 赵永前 何孔旺 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期222-224,共3页
边界病（Border disease）是由边界病病毒（Border disease virus，BDV）引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病，最早发现于英格兰与威尔士边界地区，故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征，如不孕、流产、死... 边界病（Border disease）是由边界病病毒（Border disease virus，BDV）引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病，最早发现于英格兰与威尔士边界地区，故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征，如不孕、流产、死产、产出弱小胎儿、羔羊先天震颤、骨骼异常和多毛[1]。 展开更多
关键词 边界病 山羊 腹泻 进化分析
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猪链球菌2型对细胞粘附作用及粘附因子转录水平分析 被引量：4
5
作者 汪伟 何孔旺 +3 位作者 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期2093-2098,共6页
本研究中主要采用粘附计数和目前已发表的粘附因子,通过检测它们mRNA相对转录水平,研究了SS2粘附PK-15细胞、HEp-2细胞及PIEC的能力。结果显示,总体强毒株对细胞的粘附能力较强,无毒株对细胞没有粘附能力,但这不是绝对的,并初步在mRNA... 本研究中主要采用粘附计数和目前已发表的粘附因子,通过检测它们mRNA相对转录水平,研究了SS2粘附PK-15细胞、HEp-2细胞及PIEC的能力。结果显示,总体强毒株对细胞的粘附能力较强,无毒株对细胞没有粘附能力,但这不是绝对的,并初步在mRNA水平上阐明SS2粘附细胞能力差异的原因。这为后续研究SS2粘附机制及了解SS2感染后的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 粘附作用 粘附因子 细胞培养 荧光定量PCR
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猪鼻拭子与支气管肺泡灌洗液用于呼吸道分泌性抗体检测 被引量：3
6
作者 冯志新 张亚 +7 位作者 华利忠 甘源 刘茂军 王海燕 韦艳娜 白昀 王占伟 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期219-221,共3页
黏膜免疫是机体抵抗细菌或病毒感染的第一道防线[1]。因此，检测黏膜免疫反应对评估黏膜接种方案和病原与宿主之间的相互关系具有重要的意义[2]。目前，支气管。肺泡灌洗液样本（BALF）在下呼吸道样本的采集中占有重要的地位，也是目前... 黏膜免疫是机体抵抗细菌或病毒感染的第一道防线[1]。因此，检测黏膜免疫反应对评估黏膜接种方案和病原与宿主之间的相互关系具有重要的意义[2]。目前，支气管。肺泡灌洗液样本（BALF）在下呼吸道样本的采集中占有重要的地位，也是目前评价呼吸道黏膜免疫的常用样本。 展开更多
关键词 鼻拭子 支气管肺泡灌洗液 抗体检测
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类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析 被引量：2
7
作者 温立斌 王凤芝 +10 位作者 何孔旺 倪艳秀 张雪寒 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 解建平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期160-163,共4页
为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RN... 为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。 展开更多
关键词 类猪圆环病毒P1 转录分析 NORTHERN BLOT
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黏膜抗体在疫苗免疫效力评价中的前景 被引量：1
8
作者 张亚 冯志新 +4 位作者 张道华 刘茂军 白方方 王海燕 邵国青 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期41-47,共7页
简单介绍目前疫苗效力检验的方法、黏膜抗体的功能及其在实验室疫苗效果效力评价中的应用,提出了黏膜抗体作为疫苗免疫效力试验的替代指标或免疫监测的主要抗体的建议。
关键词 黏膜抗体 SIGA 免疫效力 免疫监测
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