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心肌Heidenhain染色诊断早期心肌缺血的实验观察 被引量：4
1
作者 胡志红 吴萍 王庭 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期642-644,共3页
目的探讨铁矾苏木精伊红(Heidenhain)染色对急性心肌缺血早期诊断的可行性,旨在为法医病理学鉴定提供简便实用的检测方法和客观确凿的形态学依据。方法应用结扎家兔心脏左冠状动脉制作急性心肌缺血动物模型,采用Heidenhain染色,镜检观... 目的探讨铁矾苏木精伊红(Heidenhain)染色对急性心肌缺血早期诊断的可行性,旨在为法医病理学鉴定提供简便实用的检测方法和客观确凿的形态学依据。方法应用结扎家兔心脏左冠状动脉制作急性心肌缺血动物模型,采用Heidenhain染色,镜检观察心肌缺血后不同时间段心肌形态变化,结合血清中检测脂肪酸结合蛋白含量变化,研究其与心肌缺血时间、范围之间的相关性。结果在冠状动脉结扎15 min时,血清中心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)含量即有升高,Heidenhain染色显示缺血心肌点状黑染,主要分布于心室壁心外膜下浅肌层,随着心肌缺血时间延长,血清中H-FABP含量逐渐增高,Heidenhain染色显示黑染着色区域扩大,冠状动脉结扎3 h后,结扎区域大部分或心肌全层心肌纤维黑染,呈片状、团块状分布。结论心肌Heidenhain染色形态观察对早期心肌缺血有诊断价值,效果优于HE染色。 展开更多
关键词 心肌缺血 Heidenhain染色 心型脂肪酸结合蛋白 酶联免疫吸附实验
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抗结核治疗中预防应用保肝药临床试验的中文文献系统评价 被引量：12
2
作者 黄爱君 夏情情 +2 位作者 詹思延 张耀文 舒正 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期826-827,共2页
我国结核病负担较高，每年仅新发现的初复治病例即达98万，加上原患未治愈者，每年接受治疗的病例超过100万。抗结核治疗使用的一、二线药物均可引起不良反应，其中影响最大且发病率较高的为肝损害。为避免肝损害的发生，目前我国临床... 我国结核病负担较高，每年仅新发现的初复治病例即达98万，加上原患未治愈者，每年接受治疗的病例超过100万。抗结核治疗使用的一、二线药物均可引起不良反应，其中影响最大且发病率较高的为肝损害。为避免肝损害的发生，目前我国临床上常在抗结核治疗开始时，即予保护肝脏的药物。这种预防性使用在其他国家极为少见， 展开更多
关键词 抗结核药 肝损伤 临床试验 保肝药
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原癌基因USP22启动子的克隆及转录活性分析 被引量：2
3
作者 熊建军 周英妹 +2 位作者 干丽君 龚帧 林玲 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期580-583,共4页
目的克隆原癌基因USP22部分启动子序列,探讨其转录活性。方法应用cDNA5′末端快速扩增(5′RACE)方法定位USP22基因转录起始点;在此基础上针对其5′端非编码区处包括转录起始点在内的-2828^+52片段进行PCR扩增,产物克隆入荧光素酶表达载... 目的克隆原癌基因USP22部分启动子序列,探讨其转录活性。方法应用cDNA5′末端快速扩增(5′RACE)方法定位USP22基因转录起始点;在此基础上针对其5′端非编码区处包括转录起始点在内的-2828^+52片段进行PCR扩增,产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic。重组质粒与内参质粒pRL-TK共转染HepG2与Hela细胞,双荧光素酶活性检测确定其转录活性。结果成功确定USP22基因转录起始位点,酶切及测序结果证实USP22基因5′端非编码区2880bp序列正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic。重组质粒pGL3-USP22promoter转染HepG2细胞和Hela细胞后,检测到荧光素酶的高表达(P<0.05)。结论成功构建具有转录活性的USP22启动子片段,为进一步研究USP22表达调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 USP22基因 启动子 报告基因
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粟米草中抗肿瘤的活性成分研究 被引量：1
4
作者 刘可越 刘海军 +4 位作者 吴家忠 高春华 刘建云 李雪芹 周斌 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1628-1631,共4页
目的:研究粟米草(Mollugo pentaphylla L.)中的化学成分并对其抗肿瘤活性进行测试。方法:利用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20,PHPLC等手段对粟米草化学成分进行系统分离,通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构;并采用四甲基偶氮唑盐比色法(... 目的:研究粟米草(Mollugo pentaphylla L.)中的化学成分并对其抗肿瘤活性进行测试。方法:利用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20,PHPLC等手段对粟米草化学成分进行系统分离,通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构;并采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和琼脂糖凝胶电泳法,研究化合物体外对Hela肿瘤细胞增殖的影响。结果:从粟米草中分离得到了5个化合物,经IR、NMR、MS等波谱方法分别鉴定为表木栓醇(epi-friedelanol)(1)、三十一烷醇(hentriacon-tanol)(2)、β-谷甾醇(β-sitosterol)(3)、牡荆素(vitexin)(4)、槲皮素(quercetin)(5)。药理实验结果发现化合物1,4,5对Hela肿瘤细胞增殖有显著抑制作用,且成一定剂量依赖关系,IC50分别为216.0μg/mL、102.4μg/mL、92.2μg/mL。并对活性最强的化合物5处理的Hela细胞进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示明显的细胞凋亡"梯状"条带,提示槲皮素抑制Hela细胞是通过诱导其凋亡。结论:化合物1,3,5为首次自粟米草中分离得到,化合物1,4,5具有显著抑制人宫颈癌Hela细胞增殖活性,实验证明化合物5具有诱导细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 粟米草 化学成分 抗肿瘤活性 凋亡
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ERK通路对PHA诱导人外周血单个核细胞中USP22基因表达的影响 被引量：1
5
作者 张敏 龚帧 +1 位作者 李卫东 熊建军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第34期4236-4238,4243,共4页
目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)对植物血凝素(PHA)诱导人外周血单个核细胞USP22基因表达的调控作用。方法不同浓度PHA刺激人外周血淋巴细胞,Western blot检测ERK1/2的磷酸化水平及USP22蛋白表达;ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059预处理细胞,... 目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)对植物血凝素(PHA)诱导人外周血单个核细胞USP22基因表达的调控作用。方法不同浓度PHA刺激人外周血淋巴细胞,Western blot检测ERK1/2的磷酸化水平及USP22蛋白表达;ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059预处理细胞,Western blot和RT-PCR分别检测PHA诱导的USP22蛋白及mRNA的表达。结果 Western blot显示受PHA刺激后,人外周血单个核细胞USP22和P-ERK1/2蛋白的表达水平均高于对照组;而p-ERK1/2抑制剂阻断ERK磷酸化水平,进而下调USP22蛋白及mRNA表达水平。结论 ERK1/2信号通路参与PHA对人外周血单个核细胞USP22基因的转录激活。 展开更多
关键词 植物血凝素 ERK1/2 USP22 外周血单个核细胞
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地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染及细胞因子分泌的影响 被引量：1
6
作者 汪涛 李金福 +4 位作者 李兴暖 梅钧 龙锴 汤自豪 赵志军 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期29-33,共5页
为探讨地塞米松(DXM)对大鼠腹腔巨噬细胞抗刚地弓形虫(T.gondii)和细胞因子分泌的影响,将大鼠随机分为2组,即DXM注射组和空白对照组,连续注射6d,再抽取腹腔巨噬细胞后分为4组,即DXM组和DXM+T.gondii感染组;对照组和T.gondii感染组。通过... 为探讨地塞米松(DXM)对大鼠腹腔巨噬细胞抗刚地弓形虫(T.gondii)和细胞因子分泌的影响,将大鼠随机分为2组,即DXM注射组和空白对照组,连续注射6d,再抽取腹腔巨噬细胞后分为4组,即DXM组和DXM+T.gondii感染组;对照组和T.gondii感染组。通过瑞-吉染色观察T.gondii在巨噬细胞内的增殖;并用半定量RT-PCR检测DXM组和对照组的大鼠腹腔巨噬细胞IFN-γ、TNF-α和IL-2mRNA表达情况用ELISA检测4个试验组细胞培养上清液中3种细胞因子的含量。结果显示,在正常大鼠腹腔巨噬细胞内T.gondii不增殖反而减少,而在DXM注射大鼠后巨噬细胞内T.gondii大量增殖;同时与T.gondii感染免疫密切相关的这3种细胞因子mRNA及其蛋白的表达均被DXM明显抑制。试验表明,大鼠腹腔巨噬细胞对T.gondii具有明显的抗性;但DXM又可诱发腹腔巨噬细胞易感T.gondii,这一结果与细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2表达下调有关。 展开更多
关键词 地塞米松 大鼠腹腔巨噬细胞 弓形虫 细胞因子
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泛素特异水解酶22基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定 被引量：2
7
作者 熊建军 干丽君 +3 位作者 林玲 龚帧 吴周环 李卫东 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期166-169,共4页
目的构建泛素特异水解酶22基因(USP22)RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,并观察其对肝癌细胞株HepG2增殖的影响。方法根据USP22 mRNA序列,合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入质粒载体pMSCV/Hyg/U6。酶切和测序鉴定重组质粒pMSCV/Hyg/siUSP22... 目的构建泛素特异水解酶22基因(USP22)RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,并观察其对肝癌细胞株HepG2增殖的影响。方法根据USP22 mRNA序列,合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入质粒载体pMSCV/Hyg/U6。酶切和测序鉴定重组质粒pMSCV/Hyg/siUSP22。脂质体介导重组质粒转染HepG2细胞,RT-PCR和Western blot检测USP22基因mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖能力。结果经酶切鉴定筛选出的重组质粒测序结果与目的序列完全一致。该重组质粒转染能降低HepG2细胞USP22 mRNA及蛋白质表达,并抑制细胞增殖。结论成功构建USP22基因RNAi真核表达载体,该载体通过下调USP22基因表达,抑制HepG2细胞的增殖能力,为进一步研究USP22的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 泛素特异水解酶22基因 RNA干扰 HEPG2细胞
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蜡样芽孢杆菌总蛋白双向电泳方法的建立和优化 被引量：2
8
作者 刘频健 陈静 +1 位作者 姜登钊 周英棠 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期942-945,953,共5页
目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解... 目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响。结果与结论采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4～7的IPG胶条,采用80μg上样量进行等电聚焦,于60 V 15 min、120 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱,建立一套用于B.cereus蛋白质组分析的双向电泳方法。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 蛋白质组 双向电泳 细胞裂解液 优化
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USP22基因克隆及其融合蛋白真核表达载体的构建 被引量：1
9
作者 熊建军 干丽君 +2 位作者 龚帧 林玲 李卫东 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期406-409,共4页
目的克隆人类泛素水解酶22（ubiquitin—specific processing enzyme22，USP22）基因，构建与绿色荧光蛋白融合表达的真核载体。方法利用RT—PCR技术以HeLa细胞总RNA为模板分别扩增USP22基因cDNA序列两片段，依次插入真核表达载体pEGFP... 目的克隆人类泛素水解酶22（ubiquitin—specific processing enzyme22，USP22）基因，构建与绿色荧光蛋白融合表达的真核载体。方法利用RT—PCR技术以HeLa细胞总RNA为模板分别扩增USP22基因cDNA序列两片段，依次插入真核表达载体pEGFP—N1；重组质粒转染HEK293T细胞，观察融合蛋白表达及绿色荧光的分布。结果测序结果显示USP22序列与GenBank收录数据一致，酶切显示重组质粒pEG—FP—USP22构建无误，质粒转染后有80％左右HEK293T细胞表达绿色荧光，且在胞质与胞核中广泛分布。结论成功克隆USP22基因并构建与GFP融合表达的真核载体，为进一步深入研究USP22基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 泛素水解酶22基因 融合蛋白 基因的表达与调控
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Sp1真核表达载体的构建及对USP22基因转录活性的影响
10
作者 张敏 周英妹 +2 位作者 龚帧 陈惠 熊建军 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期429-432,共4页
目的 克隆人sp1基因,构建真核表细胞达载体pVAX-Sp1,研究其对USP22基因转录活性的影响.方法 Trizol试剂快速提取人肝癌细胞株HepG2总RNA,经RT-PCR扩增Sp1基因序列,与pVAX1真核表达载体连接;测序、酶切鉴定重组载体;pVAX1-Sp1与含USP22... 目的 克隆人sp1基因,构建真核表细胞达载体pVAX-Sp1,研究其对USP22基因转录活性的影响.方法 Trizol试剂快速提取人肝癌细胞株HepG2总RNA,经RT-PCR扩增Sp1基因序列,与pVAX1真核表达载体连接;测序、酶切鉴定重组载体;pVAX1-Sp1与含USP22启动子的萤光素酶报告质粒共转染HepG2细胞,双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性表达.结果 测序及酶切结果显示重组质粒pVAX1-Sp1构建成功;高表达sp1可使USP22启动子的转录活性降低（P＜0.01）.结论 成功构建了sp1真核表达质粒,sp1对USP22启动子具有转录抑制作用. 展开更多
关键词 sp1基因 USP22基因 RT—PCR 启动子 萤光素酶
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